A. 蛋白质纯度鉴定的方法有哪些
电泳,
蛋白质电泳 现在常用就是 SDS 聚丙乙烯酰胺凝胶电泳
特点
1)灵敏度高
2)测定快速、简便
3)干扰物质少
液相色谱
高效液相色谱是完全可以纯化蛋白质并且进行蛋白质纯度鉴定的
但建议还是使用蛋白质电泳 最主流 最有效的方法
B. 蛋白质组研究的研究方法技术
蛋白质组学的发展既是技术所推动的也是受技术限制的。蛋白质组学研究成功与否,很大程度上取决于其技术方法水平的高低。蛋白质研究技术远比基因技术复杂和困难。不仅氨基酸残基种类远多于核苷酸残基(20/4), 而且蛋白质有着复杂的翻译后修饰,如磷酸化和糖基化等,给分离和分析蛋白质带来很多困难。此外,通过表达载体进行蛋白质的体外扩增和纯化也并非易事,从而难以制备大量的蛋白质。蛋白质组学的兴起对技术有了新的需求和挑战。蛋白质组的研究实质上是在细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析,往往要同时处理成千上万种蛋白质。因此,发展高通量、高灵敏度、高准确性的研究技术平台是现在乃至相当一段时间内蛋白质组学研究中的主要任务。当前在国际蛋白质组研究技术平台的技术基础和发展趋势有以下几个方面: 蛋白质组数据库是蛋白质组研究水平的标志和基础。瑞士的SWISS-PROT拥有目前世界上最大,种类最多的蛋白质组数据库。丹麦、英国、美国等也都建立了各具特色的蛋白质组数据库。生物信息学的发展已给蛋白质组研究提供了更方便有效的计算机分析软件;特别值得注意的是蛋白质质谱鉴定软件和算法发展迅速,如SWISS-PROT、Rockefeller大学、BHS宝护神、UCSF等都有自主的搜索软件和数据管理系统。最近发展的质谱数据直接搜寻基因组数据库使得质谱数据可直接进行基因注释、判断复杂的拼接方式。随着基因组学的迅速推进,会给蛋白质组研究提供更多更全的数据库。另外,对肽序列标记的从头测序软件也十分引人注目。
C. 一般采用什么方法检验蛋白质即鉴定
一般用双缩脲试剂鉴定,双缩脲试剂可以和蛋白质发生紫色反应。
D. “蛋白质的鉴定”实验怎么做
鉴定蛋白质有多种方法
1,在待测液中加入双缩脲试剂并水浴加热有紫色物质生成
2,在待测液中加入稀硝酸并加热变为淡黄色3,若为固体,则放到酒精灯上加热,可以闻到烧焦的羽毛气味
E. 鉴定蛋白质有哪些方法
蛋白质含量的测定:
1 凯氏定氮法
根据氮在蛋白质分子中含量恒定(平均占16%),因此测定出样品中氮的含量后,即可求出样品中蛋白质含量。
2 双缩脲法
3 福林-酚试剂法
福林-酚试剂包括两种试剂:碱性铜试剂,磷钼酸及磷钨酸的混合试剂。碱性铜试剂与蛋白质产生双缩脲反应。这种被作用的蛋白质中的酚基(酪氨酸),在碱性条件下易将磷钼酸和磷钨酸还原成蓝色的钼蓝和钨蓝,所生成蓝色的深浅,与蛋白质的含量成正比。在650nm和660nm波长下测定光吸收值,即可测定蛋白质含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸,色氨酸在280nm处左右具有最大吸收。由于在各种蛋白质中这几种氨基酸含量差别不大,所以280nm的吸收值与浓度呈正相关。可用于蛋白质浓度的测定。
F. 5种蛋白质研究方法都是什么
本文概括了研究蛋白质的五种方法的原理及优缺点。1.荧光共振能量转移;2.蛋白质双杂交技术;3.噬菌体展示技术;4.蛋白质的亲和色谱;5.亲和印迹。
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详细资料请参考:on
http://doc.bio1000.com/show-3109.html
G. 如何鉴定蛋白质
鉴定蛋白质可以用双缩脲试剂。
双缩脲(NH2CONHCONH2)由两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物,在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
优点:双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质,操作简单、快捷。既适合手工操作,又适合自动化分析,重复性好、线性关系好, 双缩脲试剂可以长期保存( 若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制)。
缺点:灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。 干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。
蛋白质的作用:
人体内的一些生理活性物质如胺类、神经递质、多肽类激素、抗体、酶、核蛋白以及细胞膜上、血液中起“载体”作用的蛋白都离不开蛋白质,它对调节生理功能,维持新陈代谢起着极其重要的作用。人体运动系统中肌肉的成分以及肌肉在收缩、作功、完成动作过程中的代谢无不与蛋白质有关,离开了蛋白质,体育锻炼就无从谈起。
在生物学中,蛋白质被解释为是由氨基酸借肽键联接起来形成的多肽,然后由多肽连接起来形成的物质。通俗易懂些说,它就是构成人体组织器官的支架和主要物质。蛋白质缺乏:成年人:肌肉消瘦、肌体免疫力下降、贫血,严重者将产生水肿。
未成年人:生长发育停滞、贫血、智力发育差,视觉差。蛋白质过量:蛋白质在体内不能贮存,多了肌体无法吸收,过量摄入蛋白质,将会因代谢障碍产生蛋白质中毒甚至于死亡。
以上内容参考网络-双缩脲试剂
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