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工业上用什么方法去除核酸

发布时间:2022-04-23 23:23:44

Ⅰ 去除核酸中蛋白质的方法有哪些

可以用氯仿抽提之后离心啊,这样的话,离心后分三层,下层有机层中有一些脂溶性的杂质,中间层白色絮状沉淀是蛋白,上清液中即含有核酸;
现在也有很多试剂盒,是可以把核酸挂在柱子上,把蛋白质等杂质离心掉,这个方法即快捷又方便。(摘抄自网络,供参考)

Ⅱ 提蛋白时如何去掉核酸

这跟你提取蛋白质的方法有关。
如用蛋白质等电点沉淀法,那么蛋白质沉淀了,核酸还在水溶液中,离心弃上清液便可去掉核酸。
因此 设计实验的时候,要综合考虑蛋白质的特性和核酸特性。
如果你有已知方法 可拿出来探讨一下。

Ⅲ 怎样提取核酸中DNA,RNA

高中生物必修2中有DNA的粗提取实验,你可以去看看。
DNA:1.实验材料必须准备充足。本实验所用的实验材料是鸡血细胞液,由活鸡的鲜血经沉淀后获得。每组(2个学生)需用5 mL 鸡血细胞液,则每班(50人)至少需要130 mL,而鸡血细胞液与鸡血的体积比为1:3,这样每班至少需要390 mL 鸡血细胞液。宰杀1只中等大小的活鸡,一般可得120 mL 左右的鲜血,因此,1个班实验需要买4只活鸡。如果不具备购买活鸡的条件,也可以到市场售活鸡处去索取鸡血,但所带烧杯中必须提前放入抗凝剂。

2.盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。

3.获取较纯净的DNA的关键步骤。

(1)充分搅拌鸡血细胞液DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸馏水混合以后,必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌,使鸡血细胞加速破裂,并释放出DNA。

(2)沉淀DNA时必须用冷酒精实验前必须准备好大量的体积分数为95%的酒精,并在冰箱(至少5S以下)中至少存放24 h。

(3)正确搅拌含有悬浮物的溶液实验步骤3、5、7,都需要用玻璃棒搅拌。教师应提醒学生注意,在进行步骤3、5时,玻璃棒不要直插烧杯底部,而且搅拌要轻缓,以便获得较完整的DNA分子。进行步骤7时,要将玻璃棒插入烧杯中溶液的中间,用手缓慢转动510 min。

RNA:酵母RNA的提制(浓盐法)
一、目的
学习和掌握从酵母中提制RNA的原理和方法,以加深对核酸性质的认识。
二、原理
酵母含 RNA 2.67%~10.0%,DNA很少(0.03%~0.516%),而且菌体容易收集,RNA也易于分离,所以选用酵母为实验材料。
RNA提制过程是先使RNA从细胞中释放,并使它和蛋白质分离,然后将菌体除去。再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质,将pH调至2.0~2.5,使RNA沉淀,进行离心收集。
提取RNA的方法很多,在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。前者利用稀碱溶解细胞壁,使RNA释放出来,这种方法提取时间短,但RNA在此条件下不稳定,容易分解;后者在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA释放出来,此法易掌握,产品颜色较好。
三、仪器、试剂和材料
1.仪器
(1)量筒(50ml)
(2)三角瓶(100ml)
(3)烧杯(250ml,50ml,10ml)
(4)布氏漏斗(40mm)
(5)吸滤瓶(125ml)
(6)表面皿(6cm)
(7)751型分光光度计
(8)离心机(4000r/min)
(9)恒温水浴
(10)药物天平
(11)烘箱
2.试剂
(l)NaCl(化学纯)
(2)6mol/L HCI
(3)95%乙醇(化学纯)
3.材料
鲜酵母或干酵母;pHO.5~5.0的精密试纸。
四、操作步骤
1.提取
称取鲜酵母 159或干酵母粉 2.5g,倒入 100ml三角瓶中,加 NaCl 2.5g,水25ml,搅拌均匀,置于沸水浴中提取lh。
2.分离
将上述提取液用自来水冷却后,装入大离心管内,以4000r/min离心10min,使提取液与菌体残渣等分离。
3.沉淀RNA
将离心得到的上清液倾于50ml烧杯内,并置入放有冰块的250ml烧杯中冷却.待冷至10℃以下时,用6mol/L HCI 小心地调节pH值至2.0~2.5(注意严格控制pH)。调好后继续于冰水中静置10min,使沉淀充分,颗粒变大。
4.洗涤和抽滤
上述悬浮液以 4000r/min离心 10min,得到 RNA沉淀。将沉淀物放在 10ml小烧杯内,用95%的乙醇 5~10ml充分搅拌洗涤,然后在布氏漏斗上用射水泵抽气过滤,再用 95%乙醇5~10ml淋洗 3次。
5.干燥
从布氏漏斗上取下沉淀物,放在6cm表面皿上,铺成薄层,置于80℃烘箱内干燥。将干燥后的RNA制品称重,存放于干燥器内。
6.含量测定
将干燥后RNA产品配制成浓度为 10—50pg/ml的溶液,在751型分光光度
计上测定其260nm处的吸光度,按下式计算RNA含量:

式中,A260为260nm处的吸光度;L为比色杯光径(cm);0.024为lml溶液含lμg
RNA的吸光度。
五、结果处理
根据含量测定的结果按下式计算提取率

六、注意事项
1.用浓盐法提取RNA时应注意掌握温度,避免在20~27℃之间停留时间过长,因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用活跃的温度范围,会使RNA降解而降低提取率。
2.加热至90~100℃使蛋白质变性,破坏两类磷酸酯酶,有利于RNA的提取。

Ⅳ 核酸的提取方法有几种

DNA的提取方法有7种:酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒缠绕法、异丙醇沉淀法、表面活性剂快速制备法、加热法快速制备、碱变性快速制备。核酸是一类生物聚合物,是所有已知生命形式必不可少的组成物质。核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称。
脱氧核糖核酸(英文DeoxyriboNucleicAcid,缩写为DNA)是生物细胞内含有的四种生物大分子之一核酸的一种。DNA携带有合成RNA和蛋白质所必需的遗传信息,是生物体发育和正常运作必不可少的生物大分子。DNA由脱氧核苷酸组成的大分子聚合物。脱氧核苷酸由碱基、脱氧核糖和磷酸构成。其中碱基有4种:腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)和胞嘧啶(C)。

Ⅳ 核酸的分离方法有什么

核酸(nucleic acid)是遗传信息的携带者,是基因表达的物质基础.无论是进行核酸结构还是功能研究,首先需要对核酸进行分离和纯化.核酸样品质量将直接关系到实验的成败.核酸分离、纯化原则:1.保持核酸分子一级结构的完整性.因为遗传信息全部储存在一级结构之中,核酸的—级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式.2.分离核酸原则:1)温度不要过高;2)控制pH值范围(pH值5-9); 3)保持一定离子强度; 4)减少物理因素对核酸的机械剪切力.
在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键,破坏核酸一级结构.所用器械和一些试剂需高温灭菌,提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂.
常用的DNA酶抑制剂有1.金属离子螯合剂:如EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)、8-羟基喹啉.2.阴离于型表面活性剂如SDS,该试剂除对核酸酶有抑制作用外,还能使蛋白质变性,并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物,该复合物在高盐溶液中沉淀.
常用的RNA酶(RNAase)抑制剂有:1.皂土(bentonite )作用机制:皂土带负电荷,能吸附RNase,使其失活.2. DEPC(二乙基焦碳酸盐) (C2H5OCOOCOOC2H5)粘性液体,很强的核酸酶抑制剂.作用机制:与蛋白质中His结合使蛋白变性.

Ⅵ 去除核酸中的蛋白质的方法有哪些

想要在已经抽提的蛋白标本中去除核酸,可以考虑以下几种方法:

  1. 凝胶过滤,这是很容易去除小分子杂质物质的方法。

  2. 如果蛋白样本和核酸的分子大小差别比较大,可以考虑用超滤的方法。

    超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一,以大分子与小分子分离为目的。

  3. 加入核酸酶消化三个小时。

    比如加一定量的DNAase 和RNAse酶消化。

  4. 核酸用AIEX也可以除去,不过要选择合适的pH值。

  5. 使用超声把核酸降解。

  6. 用氯仿抽提之后离心。

Ⅶ 如何除实验室核酸污染

实验室去除核酸污染推荐采纳欧菲姆OXY-30000的过氧化氢干雾消毒方案,它巧妙地利用了特殊的干雾灭菌设备+诺福过氧化氢杀孢子剂(高纯低浓度)的完美配合,组成无懈可击的空间清洁消毒方案。
而过氧化氢消毒技术当中,据大数据得知,采用全球领先干雾技术打造的欧菲姆OXY-30000消毒机,是行业专业消毒去除PCR核酸污染的佼佼领航者。OXY-30000精妙之处在于其专业的解决方案,避免了过氧化氢蒸汽的腐蚀性以及解决了扩散性问题。其特点为:1、灭菌效果好,生物指示剂挑战降低6lg对数值,能彻底杀灭环境中的MRSA、VRE、结核分枝杆菌、芽孢、病毒和多重耐药的革兰阴性菌(鲍曼不动杆菌);2、活性氢氧基团能氧化DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物质,而诺福过氧化氢杀孢子剂中的活性银离子,可以抑制DNA聚合酶等有害病菌的生长,从而更有效的防止外源DNA的干扰;
3、1.5小时完成灭菌,人员可进入。预防核酸实验室环境空气污染及核酸片气溶胶污染,及快速高效去除实验室核酸污染源;4、小于3微米干雾气体,扩散性优越,能扩散到每一个角落,空气中做布朗运动,消毒干雾无孔不入,专门对付小分子核酸污染源物质;
具备国际化的CNAS检测报告和消毒产品备案,可以提供完善的符合欧盟GMP要求的验证文件和报告。

Ⅷ 蛋白纯化怎么去除核酸

1、根据所选蛋白的性质,选择合适的介质和条件,想办法把蛋白结合在柱子上,(有tag的话用这个方法最好了),然后用高盐(0.5-3M NaCl)洗,一般会洗下来一个峰,就是被洗下来的核酸了。
2、试试在高盐条件下加Mn2+,因为高盐可以让核酸和蛋白分离,而Mn2+对核酸沉淀有一定的效果。
但是要十分小心的是,这类蛋白本身的天然性质就是要结合核酸的,有的时候核酸去除干净了,蛋白也沉淀了,所以没那么容易,很多小条件要结合所选的蛋白自己去摸索。

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