⑴ 分光光度法和比色法有何异同
1、原理不同
(1)、分光光度法的原理基于朗伯一比尔(Lambert - Beer)定律,在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法。
(2)、比色法的原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色,颜色深度和物质含量成正比,则根据光被有色溶液吸收的强度,即可测定溶液中物质的含量。
2、特点不同
(1)、分光光度法具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中最常用的实验方法。
(2)、比色法以生成有色化合物的显色反应为基础,针对性强,使用条件较为严格:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。
3、历史发展不同
(1)、比色法的历史比分光光度法悠久。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁,1795年,俄国人也用五倍子的酒精溶液测定矿泉水中的铁。比色法作为一种定量分析的方法,大约开始于19世纪30~40年代。而分光光度法是现代社会普遍使用的一种测定物质含量的方法。
(2)、随着光学仪器制造技术的发展,紫外-可见分光光度计应用日益普及,精密度较高而价格又较低的紫外-可见分光光度计已逐渐代替光电比色计,分光光度法也随之逐渐代替了比色法。
二、相同点
1、两个方法均是用来进行物质含量测定地点定性、定量方法;均需要一定的条件和设备。
(1)比色法是什么测定方法通常也称为扩展阅读:
一、常用的比色法有两种:目视比色法和光电比色法,两种方法都是以朗伯-比尔定律(A=εbc)为基础。
1、常用的目视比色法是标准系列法,即用不同量的待测物标准溶液在完全相同的一组比色管中,先按分析步骤显色,配成颜色逐渐递变的标准色阶。
2、试样溶液也在完全相同条件下显色,和标准色阶作比较,目视找出色泽最相近的那一份标准,由其中所含标准溶液的量,计算确定试样中待测组分的含量。
3、与目视比色法相比,光电比色法消除了主观误差,提高了测量准确度,而且可以通过选择滤光片来消除干扰,从而提高了选择性。
4、但光电比色计采用钨灯光源和滤光片,只适用于可见光谱区和只能 得到一定波长范围的复合光, 而不是单色光束,还有其他一些局限,使它无论在测量的准确度、灵敏度和应用范围上都不如紫外-可见分光光度计。
5、在分光光度计中,将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时,便可得到与不同波长相对应的吸收强度。
6、如以波长(λ)为横坐标,吸收强度(A)为纵坐标,就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法,称为分光光度法,也称为吸收光谱法。
7、用紫外光源测定无色物质的方法,称为紫外分光光度法;用可见光光源测定有色物质的方法,称为可见光光度法。它们与比色法一样,都以Lambert-Bee定律为基础。
8、上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区,可见光区,红外光区。波长范围:
(1)、200~400nm的紫外光区
(2)、400~760nm的可见光区
(3)、2.5~25μm(按波数计为4000cm-1~400cm-1)的红外光区。
⑵ 什么叫比色法操作上应该注意什么问题
比色法是通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。早在公元初古希腊人就曾用五倍子溶液测定醋中的铁。原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色,颜色深度和物质含量成正比,则根据光被有色溶液吸收的强度,即可测定溶液中物质的含量。
操作注意事项:选择适当的细胞接种浓度,保证细胞培养结束时浓度不至于过满;实验时应设置调零孔,溶媒孔,加药孔;避免血清干扰:一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。
比色法的原理:
利用有色物质对特定波长光的吸收特性来进行定性分析的一种方法,其原理是基于被测物质溶液的颜色或加入显色剂后生成的有色溶液的颜色,颜色深度和物质含量成正比,则根据光被有色溶液吸收的强度,即可测定溶液中物质的含量。
如利用光电效应,将透过有色溶液后的光强度成正比例地变换为电流的强度来进行比色定量的方法。
以上内容参考:
网络-比色法
⑶ 比色测定的基本原理是什么操作步骤有哪些
比色测定的基本原理,操作步骤:
原理:
比色分析是基于溶液对光的选择性吸收而建立起来的一种分析方法,又称吸光亮度法。
步骤:
1. 用相同型号的比色管。
2. 配制等体积的系列标准样品。
3. 配制待测样品(与标准样品等体积)。
4. 对比,找出相同的浓度。
⑷ 光度分析的方法
光度分析的方法
(1)目视比色法
用眼睛比较溶液颜色的深浅以确定待测组分含量的方法,称为目视比色法。最常用的是标准系列法。它是用一套质料相枯渗同、大小形状相同、带有刻度、等体积的比色管组成。将一系列不同体积的标准溶液依次加入比色管中,取一定量的待测溶液置于另一比色管中,然后分别加入等量的显色剂及其它试剂,最后用水稀释至刻度(比色管容量有10、25、50、100mL等几种)。摇匀并放置一定时间待反应达平衡后,从管口垂直向下观察,比较待测液与标准溶液颜色的深浅。若待测液与某一标准液颜色深度一致,则说明两者浓度相等;如果待测液的颜色深度介于某相邻两标准之间,则取其平均值作为待测液的浓度。
目视比色法仪器简单、操作简便、灵敏度也较高、显色反应如不遵从比耳定律也能进行。因而它被广泛应用于准确度要求不高的常规分析野搜中。
目视比色法的主要缺点是准确度不高,如果待测溶液中存在第二种有色物质,甚至无法进行测定。另外,由于许多有色溶液颜色不够稳定,标准系列不能久存,经常在测定时需同时配制。
(2)光度分析法
通常,将使用光电比色计测定有色溶液的吸光度进行定量分析的方法称为光电比色法,将使用分光光度计进行测定的方法称为分光光度法。两种方法的测定原理是相同的,所不同的仅在于获得单色的方法不同,光电比色法是采用滤光片,而分光光度法是利用棱镜或光栅单色器。由于两者均基于吸光度的测定,所以可统称为光度分析法。操作步骤都是测量一系列标准溶液的吸光度,绘制工作曲线。并在相同条件下,测量待测试样的吸光度,由工作曲线上查出试样中待测物的含量。
光度没脊脊法与目视比色法比较,具有下列优点:
a.使用仪器代替人眼进行测量,消除了人工的主观误差,从而提高了准确度。
b.测定溶液中有其它有色物质共存时,可以选择适当的单色光和参比溶液来消除干扰,因而可提高选择性。
c.使用标准曲线法可简化手续,加快分析速度。
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⑸ 比色法是什么意思
以生成有色化合物的显色反应为基础,通过比较或测量有色物质溶液颜色深度来确定待测组分含量的方法。比色法作为一种定量分析的方法,开始于19世纪30~40年代。比色分析对显色反应的基本要求是:反应应具有较高的灵敏度和选择性,反应生成的有色化合物的组成恒定且较稳定,它和显色剂的颜色差别较大。选择适当的显色反应和控制好适宜的反应条件,是比色分析的关键。