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能定量分析dna的方法

发布时间:2024-07-03 19:05:30

㈠ DNA含量的测定方法

那要看你用什么方法测定DNA和RNA:
(1)紫外吸收法也就是测量OD(260)和OD(280)的吸收值,这样的方法其它的杂质对测量结果影响大一点,因为其它杂质在这两个吸收波长也有吸收。
(2)荧光法,用PicoGreen荧光染料,测定DNA,RNA浓度比较灵敏,并且适合测量低浓度和微量DNA和RNA,并且受其它杂质的影响不大,缺点要有专门的荧光检测仪器,试剂比较昂贵。
纯化DNA可以买试剂盒,主要有膜吸附法,磁珠分离法,都很方便。

㈡ 测定DNA含量可以用什么方法

外分光光度计 OD260/280比值,如果浓度够大的话可以适当稀释,是OD260在0.1到1之间最好。

OD260值为1时,双链DNA一般为50ng/ul.单链DNA一般为40ng/ul,需要具体测的话还是用荧光定量DNA检测试剂盒,用多功能酶标仪检测。

还有一种就是跑电泳,根据已知浓度条带的亮度对比你提的DNA亮度,这个需要分析软件,肉眼是无法正确比较的。

㈢ dna测量方法

DNA检测
技术有很多,主要分为定性和定量方法。给你举几个:1,分子杂交技术,(包括southern杂交,northern杂交,基因芯片等)分子杂交分析的基本原理是基于DNA探针检测变性而且固定在硝酸纤维素膜上的宿主细胞DNA。这些探针可以不依赖宿主细胞DNA来制备,例如用随机引物制备探针。探针上标记酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由于地高辛标记核酸探针,操作方便、灵敏度高,已标记的探针在4℃贮存可达两年之久,方便随时应用,所以现在常采用地高辛标记核酸探针,用光标记法将光敏Dig标记到探针上,制成光敏-Dig-核酸探针,再与固定在硝酸膜上的靶核酸进行靶DNA分子杂交,使之与抗Dig-碱性磷酸酶结合,最后可用不同的检测方式进行检测,
发光检测
和显色检测均可,灵敏度可达10pg以下2,基于DNA结合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系统是基于两种DNA序列非特异性蛋白,单链DNA(ssDNA)结合蛋白(SSB)和抗ssDNA
的单抗。检测的基本过程是当生物素—DNA单链结合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的单抗与变性的宿主细胞DNA结合最终形成复合物,通过亲合素将此复合物连接到生物素—硝酸纤维素膜,在通过洗涤所有非特异性的被洗脱掉,最后放于有
尿素溶液
的读数仪,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
导致PH值发生变化,读数仪根据PH值的变化换算成DNA的量,从而达到检测残余DNA含量的目的。3,PCR法,其中以实时定量PCR法最为突出荧光定量
PCR是基于PCR扩增时,在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,产物的增加可以通过荧光信号指示,通过实时监控PCR体系中的荧光信号,对样本中初始模板进行定量分析。定量PCR可实时检测产物量,通过加入已知浓度的
标准样品
绘制标准曲线,然后根据待测样品在标准曲线中的位置推算初始模板的浓度,从而达到检测残余DNA含量的目的。此外,对DNA的定量技术也有很多,可以看下这篇文章《核酸定量技术及其在生物检测中的应用》

㈣ 在dna水平上分析基因一级结构,拷贝数变化及在染色体上位置可以采用哪些方法

基因的一级结构是指脱氧核苷酸的排列测序,解析一级结构最精确的技术就是DNA测序,第一代测序技术为Sanger测序法(双脱氧测序法),第二代测速技术是循环芯片测序技术,第三代测序技术是单分子测序技术;分析某种基因的种类及拷贝数,实质上就是对基因进行定性和定量分析,常用的技术包括DNA印迹技术(Southern印记)和实时定量PCR技术;基因在染色体上位置的检测可以通过荧光分子标记法。
该答案由本人查阅资料整理归纳,如有异议,欢迎批评指正。

㈤ 科普讲堂|实时荧光定量PCR检测方法

聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。目前,PCR成为分子生物学研究必不可少的一部分。实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对模板进行定量分析的方法。该项技术可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析,提高了普通PCR技术的特异性和准确性,被广泛应用于基础研究、疾病诊断、农业检测和法医调查等领域。

一、常规PCR

利用DNA分子会在体外95°高温时会发生变性解旋变成单链,然后降温到60°C左右时引物会与单链DNA按碱基互补配对原则结合,接着再升高温度到72°C左右,即DNA聚合酶最适反应温度,DNA聚合酶会沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成相应的互补链,如此循环往复以达到DNA分子扩增的目的,常规PCR技术无法实现精确定量。

二、实时荧光定量PCR

如要对DNA、RNA样品进行精确定量研究,就需要采用实时荧光定量PCR,根据检测实时荧光PCR产物的方式不同,实时荧光定量PCR主要有DNA结合染料法、基于探针的化学法、淬灭染料引物法等类型。

1.  DNA 结合染料法

原理 :应用一种带有荧光的、非特异的DNA结合染料检测PCR过程中积累的扩增产物。

应用于核算定量和基因表达验证。

优缺点: 它们的优点是可以对任何双链DNA 进行定量,不需要探针,具有相对高的灵敏度和可靠性,并且成本低,简单易用,缺点是它们能在反应中结合所有的DNA双链,其中包括在PCR过程中产生的引物二聚体或其他非特异产物。

染料法一般使用的是SYBR Green I染料,这是一种可以与双链DNA小沟结合的荧光染料,不会与单链DNA结合,并且在游离状态下几乎无荧光,只有与双链DNA结合才会发出荧光,因此将PCR扩增产生的双链DNA数量与荧光强度直接关联,产生实时监测的效果。

2.  基于探针的化学法

原理: 应用一个或多个荧光标记的寡核苷酸探针检测PCR扩增产物;依赖荧光能量共振传递检测特异性扩增产物。

应用于核酸定量、基因表达验证、等位基因鉴别、SNP分型、病原体和病毒检测、多重PCR。

优缺点: 探针法的鉴别能力远远大于DNA结合染料法,因为它们只与目的产物结合,从不与引物二聚体或其他非特异产物结合,缺点是它的合成价格高。

探针法中最常用的TaqMan探针是一种寡核苷酸探针,荧光基团连接在探针的5’末端,而淬灭基团则在3’末端,PCR扩增时在加入引物的同时加入探针,探针完整时,荧光信号被淬灭基团吸收,PCR扩增时,5’→3’外切酶活性将探针酶切降解,使荧光基团和淬灭基团分离,从而检测器可以接收到荧光信号。

3.  淬灭染料引物法

原理: 采用荧光标记引物扩增,从而使荧光标记基团直接掺入PCR扩增产物中,依赖荧光能量共振传递。

应用于核酸定量、基因表达验证、等位基因鉴别、SNP分型、病原体和病毒检测、多重PCR

优缺点:探针和目标片段的特异性结合产生荧光信号,因此减少了背景荧光和假阳性,还可进行多重PCR扩增,缺点是原料成本价格高

三、实时荧光PCR仪

实时荧光PCR系统包括热循环仪,用于荧光激发的光学系统以及用于收集荧光数据和管理分析的计算机软件,数据通过实时分析软件以图表的形式显示。

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