培养液是否染菌的分析方法有哪些

‘壹’ 怎么判断发酵过程的染菌是由哪种微生物引起的

发酵染菌原因分析

第一部分：基础知识

1）杂菌的类型

空气中的微生物大多数是细菌和芽孢,还有一定数量的霉菌、酵母和病毒。细菌的大小有零点几微米至几个微米,见表5-3。

根据以上特点我们应得出如下结论：

A：这些微生物在空气中极少单独游离存在,基本上是附着于灰尘、液滴等微粒的表面上。 B：介质过滤除菌就是把空气中的各种微粒和极少量的游离微生物捕集起来予以除掉。 因此我们通常所用的空气过滤器为什么0.3u可以保证无菌发酵生产的原因。 2）无菌检查与染菌的处理

在抗生素生产过程中,为了及早发现染菌并进行恰当处理,保证生产正常进行,对菌种制备、种子罐、发酵罐的接种前后和培养过程中,须要按工艺规程要求按时取样，进行无菌检验。 A：无菌检查

培养液是否污染杂菌可从三个方面进行分析：

a:无菌试验

b:培养液的显微镜拉查 c:培养液的生化指标变化情况。 其中无菌试验是判断染菌的主要依据。

无菌试验

现在采用的无菌试验方法有肉汤培养法、双碟培养法、斜面培养法。其中以酚红肉汤培养法和双碟培养法结合起来进行无菌检查用的较多。

(1)肉汤培养法 直接用装有酚红肉汤的无菌试管取样,然后放入37℃恒温室(箱)内培养。定时观察试管内肉汤培养基的颜色变化,同时进行显微镜观察。

（2）斜面培养法 先用空白无菌试管取样,然后在无菌条件下接种于斜面培养基上,置于37℃恒温室(箱)内培养。定时观察有无杂菌菌落生长。。

（3）双碟培养法 种子罐样品先取入肉汤培养基中,然后在无茵条件下在双碟培养基上面划线,剩下的肉汤培养物在恒温室(箱)内培养6小时后复划线一次,发酵罐培养液直接取入空白无菌试管中,于37℃下培养6小时后在双碟培养基上划线。24小时内的双碟定时在灯光下检查有无杂菌生长。24小时~48小时的双碟1天检查一次,以防生长缓慢的杂菌漏检。正常生产过程中,种子罐和发酵罐每隔8小时取样一次,进行无菌检查。该方法经常用于单菌落挑选，可以从染有杂菌的培养液中经多次划线挑取单菌落进行分离培养，得到纯种的种子。

‘贰’ 如何判断液体培养基是不是染菌,有哪些方法可以检测

除了镜检，还有更为放心的，就是将属于正常的菌体的引物来做16s的PCR作为对照，然后将通用引物来做所有菌的16s的PCR，让上述一起跑胶，看看是几条条带，如果是一条且在同一位置就是纯菌，其他的均为染菌了

‘叁’ 检验植物组织培养基是否有杂菌

1. 刚配置的培养基，进行空白检测，即将配好的培养基放置于37度培养基进行48-72小时培养，如果长杂菌，就可以直接看的到；

2. 接种后的培养基，主要从接种完成后进行观察，正常情况下，培养基是透明的，如果接种的外植体会发生褐变的话，培养基会变成深红色或暗褐色，其余一般与步骤1中的检测会一致。

3. 霉菌会有毛绒绒的菌毛，细菌一般呈现不同颜色的斑点（菌落），细菌污染严重的，会导致培养基变软，成液体状。
   

‘肆’ 液体培养 染菌

您好, 照您所说的液体培养基灭菌后,不管你是做什么接种实验,一定要等冷却后再进行接种,所以接种后出现污染就与用水冷却无关!

液体培养比固体培养更容易污染!

首先请考虑[1.) 如果只是个别的接种后出现污染,而大部分都没出现污染,就说明是在接种个别培养基时失误造成的; 2.) 如果全部都出现污染,就有可能是液体培养基在灭菌过程中不彻底,在这里,我建议下次你做实验时做一个对照,就是不进行接种的液体培养基,如果对照也污染了,那就是灭菌和震荡培养箱清洁度的问题了;]

以下原因都会导致接种液体培养接种后出现污染:
1. 检查您的灭菌程序是否正确
2. 接种室的清洁程度(如果长期不进行消毒,空气中的杂菌会越来越多,特别是在真菌培养的实验室内!)
3. 接种时的操作是否规范,这里就不过多讲了,估计你也是经常操作的
4. 震荡培养箱要定期打扫, 因为放置液体培养基的震荡培养箱中必须有水,而水中有大量的微生物,液体培养瓶放在里面很容易被污染的
5. 灭菌前,在倒液体培养基时,要注意培养液不要倒在接近瓶口的地方,如果瓶口沾到培养液要立即用酒精擦干净
6. 培养液不要倒得过多,过多的培养液在液体振荡培养过程中也有可能使液体沾到棉塞上,从而导致污染

大概就是这些了,以前我也是做过真菌实验的,一些实验心得和你分享了

‘伍’ 培养的H441细胞到传代的时候发现细胞染菌严重，怎么破啊，求大神，感觉操作上没有什么问题

如果不是操作问题，可以从两方面找原因
第一，你用培养基，血清，还有pbs是不是有问题，可以取少量培养基，血清，pbs在细胞培养箱中培养过夜，24h，48h，分别观察是否染菌
第二，就是细胞培养室大环境染菌，在这种情况下，实验室其他人培养细胞是否普遍染菌，还可以将培养基放入细胞培养箱中，观察染菌状况，如果是大环境污染较重，可以采取熏蒸等灭菌。

‘陆’ 进行菌种质量检测的常用方法有哪些

1、直接观察。对引进菌种观察包装是否合乎要求，棉塞有无松动，试管、玻璃瓶和塑料袋有无破损，棉塞和管、瓶或袋中有无病虫侵染，菌丝色泽是否正常，有无发生变化。然后在瓶塞边作深吸气，闻其是否具备特有的香味。原种和栽培种可取出小块菌丝体观察其颜色和均匀度，并用手指捏料块检验含水量是否符合标准。

2、显微镜检验。若菌丝透明，呈分枝状、有横隔、锁状联合明显，再加上具有不同品种固有的特征，则可认为是合格菌种。

3、观察菌丝长速。将供测的菌种接入新配制的试管斜面培养基上，置于最适宜的温、湿度条件下进行培养，如果菌丝生长迅速、整齐浓密、健壮有力，则表明是优良菌种，否则即是劣质菌种。

优质菌种的标准

食用菌的种类虽然繁多，但从总体上看，每一个优良菌种均有＂纯、正、壮、润、香＂的共性。其标准是：

1、菌种的纯度要高，不能有杂菌感染，也不能有其他类似的菌种。

2、菌丝色泽要纯正，多数种类的菌丝应纯白、有光泽，原种、栽培种菌丝应连结成块，无老化变色现象。

3、菌丝要粗壮，分枝多而密，接种到培养基吃料块，生长旺盛。

4、培养体要湿润，与试管（瓶）壁紧贴而不干缩，含水适宜。

5、具有每品种特有的清香味，不可有霉、腐气味。

‘柒’ 如何鉴别DMEM完全培养液是否有菌

两方法：1，去5ml DMEM培养液在培养瓶，放培养箱几天，如有菌，就变浑浊。

2。去5ml 培养液，6000到8000g离心，去上清，流少许如100ul左右，枪吹打，滴加到载玻片，加hoechst 33258少许，荧光显微镜观察，有荧光就表明有菌。

‘捌’ 微生物接种，若接种的培养物出现染菌情况,如何分析引起染菌的原因

有几种可能
1. 培养基高温高压灭菌是否彻底
2. 微生物源是否有染菌
3. 接种过程的各项操作是否有引起染菌的可能
4. 接种后培养过程中是否有染菌的可能

以上

‘玖’ 我的细胞是染菌了吗

应该是，我了解的一些细胞传的代数多了就会出现浑浊，不一定是你操作的问题。至于原因有的说是衣原体污染，但是我在网上找的原因感觉是那种所谓的胶虫。。。
胎牛血清少一点，试试。。。

‘拾’ 怎样保证灭菌好的培养基不染菌

培养基灭菌后,如果没有打开塞子,还是用牛皮纸包好的情况下,可以存放一个月都没问题的。
检查无菌的方法：
就是将已经灭完菌的菌棒放到25－28℃的恒温环境中避光培养3天后,拿出来检查看袋内有没有杂菌滋生的痕迹.看菌袋内有没没有导演变色、出现斑点等情况的发生,如果有就证明灭菌不彻底