细胞周期分析方法

‘壹’ 流式细胞周期结果 怎么分析

细胞周期至少有两种做法，最常见的如下图分析：

比如这个图，是DNA染料单染，其中粉色部分是G1期，黄色部分是S期，绿色部分是G2/M期。中间的分布一般是通过FlowJo这样的软件计算自动生成的。

‘贰’ Br检测细胞周期结果如何用Flow J分析

你要先在FSC和SSC散点图上gate出细胞，然后SSC-W和SSC-Hgate出单细胞，然后在用BrdU/PI 散点图打开才能开的比较清楚的图。

‘叁’ stk1 细胞周期分析 1.22怎么样

1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间.可分为四个阶段（见图）：① G1期(gap1),指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；② S期(synthesis phase),指DNA复制的时期；③ G2期(gap2),指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；④ M期又称D期(mitosis or division),细胞分裂开始到结束.2、从增殖的角度来看,可将高等动物的细胞分为三类：①连续分裂细胞,在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞,如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞.②休眠细胞暂不分裂,但在适当的刺激下可重新进入细胞周期,称G0期细胞,如淋巴细胞、肝、肾细胞等.③不分裂细胞,指不可逆地脱离细胞周期,不再分裂的细胞,又称终端细胞,如神经、肌肉、多形核细胞等等.细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关,如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时,人类胃上皮细胞24小时,骨髓细胞18小时,培养的人了成纤维细 胞18小时,CHO细胞14小时,HeLa细胞21小时.不同类型细胞的G1长短不同,是造成细胞周期差异的主要原因.3、流式细胞结果图各参数的意义：前面讲过,常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的：G1期：细胞DNA复制还没有开始,也是DNA含量最少的,即流式检测结果图的第一个峰；S 期：细胞开始复制,到完成复制,是一个一倍DNA到二倍DNA的过程,在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）；G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间,此时细胞内含二倍DNA,在流式结果图中的第二个峰；M期：细胞分裂过程,此时细胞内也是二倍DNA,用DNA含量的方法是无法与G2期分开,所以有第三峰明显升高时报告：G2/M期阻滞.上图是DOS系统下分析细胞周期的一个示意图.不同的机器分析结果参数表示略有不同,但主要看G1、G2、S三个期的数值即可.1、纵坐标Cell Number：即计数到的有效细胞数；2、横坐标DNA Content：即DNA量,为什么用DNA量来区别各周期我们等下再讲；3、G1、G2、S三期在上图已经用箭头标示；4、右侧数字含义：Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值为195.4；%G1=73.6即G1期细胞数占总数的73.6%；以此类推

‘肆’ 怎样用modfit分析细胞周期

采用PI染色法,以流式细胞术通过检测DNA含量分析细胞凋亡,比较ModFit LT及CELLQuest软件的分析数据.结果显示:ModFit LT与CELLQuest软件均可分析细胞凋亡,ModFit LT软件更客观、准确.我们建议使用ModFit LT软件进行细胞凋亡相对定量分析,CELLQuest软件只用于细胞凋亡的定性分析.

‘伍’ 请教细胞周期分析原理和分析结果解释

博凌科为生物科技-为你解答：1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。可分为四个阶段（见图）：① G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；② S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期；③ G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；④ M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。2、从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类：①连续分裂细胞，在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。②休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝、肾细胞等。③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等等。细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关，如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时，人类胃上皮细胞24小时，骨髓细胞18小时，培养的人了成纤维细 胞18小时，CHO细胞14小时，HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同，是造成细胞周期差异的主要原因。3、流式细胞结果图各参数的意义：前面讲过，常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的：G1期：细胞DNA复制还没有开始，也是DNA含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰；S 期：细胞开始复制，到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程，在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）；G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍DNA，在流式结果图中的第二个峰；M期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍DNA，用DNA含量的方法是无法与G2期分开，所以有第三峰明显升高时报告：G2/M期阻滞。上图是DOS系统下分析细胞周期的一个示意图。不同的机器分析结果参数表示略有不同，但主要看G1、G2、S三个期的数值即可。1、纵坐标Cell Number：即计数到的有效细胞数；2、横坐标DNA Content：即DNA量，为什么用DNA量来区别各周期我们等下再讲；3、G1、G2、S三期在上图已经用箭头标示；4、右侧数字含义：Mean G1=195.4即G1期DNA含量平均值为195.4；%G1=73.6即G1期细胞数占总数的73.6%；以此类推

‘陆’ 细胞周期检测方法即PI法的操作步骤

1. 细胞培养：取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。

2. 细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。

3. 细胞染色：1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。

4. 流式分析： 以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。

‘柒’ 细胞周期数据分析求助

细胞周期至少有两种做法，最常见的如下图分析：

这个是BrdU和7-AAD方法检测细胞周期。红色的gate就是G1期，绿色的就是S期，橙色的就是G2/M期。BrdU, PI, 或者EdU方法和这个一样分析

如果单用PI等DNA染料染色，需要专业软件来分析计算了。

比如这个图，是DNA染料单染，其中粉色部分是G1期，黄色部分是S期，绿色部分是G2/M期。中间的分布一般是通过FlowJo这样的软件计算自动生成的。

‘捌’ 细胞周期测定

儿童白血病细胞DNA含量及细胞周期的临床分析
刘爱国 胡 群 陶红芳 张柳清 胡 迎
华中科技大学附属同济医院儿科(湖北 武汉) 430030
中国图书分类号 R725·2 文献标识码 B 文章编号 1001-4411 (2008) 07-0980-03
【摘 要】 目的:探讨小儿急性白血病(AL)患者骨髓细胞周期分布与分型和治疗的关系。方法:应
定96例小儿AL骨髓单个核细胞DNA含量和细胞周期。结果:不同类型的AL异倍体发生率不同,急性淋巴
异倍体率55·7% (44/79),明显高于急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的29·41% (5/17), T-ALL异倍体
高于B-ALL (41·67% ),统计学差异均有显着意义。AL初诊病例和复发病例的G0/G1期细胞比例高于完全
G2M+S期比例低于完全缓解组和对照组(P<0·05),完全缓解组和对照组无显着差异。结论:图像分析系统
异倍体的分析,有利于判断高危ALL,对细胞周期的测定给化疗个体化提供了具体的参考指标。
【关键词】 儿童白血病 DNA含量 细胞周期 图像分析系统
C linical implication ofDNA content assay and cell cycle distribution in
cute leukem ia
LIUAi-Guo, HU Qun, TAO Hong-Fang et al·Department ofPediatrics, TongjiHospital, HUST,
China
〔Abstract〕 Objective:To investigate the distribution ofmarrow cell cycle and the relationshipwith the types o
peutic effects in childhood acute leukemia (AL)·M ethods:Mononuclear cellularDNA contents in bonemarrowwere
nalysis system in 96 patientswith childhoodAL·Results:The proportion ofpatientswith DNA-aneuploidwas differen
ofAL: DNA-aneuploid in the patientswithALLwas 55·7% (44/79), much higher than that in the children withA
17)·Statistically significantdifferenceswere found between the T-ALL group and B-ALL group in the DNA- aneu
vs 41·67%,P<0·05)·The leukemia cell cycle distribution indicated thatG0/G1-phase compartment in untreate
group were higher than in complete remission group and normal controls, G2M+S-phase compartmentwere lower tha
sion group and normal controls (P<0·05)·There were no significant differences in cell cycle distribution between
group and normal controls·Conclusion:The analysis ofAL, especiallyALL aneuploid, by image analysis system can
guishing the high riskALL from the standard riskALL, and the determination of cell cycle distribution can provide a c
for chemotherapy·
〔Key words〕 Childhood leukemia; DNA content; Cell cycle; Image analysis system
细胞DNA含量及细胞周期的变化与白血病发生、发展及
转归有密切的关系。快速分析白血病细胞的动力学变化,可
以评估其增殖能力,初步判断化疗的疗效。研究白血病细胞
的DNA指数和细胞周期的变化,对协助临床诊断和制定个体
化的化疗方案有着重要意义。经典的细胞周期分析方法为流
式细胞仪,但仪器和试剂昂贵限制了其在临床的广泛应用。
笔者采用图像分析系统检测不同病程的儿童白血病细胞DNA
指数、倍体的改变和细胞周期的变化,以及这种变化与临床
的关系,报道如下。
1 资料与方法
1·1 对象及分组 2003年4月~2005年8月儿科血液病房
住院急性白血病(AL) 96例,,男60例,女36例,年龄8个
月~14岁,平均7·1岁。其中急性淋巴细胞白血病(ALL )
79例(初治31例,复发/难治5例,完全缓解43例),急性
非淋巴细胞白血病(ANLL) 17例(初治8例,复发/难治4
例,完全缓解5例)。所有病例均经细胞学及免疫学检查确
诊。
1·2 方法 分别选取不同病程的白血病患儿及正常对照组骨
髓穿刺涂片标本,空气中干燥至少1 h,多聚甲醛固定30 min,
然后进行Feulgen染色〔1〕。采用CMIAS-B图像分析系统测定
细胞核DNA相对含量及DNA指数(DI),同时分析不同细胞
周期的细胞所占百分比。
1·3 DNA倍体判断标准 根据DI判断, DI系样本的G0/G1
期细胞与正常二倍体G0/G1期细胞荧光强度之比。DI正常范
围为0·9~1·1, DI<0·9为亚二倍体, DI>1·1为超二倍体,
亚二倍体和超二倍体均为异倍体。
1·4 统计学方法 应用SPSS 8·0软件,进行χ2检验和t检
验。
2 结果
2·1 DNA异倍体检出情况 79例ALL检出DNA-异倍体
44例,异倍体率55·7%其中48例B-ALL检出异倍体20
例,异倍体率41·67%, 31例T-ALL检出异倍体24例,异
倍体率77·42% ,两个不同免疫类型ALL出现异倍体的阳性
率有显着差异(χ2=9·76, P<0·05)。检出的5例亚二倍体
中,全部为T-ALL。17例ANLL检出异倍体5例,异倍体率
29·41%,与ALL组比较有显着性差异(χ2= 3·84, P<
0·05)。见表1。对照组10例无异倍体检出。
2·2 细胞周期分布 AL初治组患儿的G0/G1(% )明显高
于完全缓解组(t=2·83,P<0·05)和
P<0·05), S+G2/M (% )则明显低于
2·06,P<0·05)和对照组(t=2·74,P<
复发/难治组差异无显着意义(t分别为1·
0·05)。进一步分析ALL组和ANLL组,各
着差异性。见表2。
表1 AL异倍体检出率(
组别初诊缓解
ALL 58·06 (18 /31) 48·84 (21 /43)
B-ALL 55·00 (11 /20) 26·92 (7 /26)
T-ALL 90·91 (10 /11) 64·71 (11 /17)
ANLL 25·00 (2 /8) 20·00 (1 /5)
表2 AL不同病情细胞周期
组别nG0/G1S G
初诊39 89·8±5·3 9·4±8·9 2·7
完全缓解48 72·9±6·5 19·1±10·1 7·4
复发/难治9 83·5±7·1 8·3±5·3 9·4
对照10 70·4±5·4 22·1±4·5 7·3
3 讨论
DNA异倍体是肿瘤的特异性标志已为
体改变在白血病中很常见,国内外均有报
体检出率约为50%〔1〕,本试验79例AL异
与文献报道相符,其中T-ALL异倍体检出
二倍体集中出现于T-ALL中,而B-ALL
41·67% ,明显低于T-ALL。从诊断AL
T-ALL、亚二倍体均作为高危因素,由此
不好与异倍体的出现特别是亚二倍体有关〔
检出率明显高于ANLL组,从遗传学角度
制,表明ANLL患儿的染色体异常较多地
而不是数目异常,这可能是临床ANLL较
因之一〔2〕。
ALL初诊组及难治/复发组DNA异倍
其中难治/复发组与CR组的差异更为显着,
义。随着患者的完全缓解, DNA异倍体率
有部分CR患者存在DNA异倍体。故此类
师重视,以最大限度地延长患者长期生存率
文献记载,白血病细胞的细胞周期比
处于S期和G2M +S期的细胞比例比正
刘爱国等 儿童白血病细胞DNA含量及细胞周期的临床分析 第7期
G2M+S期比例代表该细胞群体中增殖细胞的数量,从另一侧
面反映细胞的增殖状态。本实验显示, AL组患儿骨髓细胞的
G0/G1(% )明显高于缓解组和正常对照组,而S%及S+
G2/M (% )明显低于缓解组和对照组,说明了白血病骨髓细
胞从G0/G1期至S期之间存在运行阻滞,表明白血病骨髓细
胞的增殖能力低于正常。亚二倍体ALL患儿的骨髓细胞增殖
能力低,故预后相对较差。而超二倍体骨髓细胞的增殖分化
需要复制合成更多的遗传物质, S期相对延长,进入S期的细
胞增多,因而临床上对于超二倍体的ALL患儿,联合使用作
用于S期白血病细胞的药物,能达到更佳的治疗效果〔3〕。
故我们认为,在评定AL患者危险度和制定化疗方案时,
除可以MDR作为依据外,患者DNA指数及DNA异倍体率以
及细胞周期分析均可作为重要参考指标。
4 参考文献
1 PuiCH, CristWM, Look ATet al·Biology and
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leukemia·Blood, 1990, 76: 1449~1463
2 陈日玲,陈铭珍,蔡康荣et al·流式细胞仪
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3 HirtA, Werren EM, LuethyARet al·Cell cyc
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Haemato,l 1992, 80: 189~193
op