血药浓度分析样品定量分析的方法

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‘贰’ 阿那格雷hplc分析方法

【摘要】研究目的：为测出十二名健康志愿者单次口服盐酸阿那格雷胶囊和多次口服给药后，不同时刻血浆样品中阿那格雷的浓度。本次研究建立了一种灵敏度高、分析时间短、重现性好、样品处理简便，适于样品高通量分析的LC-MS/MS（液相色谱-质谱法）定量方法。通过试验数据对口服盐酸阿那格雷胶囊后的体内药动学进行分析，为阿那格雷后期临床安全性、合理用药提供了可靠的依据。研究方法：使用乙醚-二氯甲烷（2:1，v/v）作为提取试剂，对阿那格雷血浆样品采用液-液萃取法进行前处理，柱温调节到35C，流速选择1.0mL/mi（n分流体积比1:1），吸清液层30μL进行LC-MS/MS检测分析。阿那格雷与内标格列吡嗪经AscetnisC18柱（4.6×150mmI.D.，5μm粒径），在流动相为甲醇-0.1%甲酸水（80:20，v/v）的色谱系统中予以分离之后，再通过高效液相质谱进行分析检测。选用MRM模式，即多重反应监测技术，选择ESI(电喷雾离子化源)作为离子源，正离子模式扫描阿那格雷和内标格列吡嗪，分别以m/z256.3m/z199.0和m/z446.1m/z321.0为定量分析的离子反应。为了确保建立的阿那格雷定量分析方法有效可靠，试验对如下指标进行了全面的方法学确证：包括其特异性、线性范围、最低定量下限、准确度、精密度、基质效应、提取回收率和稳定性等。对招募的十二名健康志愿者，口服给予盐酸阿那格雷胶囊各1mg以及多次口服1mg剂量后，为测出不同时刻采集的血浆中阿那格雷的浓度，使用已经建立好的HPLC-MS/MS定量方法来进行分析。为了了解阿那格雷在人体内的药代动力学所具备的特点，我们使用DAS3.0和SPSS17.0软件算出相应的药代动力学参变量并用统计学方法阐明其药代动力学参变量的特征。研究结果：为了测出人体血浆中阿那格雷的浓度，此次实验创建了快速灵敏、准确可靠、重现性极好且稳定的HPLC-MS/MS测定方法。结果表明：在待测物和内标格列吡嗪出峰时间处均没有外源性和内源性物质影响的情况下，阿那格雷血浆样品的定量线性范围是0.1-100ng/mL，LLOQ是0.1ng/mL，本方法线性良好(r=0.9971)，且定量范围较宽。日内精密度(日内RSD)<5.92，日间精密度(日间RSD)<10.4，准确度为3.11%-4.04%，以上值均<±15%。阿那格雷低、中、高三个浓度回收率分别是96.1±3.6%、99.5±1.2%、104±0.91%。内标格列吡嗪回收率也稳定，结果精密可重现。阿那

‘叁’ 体内药物分析的样品测定

体内样品分析常用的方法有免疫分析法和色谱分析法 。
免疫分析法是基于抗体与抗原或半抗原之间的高选择性反应而建立起来的一种生物化学分析法。具有很高的选择性和很低的检出限，可以应用于测定各种抗原、半抗原或抗体。免疫分析法分为荧光免疫法、发光免疫法、酶免疫法及电化学免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，测定的量可以达到μg甚至ng的水平。这些分析方法多配有专用设备和试剂，操作相对简便，适合常规实验室使用，多应用临床治疗药物监测。
色谱分析包括：气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）和色谱-质谱联用（GC-MS、LC-MS）等，这些方法适用于复杂样品中微量药物的专属准确定量，多用于药代动力学研究。 由于体内样品取样量少、药物浓度低、内源性物质的干扰（如无机盐、脂质、蛋白质、代谢物）及个体差异等多种因素影响体内样品测定，为了保证方法的可靠性，必须在建立体内样品分析方法的同时对方法进行验证。
（一）特异性
必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物及同时服用的其他药物不得干扰样品的测定。对于色谱法至少要提供6个不同来源的空白体内样品色谱图、空白体内样品外加标准物质色谱图（注明浓度）及用药后的体内样品色谱图。
（二）标准曲线与线性范围
根据所测定物质的浓度与响应的相关性，用回归分析方法获得标准曲线。标准曲线的高低浓度范围为线性范围，在线性范围内浓度测定结果应达到试验要求的精密度和准确度。
必须用至少6个浓度建立标准曲线，应使用与待测样品相同的生物介质，线性范围要能覆盖全部待测浓度，不允许将线性范围外推求算未知样品的浓度。建立标准曲线时应随行空白体内样品，但标准曲线不包括零点。
标准曲线上各浓度点的实测值与标示值的偏差（bias）在可接受范围内时，可判定标准曲线合格。偏差可按下式计算：
式中，回归值系将各浓度点的响应值代人标准曲线计算所得的浓度值；标示值系指制备标准曲线时，各相应浓度点的配制浓度。
标准曲线上各浓度点偏差的可接受范围一般规定为：最低浓度点的偏差在±20%以内，在其余各浓度点的偏差在±15%以内。只有合格的标准曲线才能用于临床待测样品的浓度计算。当线性范围较宽时，推荐采用加权最小二乘法（weighted least square method）进行同归计算。
（三）定量下限
定量下限（LLOQ）是标准曲线上的最低浓度点，：要求至少能满足测定3～5个半衰期时样品中的药物浓度，或Cmax的1/10～1/20时的药物浓度，其准确度应在真实浓度的80%～120%范围内。RSD应小于20%，S/N应大于5.应由至少5个标准样品测试结果证明。
（四）精密度与准确度
要求选择高、中、低3个浓度的质控（quality control，QC）样品同时进行方法的精密度和准确度验证。其中，低浓度接近定量下限（lower limit of quantitation，LLOQ），在LLOQ的3倍以内；高浓度接近标准曲线的上限（即定量上限，upper limit of quantitation，ULOQ），中间选一个浓度，每一浓度至少测定5个样品。
精密度用QC样品的批内（intra-batch）和批间（inter-batch）RSD表示，RSD一般应小于15%，在LLOQ附近应小于20%.
在测定批内RSD时，每一浓度至少制备并测定5个样品。为获得批间RSD应至少在不同天连续制备并测定3个分析批，至少45个样品。
准确度是指用特定方法测得的体内样品浓度与真实浓度的接近程度，一般应在85%～115%范围内，在LLOQ附近应在80%～120%范围内。
（五）样品稳定性
根据具体情况，对含药体内样品在室温、冰冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察，以确定体内样品的存放条件和时间。还应注意考查储备液的稳定性以及样品处理后的溶液中分析物的稳定性，以保证测试结果的准确性和重现性。
（六）提取回收率
应考察高、中、低3个浓度的提取回收率。其结果应一致、精密和可重现。
（七）质控样品
质控（QC）样品系将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品，用于质量控制。
（八）质量控制
应在体内样品分析方法验证完成之后开始测试未知体内样品，每个样品一般测定一次，必要时进行复测。每个分析批均应建立相应的标准曲线，并随行测定高、中、低3个浓度的QC样品，每个浓度至少双样本。并应均匀分布在未知样品测试顺序中。当一个分析批中未知样品数目较多时，应增加各浓度QC样品数，使QC样品数大于未知样品总数的5%，QC样品数的增加以组（高、中、低3个浓度）为单位。QC样品测定结果的可接受标准为：偏差应小于15%，低浓度点偏差应小于20%，最多允许1/3不在同一浓度的QC样品结果超限。如QC样品测定结果不符合上述要求，则该分析批未知样品测试结果作废。浓度高于ULOQ的未知体内样品，应采用相应的空白介质稀释后重新测定。
（九）测试结果
应详细描述所用的分析方法，引用已有的参考文献，提供每个分析批的标准曲线、质控样品及未知样品的测试结果及计算过程。还应提供全部未知样品分析的色谱图，包括全部相关的标准曲线、质控样品的色谱图，以供审查。 （一）治疗药物监测的对象
对于治疗安全浓度范围窄、治疗剂量与中毒剂量接近、毒副作用强、具有非线性药代动力学特征、长期使用药效和毒性不明确、以及联合用药可能发生相互作用的药物，通常都应当进行监测。应当进行治疗药物监测的药物包括部分抗癫痫药、抗心律失常药、强心苷类药、抗生素、抗精神病药、抗哮喘药、抗恶性肿瘤药和一些解热镇痛药，如表7-1所示。部分应当进行治疗药物监测的药物的治疗浓度范围和中毒浓度，如表7-2所示。治疗药物监测示例见第十章第一节“苯巴比妥体内样品的分析。
（二）在药代动力学研究中的应用
地高辛在临床上用于心衰治疗，其有效浓度（0.8～2.0ng/ml）与中毒浓度（>2.4ng/ml）接近。消除半衰期长，成人的约为36小时、儿童的约为30小时，属一级动力学。地高辛在肠部被吸收，60%～90%以原型经肾小球滤过或肾小管排泌，仅有约10%在体内通过氢化、水解、结合等反应代谢，另有约7%发生肠-肝循环。
以毛地黄毒苷为内标，对人血浆和尿液中地高辛浓度LC-MS测定如下。
（1）样品处理方法精密吸取血浆1.0ml，置具塞离心管中，精密加入内标溶液（20ng/ml）50μl，加浓氨水100μl和甲基叔丁基醚5.0ml，振荡混匀30分钟后，3000×g力离心10分钟，分取有机层，置另一离心管中，在减压离心条件下挥千，残留物用100μl 含0.25mmol/L醋酸钠的甲醇-水（40：60）流动相溶解，14000×g力离心2分钟，取上清液15μl进行LC-MS分析。尿样用空白血浆按1：10或1：50稀释后照血浆方法处理和测定。
（2）色谱和质谱条件色谱柱C8（2.1mm×50mm，5μm）柱，流动相含0.25mmol/L醋酸钠的甲醇（A）-水（B）梯度洗脱，流速0.25ml/min.电喷雾正离子化，喷雾电压5000V，传输裂解电压250V，干燥氮气温度350℃，流速10.0L/min，喷雾口气压25psi.选择性离子【M+Na】+监测（SIM），m/z分别为803.4（地高辛）和787.4（毛地黄毒苷）。
（3）测定结果血浆浓度线性范围为0.05～1.5ng/ml，应用于人体药代动力学研究，测得女性受试者口服0.25mg地高辛后的典型血浆浓度-时间曲线如图7-2所示，其尿液48小时累积排泄量为30.2%。

‘肆’ 阿司匹林的含量怎么测定

阿司匹林含量测定综述08药学1班：冉贤飞x0dx0a阿司匹林片为常用的解热、镇痛药，收载于(中国药典2000年版)二部。原含量测定方法为酸、碱中和滴定法。目前市场上流通的解热、镇痛药物中，含阿司匹林或以阿司匹林为主药的较多。除了中国药典的原含量测定方法以外，针对各个剂型有多种含量测定的方法。如采用高效液相法测定其含量，可消除其他含有酸、碱的物质对其测定的干扰，可更有效的控制制剂的质量。方法操作简便，专一性强，结果准确。也有用数学模型进行计算的如近红外漫反射技术，其原理是根据标样集中样品的近红外光谱运用化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测成分之间的数学关系(简称数学模型)x0dx0ax0dx0a1．阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定x0dx0a阿司匹林及阿司匹林制剂的含量测定有多种方法，其中包括药典所载的酸、碱中和滴定法x0dx0a及紫外分光光度法，高效液相法等。x0dx0a1．1阿司匹林酸碱滴定法：x0dx0a直接滴定：方法：取本品0。4g，精密称定，加中性乙醇20ml，溶解，加酚酞指示液3d，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）滴定。每1ml滴定液相当于18。02mg的C9H8O4x0dx0a水解后剩余滴定：方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴定液（0.5mol/l）50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。x0dx0a两步滴定法：取本品10片，精密称定，研细，精密称取片粉适量（约相当于阿司匹林），加中性乙醇20ml,振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3d，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）至溶液显粉红色。加定量过量的氢氧化钠滴定液（0.1mol/l）40ml，置水浴上加热15min并时时振摇，迅速放冷至室温，用硫酸滴定液（0.05mol/l）滴定剩余的碱。根据消耗的滴定液体积及滴定度计算含量x0dx0ax0dx0a1．2阿司匹林制剂的电极法测定x0dx0a仪器与试剂：电极电位和溶液酸度测试均使用pHs—loC型数字式酸度离子计；参比电极为232型饱和甘汞电极；试剂均为分析纯，实验用水为去离子水经高锰酸钾处理后蒸馏而得。x0dx0a电极制备：将载体物质三苄基锡辛酸酯20mgl聚氯乙烯（PVC）0．33g和增塑剂邻硝基苯基辛醚o．65g溶解于四氢呋喃（THF）3g中，搅拌澄清后将其倾倒于40mm×40mm的水平玻璃板上。待THF挥发完后(约需l2h)即得到具有弹性的PVC膜。用打孔器切下直径10mm的圆片并用含5％PVC的THF溶液粘于PVC电极杆端,放置数小时,晾干后电极杆内充以0.1mol／L的水杨酸钠溶液作为内参比溶液并以Ag／AgCl丝作为内参比电极导出至离子计。电极使用前需于0.01mol／l水杨酸钠溶液中浸泡2h进行活化处理。电极及备用膜长期不使用时可洗净后．置于氮气氛围下保存。在此条件保存，电极的各项性能指标至少可于5个月内维持稳定。x0dx0a阿司匹林制剂的分析：待测样品的处理：阿司匹林易水解得到水杨酸根离子，且反应定量。因此，通过对水杨酸根离子的测定即可得出样品中的阿司匹林含量。阿司匹林片(A)和复方阿司匹林片（B）均处理如下：将适量药品(10片)研制成粉状，精密称取1—1．5g．在0.5mol／LNaOH溶液25m1中加热回流1h后过滤，定容至250ml。吸取lOm1滤液，用稀硫酸调至pH5．5，再用PH5．5的磷酸盐缓冲液定容至100mI作为待澜液。使用所配电极通过标准溶液法和样品加入法．分别测定药品A和B经前述处理后所得试样中的水杨酸根离子浓度，通过换算得出药剂中阿司匹林的含量x0dx0ax0dx0a1．3HPLC法测定阿司匹林片的含量x0dx0a仪器与试药仪器：高效液相色谱仪；CLASS—LC工作站。色谱柱：ODSC18色谱柱(150mmx4．6mm，填料：Kromasil，粒度：5um)。试药阿司匹林对照品，甲醇(色谱纯试剂)，冰醋酸、盐酸(分析纯试剂)。x0dx0a取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林10mg)，置100m1量瓶中，加0．1mol/l盐酸溶液适量，超声使阿司匹林溶解，放冷至室温，加0．1mol/l盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5m1，置25m1量瓶中，加0．1mol/l盐酸溶液稀释至刻度，格匀，取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。另取阿司匹林对照品适量，加0．1mol/l盐酸溶液溶解并稀释制成每lm1中约含阿司匹林20ul的溶液，取20ul同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。x0dx0ax0dx0a1．4动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸x0dx0a原理：碘对Ce4+和As的氧化还原反应有明显的催化作用，乙酰水杨酸和碘容易发生取代反应，使碘的浓度降低，导致碘的催化作用减弱，由此建立动力学光度法测定痕量乙配水杨酸的新方法。x0dx0a仪器和试剂：721型分光光度计；PHS—3C酸度计；超级恒温水浴。0．01mol/lCe(SO4)20．013mol/LAS2O3，5mol/lH2S04,5mg/lKI用时稀释至0．25mg/l;150mg/l乙酰水杨酸标准溶液用时稀释至所需浓度；5％醋酸马钱子碱；实验用水为二次蒸馏水。x0dx0a实验方法:于一系列25m1比色管中准确加入0．25mg/lKI溶液1．0m1，5mol/lH2S04溶液1．25m1，0．013mol/LAS2O3溶液1.0ml，乙酸水杨酸标准溶液(或样品溶液)，加蒸馏水至25m1刻度线。摇匀并放人35土0．1度的水浴中，恒温后加入0.01mol/lCe〔S04)21.0ml，立即摇匀，迅速放回水浴中。反应10min后，加入0.5mol/l,0.5％的醋酸马钱子碱终止反应并与Ce4+—显色，置于沸水浴中煮沸3min，取出冷却至室温。用1cm比色皿，在波长520nm处，以蒸馏水为参比，测定吸光度A。x0dx0ax0dx0a2．以阿司匹林为主药的含量测定x0dx0a虽然其成分组成有差异，但大多仍是根据阿司匹林的化学或色谱性质加以分离并测定其含量。x0dx0a2．1反相高效法相色谱法测定阿司匹林可待因片中阿司匹林含量x0dx0a仪器和试剂：Hp-1050液相色谱仪及UV检测器，HP3396积分仪。磷酸可待因对照品、阿司匹林对照品。甲醇、醋酸钠、冰醋酸均为分析纯试剂，阿司匹林磷酸可待因复方制剂(试制品)。x0dx0a液相色谱条件：色谱柱ODSC18(10mm，300mm×4mm)流动相：甲醇—0．03mol/L—l醋酸钠(冰醋酸调pH＝3．5)(1：2．5)；检测波长：280nm；流速：1ml/min.x0dx0a测定方法x0dx0a混合对照品溶液配制准确称取在105℃干燥至恒重的磷酸可待因对照品适量。用水溶解，配制成浓度为0.8mol/l的溶液。准确称取阿司匹林对照品约40ml置10mL容量瓶中。加入甲醇2—3mL，溶解，精密加入上述磷酸可待因溶液1.0mL，用水定容至刻度，摇匀即得。x0dx0a供试品溶液配制精确称取样品细粉适量(约相当磷酸可待因8mg阿司匹林400mg)置100mL容量瓶中，加入25％甲醇溶液50mL，超声溶解5min。用25％甲醇溶液稀释至刻度，格匀。经0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液为供试品溶液.x0dx0a测定精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10uL，分别注入液相色谱仪中。记录峰面积。根据混合对照品溶液中磷酸可待因和阿司匹林的峰面积，计算出供试品溶液中二者的含量.x0dx0ax0dx0a2．2小儿退热灵片紫外折合光谱测定x0dx0a原理：摺曲线分析法是一种数学变换方法(它的数学属性是一种新的复合导数变换)。它根据谐波分析原理，将光谱吸收曲线看作是多个数学分量加权而成。由于它提供的信息量大，可以显示吸收曲线的细微差异，以减少相似组分的数学相关性，所以在物质定性和混合物定量方面具有明显的优点。x0dx0a仪器与试药：UV／VISW型裙合光谱仪及裙合光谱软件；阿司匹林(1)对照品(含量99．89％)、苯巴比妥(2)对照品(含量99．92％)和辅料(佳木斯化学制药厂)；小儿退热灵片x0dx0a方法与结果：对照品溶液的配制：分别精密称取1、2对照品适量，用0．1mol／LNaOH溶液(溶剂)溶解稀释制成1mg／m1的储备液。再用溶剂稀释制成适当浓度的溶液(约120ug／m1，22．0ug／m1，使1和2的吸收度在0.2—0．8)，备用。模拟样品的配制按原黑龙江地方标准药品处方比例称取1、2与适量的辅料混匀后，精密称取0．2g置小烧杯中，用溶剂溶解并定容至100m1，静置10min，再取5m1稀释至250m1。分别吸取16、17、18、19和20m1置各25m1量瓶中，用溶剂定容，得1浓度为20—25ug／m1、2浓度为2．0—2．5ug／m1的模拟样品溶液(使1和2的吸收度在0．2—1．2)，共5份。x0dx0a样品测定：取本品12片，精密称定，研细，精密称取细粉适量(约相当于10．110g，20．011g)，用少量溶剂溶解后定容至50m1。按“2．3”项下方法选定的最佳折合区间(245—295nm)，经折合光谱自动采集该区间的光谱信息，以两组分定量分析系统软件进行裙合运算，并计算得含量x0dx0ax0dx0a2．3近红外漫反射技术测定精氨酸阿司匹林的含量x0dx0a原理：近红外定量分析需要一个待测成分已知的标准样品集(简称标样集)，根据标样集中样品的近红外光谱运用化学计量学方法建立光谱特征值(如吸光度)与待测成分之间的数学关系(简称数学模型)。当测定未知样品时，只需测定该样品的近红外光谱，然后用已建好的数学模型预测出待测成分的含量。与常规的光谱定量分析不同之处是，近红外光谱分析时所用样品可以不经预处理，通过求解光谱矩阵与待测成分的浓度矩阵来建立数学模型，进行定量。检测固体样品一般采用漫反射技术，对于液体样品的检测用透射方法。建立数学模型的方法主要有：多元线性回归、主成分法、偏最小二乘法等。贴算法相对而言是一种较新的多元数据处理技术，它与逐步回归、主成分回归的显着差异在于考虑全谱区各波长是光谱参数的同时，还兼顾了被分析样品内部各成分之间的关系，因此在NIR分析中得到广泛应用。x0dx0a仪器：Bruker公司VECTOR22/N近红外光谱仪,带漫反射光纤探头波长区间4000-11000cm-1x0dx0a样品:精氨酸阿司匹林固体粉末含阿司匹林48．0％-53．0％,蔗糖酯(片剂辅料，作为润滑剂)x0dx0a实验方法：用1／1000扭力天平准确称取不同比例的精氨酸阿司匹林与蔗糖酯，共10份，分别混合均匀，用压片机压片，得到精氨酸阿司匹林含量不同的片剂(以此含量做为精氨酸阿司匹林片的理论含量一真值)，每种各100片。从每种100片中随机选取10片，用仪器的漫反射光纤探头压住药片，每片正反面各测1次，取平均光谱做为样品光谱。扫描区间为4000-11000cm-1，分辨率为8cm-1。用Bruker公司Bruker公司quant/2软件分析，光谱数据采用加性散射校正预处理，以消除药片表面不同引起的误差，即可得到测量值。x0dx0ax0dx0a2．4阿司匹林精氨酸盐注射液含量测定x0dx0a仪器与试药：仪器79—l电磁搅拌仪；紫外—可见分光光度计。精氨酸，阿司匹林，其余试剂均为分析纯。x0dx0a标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林结晶250．0mg，悬浮于250mL蒸馏水中，在40一50度水浴中不断搅拌至溶解，冷却后移入500ml量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。精密吸取l，2，3，4，5mL分别置于50mL量瓶中，加25mL蒸馏水，用o．1mol/LNaOH溶液调节pH至9一10，在沸水浴中加热5min，冷却后，用0.1mol/l盐酸溶液调节pH至3.0一4.0，加5滴硫酸铁铵指示液，再加蒸馏水至刻度，摇匀。在530nm波长处测定吸收度A。线性回归得方程.x0dx0a测定含量：精密称取阿司匹林精氨酸盐400．0mg置l00mL量瓶中，加蒸馏水溶解，稀释至刻度，摇匀，过滤。取续滤液5mL，置50mL量瓶中，在沸水浴中加热数分钟，冷却，加25mL蒸馏水，以下同标准曲线项下处理，在530nm波长处测定吸收度A，计算阿司匹林精氨酸盐的含量。阿司匹林精氨酸盐的含量＝(测定值／称量值)×loo％，代入数据求得阿司匹林精氨酸盐的含量.x0dx0ax0dx0a3．阿司匹林体内药物分析：x0dx0a3．1反相高效波相色谱法测定阿司匹林血药浓度x0dx0a1仪器与试药：Waters2690高效液相色谱仪，配置有996二极管阵列检测器及Millennium数据处理系统；旋涡混合器(上海青浦沪西仪器厂)；TGL—16高速离心机(上海医用仪器厂)。水杨酸、苯甲酸对照品(中国药品生物制品检定所)；磷酸为分析纯，乙睛为色谱纯；水为超纯水。x0dx0a色谱条件：色谱柱为DiamonsilC18柱(4．6mm×250mm，5um)，流动相为甲酵—乙睛—0．2％磷酸(18：32：50)，检测波长为237nm，流速为1.0ml／min。x0dx0a溶液配制：精密称取10．10mg水杨酸对照品，用甲酵溶解，并定容至10ml，得到1．010mg／L水杨酸的储备液，并用甲醇稀释成不同浓度的系列溶液。精密称取10．44mg苯甲酸，用甲酵溶解，并定容至10ml，得到1．044mg/l苯甲酸的储备液。取lml储备液，用甲醇稀释至loml，得到104．4ug／ml的内标工作液。x0dx0a样品处理与测定：精密量取血清样品0．5nl，加入内标苯甲酸溶液(104．4ug／m1)50ul，乙睛2ml，旋涡振荡2min，15000r／min离心5min，取上清夜20ul，在上述色谱条件下进样，分别记录内标与样品的色谱图与峰面积。按外标法以峰面积计算，即得。x0dx0ax0dx0a讨论x0dx0a阿司匹林及其制剂有多种分析方法，但有其共同点。HPLC分析中，检测柱一般多采用C18柱，检测波长为280左右。滴定法都是根据药物中含游离羧酸的酸性进行滴定，或水解后用酸回滴。其他以数学模型等方法进行的测量，也都是基于阿司匹林的化学结构和性质。x0dx0ax0dx0a参考文献：x0dx0a刘冬，阿司匹林制剂的电极法测定，中国医药工业杂志，1997，28（11）：512x0dx0a王晓燕，高效液相色谱法测定复方阿司匹林片剂的含量，沈阳药科大学学报，2002，9（1）：31x0dx0a杨军，动力学光度法测定痕量乙酰水杨酸，新乡师范高等专科学校学报，2001，15（2）：77x0dx0a南楠，反相高效法相色谱法测定阿司匹林可待因片中磷酸可待因和阿司匹林的含量，药物分析杂志，1999，19（1）：7x0dx0a侯巍，小儿退热灵片中两组分的紫外裙合光谱测定，中国医药工业杂志，2004，35（3）：162乔梁，应用近红外漫反射技术测定精氨酸阿司匹林的含量，药物分析杂志，1998，18（5）：297x0dx0a张晓云，阿司匹林精氨酸盐注射液的制备及其稳定性研究，西北药学杂志，2004，19（2）：71x0dx0a张丽，反相高效波相色谱法测定阿司匹林血药浓度，中国药房，2003，14（5）：289

‘伍’ 请问各高手测量胰腺和血液中某药物的浓度，除了高效液相色谱仪还有其他方法吗有没有测量的试剂盒什么的

药物的测量方法是根据药物本身性质来决定使用什么方法的，也就是说能使用什么方法测量，还是要看被测的是什么药物。现在绝大多数药物含量的测量都是使用高效液相，优点是易操作，精度高，重现性好等，而且很多是药典规定的。

现在的确有地塞米松试剂盒，也就是是Elisa试剂盒，但基本都是用于定性分析的，几乎很少用来定量分析。试剂盒的分析限制中也写明：本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。其中HPLC即指高效液相色谱法，GC/MS是气相色谱法和质谱法。

因为楼主所要分析的是血药浓度，是定量分析，所以还应用液相色谱法相对来说最为准确快捷。当然如果说是纯较真说我就要用滴定法测定血药浓度，也未必不能实现，但是不符合科学的精神和发展的规律。

高效液相色谱分析已经非常普遍了，方法也相当成熟，该用还是用了吧。

‘陆’ 钻鐗╁垎鏋愶细甯哥敤瀹氶噺鍒嗘瀽娉曚笌搴旂敤钬斺旂悊鍖栨硶

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