‘壹’ 在用荧光分析方法测定样品中维生素b2含量时要注意哪些问题
在用荧光分析方法测定样品中维生素b2含量时要注意以下问题：
（1）配制标准溶液时，为了减少仪器偏差，取不同体积的同种溶液应用同一移液管。
（2）因荧光是从石英池下部通过，所以拿取石英池时，应用手指捏住池体的上部，不能接触下部。清洗样品池后，应先用吸水纸吸干四个面的液滴，再用擦镜纸往同一方向进行轻轻擦拭。
（3）在使用荧光分光光度计时，须按照既定程序进行。在测定系列标准溶液的浓度和荧光强度时，必须按顺序放入测定。
（4）在测试样品时，应注意样品的浓度不能太高，否则由于存在荧光猝灭效应，样品浓度与荧光强度不呈线性关系，造成定量工作出现误差。
‘贰’ 试分析维生素c的结构与分析方法之间的关系
①维生素C分子结构中具有烯二醇结构，使其有很强的酸性并具有很强的还原性，根据此项性质，可以用氧化还原滴定法进行滴定含量测定。也可以根据此性质使用TLC测定维生素C含量。
②具有内酯环很不稳定，易氧化水解。
③且有2个手性碳原子。因此，维生素C不仅性质活泼，且具有旋光性，故可以用差示旋光法。
④维生素C在240nm处有紫外吸收，故可以使用HPLC测定其含量。
‘叁’ 测定食品中维生素C含量时往往会受哪些因素影响有什么解决措施
几种常见的检测方法进行简要的叙述。
维生素C的测定方法 1. 滴定分析法
采用滴定法测定维生素C的原理主要是利用维生素C的氧化还原性质，通过化学反应，选择合适的指示剂，根据样品溶液颜色的变化判定终点。常见的方法有 2,6-二氯吲哚酚滴定法(又称染料法)和碘量法等。其中 2,6-二氯吲哚酚滴定法的基本原理是：在酸性环境中，红色的2,6-二氯吲哚酚与维生素C反应被还原为无色的酚亚胺，以2,6-二氯吲哚酚染料为滴定剂，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，当溶液中的维生素 C刚好被全部氧化时,溶液呈浅红色, 30s内不褪色,即为滴定终点,其反应式如图2所示。滴定分析法快速、准确、方便，可用于测定水果中少
量的维生素C。但当样品中含有 Fe(II)、Sn(II)、Cu(I)、SO2、S2O32−
等离子和富含丹宁酸、甜菜苷时，由于这些物质本身也有还原性，也会与氧化剂发生氧化还原反应，而使测定结果不准确。因此滴定分析法往往只适用于测定不含 L-脱氢抗坏血酸( DHA)、花青素含量较低及不含还原性离子的样品。
2. 光度计法
光度法测定样品中维生素C含量的原理大多利用显色剂与维生素C发生的氧化还原反应，通过测定溶液的吸光度建立标准曲线来测定样品维生素C的含量。然而，由于总抗坏血酸的局限性，例如GB/T12392-1990只能测定脱氢抗坏血酸。而对于还原型抗坏血酸测定，GB5009.159-2003则采用抗坏血酸与固蓝盐B( Fast blue salt B)反应生成黄色的草酰肼-2-羟基丁酰内酯衍生物，在最大吸收波长420nm测定吸光度来检测。采用亚甲蓝褪色光度法也能够方便的测定维生素C，具有良好的选择性。利用抗坏血酸对于Cu(II)具有专一的还原作用，在Cu(II)的存在下，抗坏血酸将 Cu(II)迅速还原成 Cu(I)，Cu(I)与新亚铜灵(2,9-二甲苯-1,10菲绕啉)络合生成黄色水溶性物质，并在分光光度计下测定。此类方法结果可靠，重现性好，能准确测定维生素 C的含量，但如果待测液本身有颜色时，吸光度会受到影响，进而影响测定结果的准确性，且耗时较长。
3. 电化学法
电化学分析法是利用维生素C在电极上发生氧化反应而进行测定的。维生素 C在电极上失去 2个电子和 2个氢离子被氧化形成脱氢抗坏血酸，经过不可逆的水合作用形成脱氢古落糖酸。常用的工作电极有金属电极、石墨电极等，但维生素 C在此类电极氧化需要较高的氧化电位，在检测过程中易受到其它物质的干扰。近年来，采用修饰电极来降低氧化电位受到研究者的广泛重视，如纳米粒子金修饰的氧化钛膜电极(Au/Ti O2/Ti)，聚吡咯修饰的分子印迹(MIP)石墨电极等，大大提高了检测方法的灵敏度和选择性。电化学分析法具有分析速度快，操作简便、成本低、试剂用量少等优点，还可以与液相色谱、毛细管电泳生物传感器等联用来提高测定方法的灵敏度。其缺点是对样品前处理要求较高，操作较为繁琐。4. 化学发光法(CL) 化学发光法(CL)是利用维生素C与高锰酸钾、K2Cr2O7、Fe或铁氰化合物等发生氧化反应，并与鲁原子吸收光谱法(AAS)间接测定维生素 C的含量米诺(Luminol)或光泽精(Lucigenin)化学发光体系进行反应偶合来测定体系的发光强度进行维生素C的测定。Kato等利用在维生素 C中加入 Fe-叶绿酸发光体系发生淬灭来测定微量的维生素C, 化学发光法具有易操作、线性范围宽和灵敏度高的优点，是一种有效的痕量分析方法。5.流动注射分析法(FIA) 流动注射分析法(FIA)是将有色(或无色但有紫外吸收)溶液作为载流，当被测样品注入载流时，发生化学反应，使载流溶液颜色变淡(或紫外吸收降低)。若载流吸光度的变化与被测物质量具有一定的函数关系，即可以此对被测样品进行定量。流动注射法具有试剂用量少，重现性好，样品自动注射，占用空间少等优点, 特别适用于在大量样品中测定某一种目标分析物。近年来，FIA技术用于维生素 C测定受到很多研究者的关注，实现了快速、自动分析测定维生素C。流动注射系统可以与光谱法、电化学分析、色谱法、荧光法结合，与传统方法相比，大大提高了灵敏度和准确度。6. 液相色谱法(HPLC) 液相色谱法(HPLC)由于其具有灵敏度高、重现性好、操作简便和能实现多种维生素的同时测定等优点已成为近年来应用最广的分离和测定维生素C的方法。基于样品前处理方法、测定色谱条件和检测器的不同采用HPLC测定维生素C含量的方法也不尽相同。常用于测定维生素 C的色谱柱以反相柱为主，检测器包括的紫外(UV)或二极管阵列(PDA)检测器和电化学(EC)检测器等。例如：Maia等采用0.2%的偏磷酸–甲醇–乙腈 (90:8:2)为流动相，C18柱为色谱柱，在254nm波长下对药品中的维生素C含量进行测定。Quiros等，以0.1%(V/V) 的甲酸溶液为流动相，Mediterranea sea 18为色谱柱，在254 nm波长下测定果汁和饮料中维生素 C含量。由于流动相常常要使用含有一定的离子强度的缓冲溶液，故基本无法使用液相色谱–质谱联用技术来测定维生素C的含量。7. 原子吸收光谱法(AAS) 已有一些报道大致分为两类：沉淀法和阳离子树脂交换法。沉淀法的原理是：在酸性介质中维生素C与 Cu及 SCN反应生成一价铜盐 CuCNS (沉淀)，分离后用原子吸收法测铜含量而间接测定维生素C含量]。阳离子树脂交换法是通过维生素C换柱表面将高氧化态金属离子或氧化物 (Fe3+, MnO2)还原为低氧化金属离子(Fe2+, Mn )，通过流动注射在阳离子交