色谱分析方法用途

⑴ 气相色谱分析仪的用途

GCA1000气相色谱分析仪（久尹科技成都有限公司生产制造）已广泛地应用于石油化工、生物化学、医药卫生、卫生检疫、食品检验、环境保护、食品工业、医疗临床等领域。气相色谱法在这些领域中解决了工业生产的中间体和工业产品的质量检验、科学研究、公害检测、生产控制等等问题。

GCA1000在线色谱分析仪是一款针对100PPm以下非甲烷总烃和10PPm以下乙炔浓度测量和分析的分析仪，提供7U机箱配置，根据实际需要还可进行其他配置。该仪器具有基于常规色谱仪的分离和测量系统，提供了灵活的操作软件、自动校准和测量功能。除此之外，还具有以下特点：

a.配置ETC温度控制单元，完全采用电子闭环控制，负责对柱箱、进样器和检测器等进行恒温控制，温度控制精度可优于±0.1℃；

b.配置EPC压力控制单元，完全采用电子闭环控制，负责载气1（乙炔柱）、载气2（预柱+乙炔柱）、载气3（总烃）、氢气和空气等气路的压力进行恒压控制，压力控制精度可优于±0.1kPa；

c.出厂前使用皂膜流量计对各气路中的流量进行了标定，可设定各气路中的流量，EPC单元会自动计算并控制气路中的压力，使流量保持恒定；

d.采用定量管进行定体积采样，精确度高，维护量低，使用寿命长；

e.使用进口十四通自动切换气动阀样品进样，可实现进样、采样和反吹的自动化控制，无需人工干预；

f.仪器内部不锈钢管道及定量管道采用高温钝化处理，防止样品的吸附，提高检测的重复性及准确性；

g.气体进样采用三通电磁阀平衡联通，进样瞬间定量管与大气相通，使定量管内的样气压力与大气压力相同，以保证进样量的准确和稳定；

h.使用氢火焰离子化FID检测器检测总烃和乙炔，具有检测限低、检测精度高、性能稳定等特点；

i.分析仪在开机后分析软件启动时，具有自动压力控制、温度控制、自动点火等功能。关机前分析软件关闭时，具有自动熄火、自动停止加热等功能，且这些功能都可在分析软件中进行灵活配置；

j.仪器可根据用户的分析需求自定义配置系统，其包括温度、色谱柱、检测器等；

k.自动校准功能，可进行灵活性自动校准和质量控制点；

l.内置工控机，可WIFI无线联网，同时采用12.1英寸大屏幕电容式触摸屏设计，画面美观简捷，易操作；

m.支持网口和串口通讯，基于标准MODBUS RTU/UDP/TCP等协议，便于用户端集成；

n.具有继电器报警输出和4-20mA信号远传功能，很容易与用户DCS系统接口。

⑵ 色谱的作用是什么色谱分析到底是分析了什么呢是分析含量，分析种类，还是别的什么

大哥我就是这方面的专家，2楼说的不严格，一瓶东西是测不出精确的浓度的，也完全可能测不出谁是谁，给你一张未知的色谱图，哪个峰代表哪个，谁敢说他知道？ 基本上，都要用标样。

色谱法的目的，是分离和检测。作为分离，色谱法是世界上最好的方法，它可以把混合物给你一个个分开成单一组分， 像工厂生产的什么纯物质，高纯的什么东西，很多都是色谱仪器做的（除了卖假货的或者用其他方法做的）

作为检测，色谱法也很方便和简单，操作很简单，但是有缺陷，它的原理是相对定样。色谱图的纵坐标不是浓度值，而是电压值，啥叫相对？ 两张图一比，面积比等于浓度比，如果已经已知一个浓度，未知的不也算出来了？ 所以基本上你要测某种东西，或者你只想测某一种组分，比如混合气体里的二氧化碳， 你就需要买类似于你样品的标准样品，预测组分的浓度是已知的，而且和你样品比较接近。

如果不买标样，只能比较粗糙的算个百分比，比如你想简单的测下空气里面氧气、氮气的含量，你吹口气就行了，一计算百分比也是大约氧气20%,氮气80%。 这是比较粗糙的，如果你精度要求高，你用这种方法算，你得到的结果还不如你随便编个数字。

至于色谱图， 一个波峰代表一个物质， 一个个分开的峰就代表分开的组分。 我是这方面的专家，如果你要完这仪器，可以赵我

⑶ 液相色谱的用途！！

高效液相色谱实验I. 色谱柱的评价

请在实验前预习《基础分析化学实验（第二版）》137－140页。

【目的】

(1) 了解高效液相色谱仪的工作原理；

(2) 学习评价液相色谱反相柱的方法。

【原理】

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。它采用高压输液泵和小颗粒的填料，与经典的液相色谱相比，具有很高的柱效和分离能力。色谱柱是色谱仪的心脏，也是需要经常更换和选用的部件，因此，评价色谱柱是十分重要的。而且对色谱柱的评价也可以检查整个色谱仪的工作状况是否正常。

评价色谱柱的性能参数主要有：

（1）

柱效（理论塔板数）n

式中tr为测试物的保留时间，W1/2为色谱峰的半峰宽。

（2）

容量因子k’

式中t0为死时间，通常用已知在色谱柱上不保留的物质的出峰时间作死时间。

(3)

相对保留值（选择因子）α

式中k1’和k2’分别为相邻两峰的容量因子，而且规定峰1的保留时间小于峰2的。

(4)

分离度Rs

式中tr1、tr2分别为相邻两峰的保留时间，Wb1、Wb2分别为两峰的底宽。对于高斯峰来讲，Wb=1.70W1/2。

为达到好的分离，我们希望n、α和Rs值尽可能大。一般的分离（如α=1.2，Rs=1.5），需n达到2000。柱压一般为104 kPa 或更小一些。本实验采用多核芳烃作测试物，尿嘧啶为死时间标记物，评价反相色谱柱。

【仪器和试剂】

Waters 510高效液相色谱仪（由Waters 510高压输液泵，Rheodyne 7725i进样器，440检测器和记录仪组成）

色谱柱：5 cm×4.6 mm I.D., YWG-C18H37 (ODS)，10 μm

流动相：甲醇－水(80+20)

样品I： 含尿嘧啶 (0.010 mg·mL－1)、萘 (0.010 mg·mL－1)、联苯 (0.010 mg·mL－1)、菲（0.006 mg·mL－1）的甲醇混合溶液；

样品I I：尿嘧啶的甲醇溶液；萘的甲醇溶液；联苯的甲醇溶液；菲的甲醇溶液。溶液浓度约为0.01mg·mL－1；

【实验内容】

（1）准备流动相。将色谱纯甲醇和色谱纯水按比例配制200mL溶液，混合均匀并经超声波脱气后加入到仪器储液瓶中。

（2）检查电路连接和液路连接正确以后，接通高压泵、检测器和记录仪的电源。设定操作条件为：流速1.0 mL·min－1，压力上限2�0�7104 kPa (约3000 psi)，检测波长254 nm（该仪器检测波长已固定），灵敏度0.2 AUFS，记录仪走纸速度1.0 cm·min－1，记录灵敏度为5 mV。开启记录仪走纸开关记录基线。并调节基线到合适位置（一般为距右10%处）。

（3）待基线平稳后（建议观察检测器的读数显示），将进样阀手柄拨到“Load”的位置，使用专用的液相色谱微量注射器取5μL样品注入色谱仪进样口，然后将手柄拨到“Inject”位置，同时按一下检测器的标记按钮，同时计时，记录色谱图。

（4）重复（3）的实验两次。

（5）用同样方法进纯样品的甲醇溶液，确定出峰顺序。

（6）根据三次实验所得结果计算色谱峰的保留时间、半峰宽，然后计算色谱柱参数n、k’，以及相邻两峰的α、Rs

（7）将流速降为0，待压力降为0后关机。

思考题

1. 高效液相色谱与气相色谱相比有什么相同点和不同点？

2. 如何保护色谱柱延长使用寿命？

高效液相色谱实验II

固相萃取水样中的多核芳烃并以内标法测定其含量

【目的】

（1）学习固相萃取法处理样品；

（2）用内标法定量。

【原理】

固相萃取法是色谱法的一个重要的应用。在此方法中，使一定体积的样品溶液通过装有固体吸附剂的小柱，样品中与吸附剂有强作用的组分被完全吸附；然后，用强洗脱溶剂将被吸附的组分洗脱出来，定容成小体积被测样品溶液。使用固相萃取法，可以使样品中的组分得到浓缩，同时可初步除去对感兴趣组分有干扰的成分，从而提高了分析的灵敏度。固相萃取不仅可用于色谱分析中的样品预处理，而且可用于红外光谱、质谱、核磁共振、紫外和原子吸收等各种分析方法的样品预处理。C18固相萃取小柱具有疏水作用，对非极性的组分有吸附作用，因此可以从水中将多核芳烃萃取出来，完成浓缩样品的作用。固相萃取小柱还有其他类型，如极性、离子交换等。

内标法的原理是，设在V mL样品中含有Wi g待测组分i，加入WS g内标物S，混匀后进样，得组分i及内标物S的峰面积分别为Ai及AS。由于峰面积正比于通过检测器的物质量，所以有：

Wi=fi Ai

WS =fS AS

式中fi、fS分别为组分i和内标S的校正因子。

两式相除，得

所以，组分i的体积浓度为：fi’可用已知被测物i和内标物浓度的样品进样分析得到。内标法是一种相对测量方法，因此，进样量不必准确，操作条件稍有变化对结果没有什么影响。

【仪器和试剂】

Waters 510高效液相色谱仪（由Waters 510高压输液泵，Rheodyne 7725i进样器和440检测器组成）

色谱柱：5 cm×4.6 mm I.D., YWG-C18H37 (ODS)，10 μm

流动相：甲醇－水(80+20) 流速：1.0 mL·min－1

检测波长：254 nm

C18固相萃取小柱：2支

25 mL移液管：1支

50 mL医用注射器：1支

10 mL医用注射器：2支

2 mL容量瓶：2个

样品I：内标标准样，含萘(0.010 mg·mL－1)、联苯(0.010 mg·mL－1)、

菲（0.006 mg·mL－1）的甲醇溶液。

样品II：内标物溶液。含联苯（0.10 mg·mL－1）的甲醇溶液。

样品III：含萘、菲的被测水样。

【实验内容】

（1）固相萃取小柱预处理：用10 mL注射器将2 mL甲醇压过小柱，再将2 mL纯水压过小柱。

（2）用移液管取25 mL水样，用50 mL注射器压过小柱，这时水样中的萘和菲被吸附在小柱上。在小柱下端承接一2 mL的容量瓶，将约1.5 mL甲醇用10 mL注射器压过小柱到容量瓶中，加入一定量内标联苯溶液，定容摇匀，得到浓缩的样品。

（3）按“实验I”中的步骤，进样分析内标标准样和浓缩样品各三次。

（4）取平均结果，计算峰面积As和Ai；根据内标标准样的浓度计算fi’，再计算出浓缩样品中的萘和菲的浓度，进而计算出原水样中的浓度（mg·mL－1）。

思考题

1. 内标法与外标法各有哪些特点？ 本实验为什么采用内标法为好？

为什么要对色谱分析中的样品进行预处理？简单列出三个以上的原因。

⑷ 色谱法有哪些用途

色谱法的应用可以根据目的分为制备性色谱和分析性色谱两大类。制备性色谱的目的是分离混合物，获得一定数量的纯净组分，这包括对有机合成产物的纯化、天然产物的分离纯化以及去离子水的制备等。相对于色谱法出现之前的纯化分离技术如重结晶，色谱法能够在一步操作之内完成对混合物的分离，但是色谱法分离纯化的产量有限，只适合于实验室应用。分析性色谱的目的是定量或者定性测定混合物中各组分的性质和含量。定性的分析性色谱有薄层色谱、纸色谱等，定量的分析性色谱有气相色谱、高效液相色谱等。色谱法应用于分析领域使得分离和测定的过程合二为一，降低了混合物分析的难度缩短了分析的周期，是目前比较主流的分析方法。

⑸ 色谱分析法有哪些作用

可以分析气体 也可以分系具有挥发性的液体或固体物质 可以进行定量或定性分析 特点是分离效能高 分析速度快 取样量小 分析成本低

⑹ 色谱法 有什么意义

由于现代色谱分析技术具有分离和分析两种功能，即能排除复杂组分间的相互干扰，逐个将组分进行定性和定量分析，因此，现代色谱分析技术非常适合成分复杂的生药的有效性评价。

色谱法根据其分离原理可分为：吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法与排阻色谱法等。吸附色谱法是利用被分离物质在吸附剂上吸附能力的不同，用溶剂或气体洗脱使组分分离；常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色谱是利用被分离物质在两相中分配系数的不同使组分分离；其中一相被涂布或键合在固体载体上，称为固定相，另一相为液体或气体，称为流动相；常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上交换能力的不同使组分分离；常用的树脂有不同强度的阳离子交换树脂、阴离子交换树脂，流动相为水或含有机溶剂的缓冲液。分子排阻色谱法又称凝胶色谱法，是利用被分离物质分子大小的不同导致在填料上渗透程度不同使组分分离；常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，根据固定相和供试品的性质选用水或有机溶剂作为流动相。

常用色谱法又可根据分离方法分为：薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法等。采用薄层色谱法分离有色物质时，可根据其色带进行区分；分离无色物质时，可在短波 (254nm) 或长波 (365nm) 紫外光灯下检视，也可喷以显色剂使之显色，或在薄层色谱中用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光猝灭法检视。气相色谱法和高效液相色谱法可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测。

近年来随着各种色谱仪器自动化程度的提高，特别是各种联用技术的发展，使得用现代色谱分析技术进行生药有效性评价和质量控制变得越来越快速、简便和灵敏。

（一）薄层色谱法 (thin layer chromatography, TLC)

薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于鉴别、检查或含量测定。《中国药典》 (2005 年版 ) 一部薄层色谱法用于定性鉴别的达 1 523 项，用于含量测定的为 45 项，其中有 4 种药材采用薄层扫描法定量。

1. 操作方法

(1) 薄层板 有市售薄层板（普通或高效板）和自制薄层板，可根据需要选用。

(2) 点样 通常在洁净干燥的环境，用专用毛细管或配合相应的半自动或自动点样器械将样品点样于薄层板上，一般为圆点状或窄细的条带状，点样基线距底边 10 ～ 15mm ，高效板一般基线距底边 8 ～ 10mm 。圆点状直径一般不大于 3mm ，高效板一般不大于 2mm ；接触点样时注意勿损伤薄层板表面。条带状宽度一般为 5 ～ l0mm 。高效板条带宽度一般为 4 ～ 8mm ，可用专用半自动或自动点样器械喷雾法点样。点间距离可视斑点扩散情况以相邻斑点互不干扰为宜，一般不少于 8mm ，高效板供试品间隔不少于 5mm 。

(3) 展开 将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距原点 5mm 为宜，密闭。除另有规定外，一般上行展开 8 ～ 15cm ，高效薄层板上行展开 5 ～ 8cm 。溶剂前沿达到规定的展距，取出薄层板，晾干，待检测。

展开前如需要溶剂蒸气预平衡，可在展开缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持 15 ～ 30 分钟。溶剂蒸气预平衡后，应迅速放入载有供试品的薄层板，立即密闭，展开。如需使展开缸达到溶剂蒸气饱和的状态，则须在展开缸的内侧放置与展开缸内径同样大小的滤纸，密闭一定时间，使达到饱和再如法展开。必要时，可进行二次展开或双向展开。

(4) 显色与检视 供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色或加热显色，在日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在 365nm 紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板 ( 如硅胶 GF 254 板 ) ，在 254nm 紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。

(5) 记录 薄层色谱图像一般可采用摄像设备拍摄，以光学照片或电子图像的形式保存。也可用薄层扫描仪扫描记录相应的色谱图。

2. 系统适用性试验

用供试品和对照品对实验条件进行试验和调整，使检测灵敏度、分离度和重复性符合要求。

(1) 检测灵敏度 用于限量检查时，采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一薄层板上点样、展开、检视，后者应显清晰的斑点。

(2) 分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，分离度 (R) 的计算公式为：

R ＝ 2(d 2 -d 1 ) ／ (W 1 +W 2 ) 式 (3-5)

式中， d 2 为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d 1 为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W 1 及 W 2 为相邻两峰各自的峰宽。通常分离度应大于 1.0 。

(3) 重复性 同一供试品溶液在同一薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差应不大于 3.0 ％；需显色后测定的相对标准偏差应不大于 5.0 ％。

3. 测定法

(1) 鉴别 取适宜浓度的对照品溶液与供试品溶液，在同一薄层板上点样、展开与检视，供试品溶液所显主斑点的颜色 ( 或荧光 ) 和位置应与对照溶液的斑点一致。

(2) 限度检查 采用与定量配制的对照品对照或对照品稀释对照。供试品溶液色谱中待检查的斑点与相应的对照品溶液或系列对照品溶液的相应斑点比较，颜色 ( 或荧光 ) 不得更深；或照薄层色谱扫描法操作，峰面积值不得大于对照品的峰面积值。

(3) 含量测定 照薄层色谱扫描法，测定供试品中相应成分的含量。

4. 薄层色谱扫描法

系指用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱中可吸收紫外光或可见光的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于鉴别、检查或含量测定。测定时可根据不同薄层扫描仪的结构特点，按照规定方式扫描测定，一般选择反射方式，采用吸收法或荧光法。通常含量测定应使用市售薄层板。

扫描方法可采用单波长扫描或双波长扫描。如采用双波长扫描，应选用待测斑点无吸收或最小吸收的波长为参比波长，供试品色谱中待测斑点的比移值 (R f 值 ) 和光谱扫描得到的吸收光谱图或测得的光谱最大吸收与最小吸收应与对照品相符，以保证测定结果的准确性。薄层扫描定量测定应保证供试品斑点的量在线性范围内，必要时可适当调整供试品溶液的点样量，供试品与对照品同板点样、展开、测定和计算。

（二）高效液相色谱法 (high performance liquid chromatography, HPLC)

高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被分离，并依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。

高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快、重现性好、准确度和灵敏度高等优点，其应用范围之广，是其它分析仪器所不能比拟的。随着仪器的普及和蒸发光散射检测器、质谱检测器的商品化，本法已成为生药含量测定的首选和主流方法。《中国药典》 (2005 年版）一部应用高效液相色谱法测定含量的中药品种达 479 种，涉及 518 项，其中药材就有 98 种 。

1. 对仪器的一般要求

(1) 色谱柱 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶 ( 如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等 ) 也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。

填充剂的性能 ( 如载体的形状、粒径、孔径、比表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等 ) 以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在 15nm(1nm=l0?) 以下的填充剂适合于分析分子量小于 2000 的化合物，分子量大于 2 000 的化合物则应选择孔径在 30nm 以上的填充剂。

以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用 pH2 ～ 8 的流动相。当 pH 大于 8 时，载体硅胶会被溶解；当 pH 小于 2 时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用 pH 大于 8 的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机 - 无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用 pH 小于 2 的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机 - 无机杂化填充剂等。这些特殊的色谱柱已有商品供应。

(2) 检测器 最常用的检测器为紫外检测器 ( ultraviolet detector, UVD) ，其他常见的检测器有二极管阵列检测器 ( diode array detector, DAD) 、荧光检测器 ( fluorescence detector, FLD) 、示差折光检测器 ( refractive index detector, RID) 、蒸发光散射检测器 (evaporative light-scattering detector, ELSD) 、电化学检测器 (electrochemical detector, ECD) 和质谱检测器 (mass spectrometrical detector, MSD) 等。

紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测溶液的浓度有关，还与化合物的结构有关。示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散射检测器对结构类似的化合物，其响应值几乎仅与待测物的质量有关。二极管阵列检测器可以同时记录待测物在规定波长范围内的吸收光谱，故可用于待测物的光谱测定和色谱峰的纯度检查。

紫外、荧光、电化学和示差折光检测器的响应值与待测溶液的浓度在一定范围内呈线性关系，但蒸发光散射检测器响应值与待测溶液的浓度通常并不呈线性关系，必要时需对响应值进行数学转换后进行计算。

不同的检测器，对流动相的要求不同。如采用紫外检测器，所用流动相应至少符合紫外 - 可见分光光度法对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机相中有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器通常不允许使用含不挥发盐组分的流动相。

(3) 流动相 可采用固定比例 ( 等度洗脱 ) 或按规定程序改变比例 ( 梯度洗脱 ) 的溶剂组成作为流动相系统。由于 C- 18 链在水相环境中不易保持伸展状态，故对于十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的反相色谱系统，流动相中有机溶剂的比例通常应不低于 5 ％，否则 C 18 链的随机卷曲将导致组分保留值变化，造成色谱系统不稳定。

2. 系统适用性试验

色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。其中，分离度和重复性是系统适用性试验中更具实用意义的参数。

通常用规定的对照品对色谱系统进行系统适用性试验。

(1) 色谱柱的理论板数 (n) 在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间 t R ( 以分钟或长度计，下同，但应取相同单位 ) 和半高峰宽 (W h/2 ) ，按 n=5.54(t R ／ W h/2 ) 2 计算色谱柱的理论板数。

(2) 分离度 (R) 无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。分离度的计算公式为：

3) 重复性 取对照品溶液，连续进样 5 次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于 2.0 ％。也可配制相当于 80 ％、 100 ％和 120 ％的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成 3 种不同浓度的溶液，分别至少进样 2 次，计算平均校正因子。其相对标准偏差应不大于 2.0 ％。

(4) 拖尾因子 (T) 为保证分离效果和测量精度，应检查待测峰的拖尾因子是否符合相关规定。

3. 测定法

(1) 内标法加校正因子测定供试品中某个成分含量 精密称 ( 量 ) 取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照品溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：

校正因子 (f)= 式 (3-8)

式中 As 为内标物质的峰面积或峰高； A R 为对照品的峰面积或峰高； C S 为内标物质溶液的浓度； C R 为对照品溶液的浓度。

再取含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：

含量 (C x ) =f × 式 (3-9)

式中 A x 为供试品峰面积或峰高； C x 为供试品溶液的的浓度； A′ s 为内标物质的峰面积或峰高； C′ s 为内标物质的浓度。 f 为校正因子。

当配制校正因子测定用的对照品溶液和含有内标物质的供试品溶液，使用等量同一浓度的内标物质溶液时， C s =C′ s ，则配制内标物质溶液不必精密称 ( 量 ) 取。

(2) 外标法测定供试品中某个成分含量 精密称 ( 量 ) 取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图。

由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某成分含量时，以定量环或自动进样器进样为好。

(3) 面积归一化法 是测量色谱图上某色谱峰和除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算某色谱峰占总面积的百分率。该法通常用于对照品纯度的检查。

高效液相色谱法样品进样前的溶液应澄清，通常需经微孔滤膜 (0.45μm) 滤过。

（三）气相色谱法 (gas chromatography, GC)

气相色谱法系采用气体为流动相 ( 载气 ) 流经装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。物质或其衍生物气化后，被载气带入色谱柱进行分离，各组分先后进入检测器，用记录仪、积分仪或数据处理系统记录色谱信号。

气相色谱法对含挥发性成分的生药应用较广，精密度高，分离效果比薄层色谱好，但所得数据只有保留时间，多数情况下是在高温下进行，若成分不气化，就不能进行分析，故应用范围受到限制。虽可通过衍生化法或应用特殊色谱柱分析不易挥发的成分，但远不如高效液相色谱方便、准确。《中国药典》 (2005 年版 ) 气相色谱法用于中药分析的品种有 47 种，其中有 4 种药材用此法定量。另外还有两种药材的农药残留也是用 GC 法分析。

1. 对仪器的一般要求

气相色谱仪由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。

(1) 载气源 气相色谱法的流动相为气体，称为载气，氦、氮和氢可用作载气，可由高压钢瓶或高纯度气体发生器提供，经过适当的减压装置，以一定的流速经过进样器和色谱柱；根据供试品的性质和检测器种类选择载气，常用载气为氮气。

(2) 进样部分 进样方式一般可采用溶液直接进样或顶空进样。

溶液直接进样采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样；采用溶液直接进样时，进样口温度应高于柱温 30 ～ 50℃ ；进样量一般不超过数微升；柱径越细，进样量应越少，采用毛细管柱时，一般应分流以免过载。

顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定。将固态或液态的供试品制成供试液后置于密闭小瓶中，在恒温控制的加热室中加热至供试品中挥发性组分在非气态和气态达至平衡后，由进样器自动吸取一定体积的顶空气注入色谱柱中。

(3) 色谱柱 色谱柱为填充柱或毛细管柱。填充柱的材质为不锈钢或玻璃，内径为 2~4mm ，柱长为 2~4m ，内装吸附剂、高分子多孔小球或涂渍固定液的载体，粒径为 0.25~0.18mm 、 0.18~0.15mm 或 0.15~0.125mm 。常用载体为经酸洗并硅烷化处理的硅藻土或高分子多孔小球，常用固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。毛细管柱的材质为玻璃或石英，内壁或载体经涂渍或交联固定液，内径一般为 0.25mm 、 0.32mm 或 0.53mm ，柱长 5~60m ，固定液膜厚 0.1~5.0μm ，常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例组成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。

新填充柱和毛细管柱在使用前需老化以除去残留溶剂及低分子量的聚合物，色谱柱如长期未用，使用前应老化处理，使基线稳定。

(4) 柱温箱 由于柱温箱温度的波动会影响色谱分析结果的重现性，因此柱温箱控温精度应在 ±l℃ ，且温度波动小于每小时 0.1℃ 。温度控制系统分为恒温和程序升温两种。

(5) 检测器 适合气相色谱法的检测器有火焰离子化检测器 ( flame ionization detector , FID) 、热导检测器 ( thermal conctivity detector, TCD ) 、氮磷检测器 (nitrogen-phosphorus detector, NPD) 、火焰光度检测器 ( flame photometric detector , FPD) 、电子捕获检测器 ( electron capture detector , ECD) 、质谱检测器 (mass spectrometric detector, MSD) 等。火焰离子化检测器对碳氢化合物响应良好，适合检测大多数的化合物；氮磷检测器对含氮、磷元素的化合物灵敏度高；火焰光度检测器对含磷、硫元素的化合物灵敏度高；电子捕获检测器适于含卤素的化合物；质谱检测器能给出供试品某个成分相应的结构信息，可用于结构确证。常用检测器为火焰离子化检测器，用氢气作为燃气，空气作为助燃气，在使用火焰离子化检测器时，检测器温度一般应高于柱温，并不得低于 150℃ ，以免水汽凝结，通常为 250 ～ 350℃ 。

(6) 数据处理系统 可分为记录仪、积分仪以及色谱工作站等。

2. 系统适用性试验

同高效液相色谱法。

3. 测定法

(1) 内标法加校正因子测定供试品中某成分含量。

(2) 外标法测定供试品中某成分含量。

(3) 面积归一化法。

上述 (1)~(3) 法的具体内容均同于高效液相色谱的相应方法。

(4) 标准溶液加入法测定供试品中某成分含量 精密称 ( 量 ) 取某待测成分对照品适量，配制成适当浓度的对照品溶液，取一定量，精密加入到供试品溶液中，根据外标法或内标法测定待测成分含量，再扣除加入的对照品溶液含量，即得供试液溶液中某待测成分含量。

气相色谱法定量分析，当采用手工进样时，由于留针时间和室温等对进样量的影响，使进样量不易精确控制，故最好采用内标法定量；而采用自动进样器时，由于进样重复性的提高，在保证进样误差的前提下，也可采用外标法定量。当采用顶空进样技术时，由于供试品和对照品处于不完全相同的基质中，故可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响；当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。

（四）其它色谱分析方法

1. 高效毛细管电泳 (high performance capillary electrophoresis, HPCE)

高效毛细管电泳是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力，在毛细管中按其淌度或分配系数的不同进行高效、快速分离的新型 “ 液相色谱 ” 技术，它是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。它使分析科学得以从微升水平进入纳升水平，并使单细胞分析，乃至单分子分析成为了可能，成为生物化学和分析化学中最受瞩目的、发展最快的一种分离分析技术，它在复杂样品的分离分析中将扮演越来越重要的角色。

2. 毛细管电色谱 (capillary electrochromatography ， CEC ）

毛细管电色谱是综合了毛细管电泳 (capillary electrophoresis ， CE) 和高效液相色谱 (HPLC) 的优势而发展起来的新型高效电分离微柱液相色谱技术。 CEC 一般采用熔融的石英毛细管柱，在柱内填充或管壁键合固定相，用高压直流电源 ( 或外加一定的压力）代替高压泵，产生电渗流 (electroosmotic flow ， EOF) 代替压力驱动流动相，溶质依据它们在流动相与固定相中的分配系数的不同和自身电泳淌度的差异得到分离，因而既能分离中性物质又能分离带电组分。

近年来高效毛细管电泳和毛细管电色谱在生药化学成分的分析中有许多尝试，取得显着进展。

⑺ 色谱仪的用途

色谱仪，为进行色谱分离分析用的装置。包括进样系统、检测系统、记录和数据处理系统、温控系统以及流动相控制系统等。现代的色谱仪具有稳定性、灵敏性、多用性和自动化程度高等特点。有气相色谱仪、液相色谱仪和凝胶色谱仪等。这些色谱仪广泛地用于化学产品，高分子材料的某种含量的分析，凝胶色谱还可以测定高分子材料的分子量及其分布。

⑻ 色谱检测的功能

高效液相色谱应用很广泛，基本能对有机化合物中百分之七十到百分之八十的化合物进行分离与检测，下面以安捷伦液相色谱技术做为举例：
应用
液相色谱用途广泛，已经成为大多数化学行业和生命科学行业中的标准配置。
安捷伦液相色谱和液－质联用系统正为各种客户群服务，如药物研制和生产、蛋白质、食品安全、环境、国土安全和石油化工等市场。
随着新应用和改进应用的开发，液相色谱的市场增长很快，包括制药和生命科学市场，中国和印度增长势头尤为强劲。
制药：制药行业是安捷伦液相色谱和液－质联用系统的主要用户。
从药物研制到开发、制造和QA/QC,液相色谱在药物的整个生命周期中发挥着重要作用。
它使得科学家能够迅速进行筛选、纯化的分析工作。
液相色谱和液－质联用系统也是用来检查药物化合物质量和数量的主要工具，它在法规环境中使用固定方法，为药物制造提供支持。
蛋白质：液相色谱和液－质联用系统正在不断增长的一个市场机会是识别、隔离和净化细胞和体液中的蛋白质。
液相色谱用途广泛，为分析蛋白质和其它生物分子提供了理想的技术，包括大的、非常灵敏、分析困难的蛋白质和生物分子。
环境：安捷伦的客户主要是重点满足和实施法规标准的政府实验室、工业实验室和独立实验室。
液相色谱和液－质联用系统分析包括非挥发性杀虫剂、除草剂、多核芳香碳氢化合物及不适合气相色谱的其它化合物。
食品安全：食品安全分析包括检测农产品和食品中的添加剂、残留物、杂质和毒素，其主要重点是满足和实施法规标准。
在全球贸易自由化、法规监管环境不断完善及食品安全问题的公众意识不断提高的情况下，食品分析需求正在迅速增长。
法律医学：安捷伦科技是用于药物筛选和毒理学研究的气相色谱/质谱仪系统的全球领导型供应商。
作为气相色谱/质谱设备的补充，安捷伦的液相色谱/质谱系统已开始被应用于法医分析。
电感耦合离子质谱与激光切除的结合对于法医调查中固体样品以及基本元素图谱的测量也非常有效。
国土安全：安捷伦长期以来一直与美国和国际政府、军事、司法和卫生机构合作，检测、识别、确认和消除生物和化学战争制剂及有毒的工业化合物。
石油化工（HPI）：液相色谱应用包括添加剂化验、精细和专用化学分析以及使用带有有机溶剂或水性溶剂的大小排查色谱检定聚合物。
半导体：安捷伦为半导体制造过程中超高纯度材料的分析提供了的创新型和高可靠型电感耦合离子质谱仪。
电感耦合离子质谱仪的主要应用包括半导体制造过程中散装和过程化学品的特性分析、硅片表面有机及金属污染物分析、最终部件（磁盘驱动器，电路板等）制造过程中挥发性有机溶剂的分析。

⑼ 什么是色谱法,其本质是什么,有何作用

这个在下不是专业的，只能凭记忆简单说说。色谱法是通过不同物质的吸收或者反射光谱的不同来检测物质是否存在，科学家通过实验已知的不同物质的吸收和反射的光波是不一样的，比如钠的光谱是以黄光为主，铜则是黄绿光，锶是鲜红光而钙则是砖红色光等等，所以通过色谱法检验某种是否存在非常准确而且可以远程测量和微量测量，比如天文学通过色谱法可以知道恒星的内部组成元素，这些只需把观测光与已知的色谱进行对比就行了，而且历史上通过色谱法检验到了过去没有发现的新元素！

⑽ 薄层色谱法的用途，要详细哦

薄层色谱是化学的一种分离和分析方法
⑴定性鉴别 化学上经典的定性鉴别,例如经典的有机定性分析或经典的毒物分析，是利用各种化合物的溶解度不同和所含功能基的不同,用溶剂提取或用试剂处理,把它们分组或分为单一组分,然后作试管反应或点滴反应(颜色反应),或根据它们衍生物的理化性质进行定性鉴别.这种方法的缺点是样品用量叫大，分离手续麻烦,分析时间较长(几小时或几时个小时),并可能有杂质干扰.,现采用合适的展开剂和现色剂在薄层上作为分离和鉴别,根据样品中组分的 值和现色情况,同时用标准作对照,一般即能却证为某一化合物.用薄层色谱法定性,样品用量小,分离方便，分离时间短(几分钟或几时分钟),检出灵敏度高. 例如，再毒物分析中检验是否巴比妥安眠药中毒时,取胃内容物或尿样品，先用盐酸酸化后,用乙醚提取，乙醚提取液脱水,过滤蒸干，溶于无水乙醇中，点在硅胶版上用氯仿 无水乙醇（36 1）展开，用硫酸汞二苯偶碳酰肼试剂显色，并用标准品对照，意见出巴比妥，苯巴比妥，戊巴比妥和异巴比妥。鉴别速度快（1小时），这对于抢救中毒患者和及时为医生提供治疗方案极为重要
（2）药品的质量控制和杂质检查 药品的纯度，通常用熔点，吸光值等物理常数作为鉴定的指标。但是薄层检查也是药品质量控制和杂质检查的一种有效方法，有时甚至比一般方法更有效。一些国家的药典和药品规范已经采用。方法是把一定量得样品 溶液(例如，相当于 样品)电在薄层上，用展开剂展开并显色，同时用纯品作对照,如果样品只显示出纯品 值一致的一个斑点,则表示含有杂质.进一步可用薄层作杂质的限量检查.再上例中,如果已经知道显色剂对杂质的最小检出量为 ,在薄层上点样 后不显出杂质斑点,则杂质的量低于 ,或低于 ,也就是样品的纯度不低于 . 例如镏体药物的合成和精致工作中，常含结构类似的杂质,即按上述方法控制其质量和杂质的限量.
⑶化学反应进程的控制,反应副产物的检出以及中间体的分析, 在化学反应进行到一定时间或反应终了时,把反应液取出作薄层分析,可以知道还剩下多少原料药未起作用.方法是把反应液或其有机溶剂提取液点在薄层上，同时点原料作参比对照，看薄层上是否出现原料药斑点.还可以用薄层检查反应副产物.如果化学反应分步进行，则每一步反应的中间体的质量和产率也都可用薄层进行定性和定量. 例如在合成强力霉素的过程中，需要中间地甲烯土霉素氢化物为脱氧土霉素.氢化反应是否完全,可用薄层检查,如果反应完全,则反应釜中几乎没有或只有极少量的甲烯土霉素存在,薄层板上只显示出一个脱氧土霉素,如果薄层板上有上下二个明显的斑点,表示反应还没有完全,尚需继续还原,直到只显示出脱氧土霉素的一个斑点为止才能出料.
(4) 柱色谱法分离条件的探索 柱色普法的实验条件，例如选用什么吸附剂和洗脱剂较好各个组分按什么顺序从柱中洗脱出来，每一分洗脱液中是含单一组分或就含几种没有分开的组分等，都可以在薄层上进行探索和检验。薄层上所有的展开剂虽不完全照搬柱色普法上，但仍有参考价值。
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