Ⅰ 如何预测miRNA的靶基因
预测miRNA的靶基因,是研究miRNA功能和调控网络的关键步骤。以下为常用预测方法:
首先,基于序列匹配的方法通过比较miRNA序列与靶基因3'非翻译区(3' UTR)序列,寻找互补配对的miRNA靶位点。常用工具如TargetScan、miRanda、PicTar等。
其次,基于保守性的方法利用跨物种基因组序列比对,预测miRNA靶位点上的保守序列区域,识别可能的靶基因。PhyloP、PhastCons等工具适合进行此类保守性分析。
再者,基于结构的方法考虑miRNA与靶基因的结构和稳定性,通过预测二级结构和自由能等参数,预测结合位点。RNAhybrid、miRanda等工具支持结构预测。
最后,集成方法综合运用多种预测方法,结合序列匹配、保守性和结构信息,提高靶基因预测准确性。
值得注意的是,miRNA靶基因预测存在不确定性。为验证预测,常通过实验方法如Luciferase reporter assay、Western blotting、qPCR等。同时,利用公开的miRNA和基因表达数据进行miRNA与靶基因关系分析,有助于验证预测结果。