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病毒一般研究方法

发布时间:2024-11-14 13:17:59

A. 病毒学研究的基本方法有哪些

(一)生物学特性测定:在寄住上的反应——症状、传播等;
(二)病毒分离与培养:提纯与纯化,二元培养法;
(三)光镜与电镜观察:病毒粒子和病毒与相应抗血清的特异性免疫吸附情况;
(四)免疫学技术:以血清学和组织免疫化学方法检测材料带毒情况,多克隆抗体,单克隆抗体;
(五)分子生物学技术:核酸分子杂交,PCR等。

B. 病毒感染的血清学诊断方法

常用的血清学方法有中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验等传统的方法,以及应用免疫学标记技术发展的酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫试验(RIA)及免疫荧光试验(IF)等特异、灵敏的微量血清学方法。
1.中和试验(NT)是指病毒在活体内或细胞培养中,被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。它既可用来检查患病后或人工免疫后机体血清中抗体的增长情况,也可用来鉴定病毒或研究其抗原结构。中和抗体特异性高、持续时间较长,因此流行病学调查也常用此指征。
2.血凝抑制试验许多病毒能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞,称为血凝现象。这种现象能被相应抗体所抑制,称血凝抑制试验。其原理是相应抗体与病毒结合后,阻抑了病毒表面的血凝素与红细胞的结合。
3.酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫试验(RIA)及免疫荧光试验(IF)参见第八节细菌感染的血清学诊断方法的介绍。
4.蛋白印迹试验(Westernblot,WB)用于检测HIV抗体,是HIV感染的确认试验。应用WB也可检测病毒抗原,但一般不常用。
5.检测病毒核酸的分子生物学试验检测患者血清等标本或病毒培养物中病毒基因或核酸片段的技术有多种:①病毒核酸扩增试验即聚合酶链反应(PCR);②核酸杂交技术,包括点杂交、原位杂交、DNA-DNA印迹杂交(Southernblot)及RNA-DNA印迹杂交(Northernblot)等;③基因芯片技术(genechip);④病毒基因测序等。目前,分子生物学技术日益广泛地应用于对病毒及其感染的检测和研究中。

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