现有病毒的主要分析检测方法

A. 植物病毒检测方法

植物病毒病是农业生产上一种重要病害，严重影响农作物的产量和质量, 目前还没有1种治疗效果较理想的药剂，对发病植株做到早期诊断及提前检测就显得尤为重要。植物病毒学历经近百年的发展，植物病毒的检测方法与手段也在不断发展与改进。常用的方法有侵染力测定法、血清学方法、电子显微镜计数和分子生物学法等。
1.4.1侵染力测定法
侵染力测定法是将病毒样本接种在植物上，根据侵染力的大小定量。它的灵敏度在所有定量法中是比较高的，而且是其他定量法的基础。设计一种新的定量法，如果不经过侵染力的验证，将无法判断测定的是病毒或者是具有侵染力的病毒。侵染力测定法包括局部枯斑法、淀粉－碘斑法、系统感染率的测定法等。侵染力测定多用粗汁液来接种，为了避免抑制物质的作用和使半叶枯斑数目控制在一定范围，须用缓冲液稀释接种物。
局部枯斑法 1929年F.O.Holmes发现TMV在心叶烟（Nicotiana glutinosa）接种叶片上引起局部坏死斑点，在一定的病毒浓度范围内，所产生的斑点数目与病毒浓度成正比例。这一发现成为病毒侵染性定量测定的基础（田波，1987）。所有机械传染的病毒都有可能应用局部斑点法，但实际上只有少数病毒具有可用于定量测定的局部斑寄主。一个待测样品所形成的斑点数目除取决于接种物中病毒浓度外，还受试验植物种类、环境条件和接种物中是否含有病毒抑制物质的影响。
淀粉－碘斑法 当所研究的病毒没有过敏性枯斑寄主时，采用此法。Holmes（1931）发现TMV接种的烟叶上有时形成明显的黄化斑块，但不能用于计数。将这种接种叶用95％乙醇加热到80℃固定，然后用I2和KI混合液（10克I2，30克KI，1500毫升H2O）染色时，则侵染点处出现淀粉－碘的蓝色反应。当下午采摘叶片，褪色过夜，然后用碘液染色，则侵染点较周围组织着色浅；当采摘叶片前，植株先在黑暗中放几个小时，再用碘液染色，则侵染点组织着色深。这是由于病毒侵染既降低光合组织中碳水化合物的形成，也降低碳水化合物从光合组织中的运出。淀粉－碘染色的强弱受环境条件的影响较大，不如局部枯斑法可靠，但在标准化条件下仍可用于侵染性的定量测定。
侵染性滴度法 当上述方法都不适用时，可采用侵染性滴度法。即把欲测定样品用缓冲液稀释，可用十倍稀释、成倍稀释、半倍稀释或更低稀释。这种方法的缺点是需用大量实验植物，但可得到较好的结果。此方法可用于介体传染的病毒。

B. 病毒检测方法

检测病毒方法有：特征代码法、校验和法、行为监测法、软件模拟法， 这些方法依据的原理不同，实现时所需开销不同，检测范围不同，各有所长。
1、特征代码法：
特征代码法被早期应用于SCAN、CPAV等着名病毒检测工具中。国外专家认为特征代码法是检测已知病毒的最简单、开销最小的方法。

2、校验和法：
将正常文件的内容，计算其校验和，将该校验和写入文件中或写入别的文件中保存。在文件使用过程中，定期地或每次使用文件前，检查文件现在内容算出的校验和与原来保存的校验和是否一致，因而可以发现文件是否感染，这种方法叫校验和法，它既可发现已知病毒又可发现未知病毒。在SCAN和CPAV工具的后期版本中除了病毒特征代码法之外，还纳入校验和法，以提高其检测能力。

3、行为监测法：
利用病毒的特有行为特征性来监测病毒的方法，称为行为监测法。通过对病毒多年的观察、研究，有一些行为是病毒的共同行为，而且比较特殊。在正常程序中，这些行为比较罕见。当程序运行时，监视其行为，如果发现了病毒行为，立即报警。

4、软件模拟法：
多态性病毒每次感染都变化其病毒密码，对付这种病毒，特征代码法失效。因为多态性病毒代码实施密码化，而且每次所用密钥不同，把染毒的病毒代码相互比较，也无法找出相同的可能做为特征的稳定代码。虽然行为检测法可以检测多态性病毒，但是在检测出病毒后，因为不知病毒的种类，难于做消毒处理。

C. 计算机病毒的主要检测方法有哪些

1. 比较法
用原始备份与被检测的引导扇困闷区或文件进行比较。只要用常规DOS软件和PCTOOLS等工具软件就可以进行。发现新计算机病毒就只有靠比较法和分析法，有时必须结合这两者来一同工作。使用比较法能发现异常，如文件的长度有变化，或虽然文件长度未发生变化，但文件内的程序代码发生了变化。保留好原始备份是非常重要的，制作备份时必须在无计算机病毒的环境里进行。
比较法的好处是简单、方便，不需专用软件。缺点是无法确认计算机病毒的种类名称。另外，造成被检测程序与原始备份之间差别的原因尚需进一步验证，这些要用到以后讲的分析法，查看变化部分代码的性质，以此巧册来确证是否存在计算机病毒。
2. 加总比对法(Checksum)
根据每个程序的档案名称、大小、时间、日期及内容，加总为一个检查码，再将检查码附于程序的后面，或是将所有检查码放在同一个数据库中，再利用此加总对比系统，以判断是否感染了计算机病毒。
这种技术可侦测到各式的计算机病毒，但最大的缺点就是误判断高，且无法确认是哪种计算机病毒感染的，对于隐形计算机病毒也无法侦测到。
3. 特征字串搜索法
用每一种计算机病毒体含有的特定字符串对被检测的对象进行扫描，如果在被检测对象内部发现了某一种特定字节串，就表明发现了该字节串所代表的计算机病毒。国外对这种按搜索法工作的计算机病毒扫描软件叫Virus Scanner。
4. 人工智能陷阱技术
一种监测计算机行为的常驻式扫描技术，它将所有计算机病毒所产生的行为归纳起来，一旦发现内存中的程序有任何不当的行为，系统就会有所警觉，并告知使用者。
这种技术的优点是执行速度快、操作简便，且可以侦测到各式计算机病毒，是一个至少具有主动保护功能的新技术;其缺点就是程序设计难，且不容易考虑周全。
5. 分析法
使用分析法的人不是普通用户，而是防杀计算机病毒技术人员。分析法是防杀计算机病毒工作中不可缺少的重要技术，任何一个性能优良的防杀计算机病毒系统的研制和开发都离汪宽弯不开专门人员对各种计算机病毒的详尽而认真的分析。

D. 自我检测新冠3个方法

新型冠状病毒检测的3种方式主要是核酸检测、病毒基因序列检测以及血清学检测。通过这三种检测方法，顷喊可以判断受检者是否感染新型冠状病毒，是检测新型冠状病毒常用的方法。

1、核拿袭酸检测：核酸检测是对采集的病毒核酸进行直接检测，具有特异性强、敏感度高的特点，是新型冠状病毒检测的主要方法。整个检测过程包括标本处理、核酸提取以及PCR检测等，核酸检测结果显示为阳性时，可确诊感染新型冠状病毒；

E. 花卉类病毒的诊断和鉴定方法有哪些

类病毒因为不具有外壳蛋白，所以不能用血清学、电镜等方法来诊断和检测。类病毒常用的检测方法有生物学检测、双向电泳、RT-PCR和分子杂交等方法。

1 生物学检测

利用类病毒的特异鉴别寄主来诊断和检测。如菊花矮化类病毒（CSVd），可以从待检样品中抽提低分子RNA，接种到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品种、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接种缓冲液的组成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接种时用沾有接种原的刹须刀在菊花和爪哇三七的茎部轻轻切割5～10刀，再用棉棒涂抹。番茄可以用4～5叶期的幼苗直接用涂抹法接种。被接种植物放在30℃左右的温室培育，观察症状。接种36d后，菊花上出现黄色斑点，顶叶较少，从上数第3～5叶上症状更明显。接种45d后，爪哇三七出现顶叶卷曲症状。但没有柑橘裂皮病类病毒接种时症状明显。接种60d后，番茄上不表现任何症状。但回接菊花的Mistletm品种，证明CSVd在番茄上属于潜伏侵染。

生物检测需要严格的温度条件，如果温度条件控制不严格便难以得到可信的结果。此外，检测批量样品，还需要较大的空间。

22 双向电泳检测

2.1 核酸的抽提

抽提缓冲液的组成为0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，简称为TESLP。1g鲜菊花叶片加2～5倍体积的TESLP缓冲液磨碎，加入等体积的水饱和酚∶氯仿（1∶1）处理，离心分离后用乙醇沉淀回收全核酸。之后用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等体积的4mol的LiCl，离心回收2mol LiCl的可溶组分，用乙醇沉淀浓缩后溶于适当体积的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向电泳

按照Singh等的方法进行。首先在室温下用1倍TBE电泳缓冲液分离核酸，直到染料XC-FF达近底部的7.5%为止。然后换成加热到沸腾的0.125倍TBE电泳缓冲液，颠倒正负极并用表面加热器保持电泳板的温度在80℃以上，直到染料XC-FF到达胶的上端。电泳完后用银染色观察核酸的有无（图1）。

图1 正反向电泳法检测菊花矮化类病毒RNA示意图

与生物接种相比，正反向电泳凝胶电泳检测菊花矮化类病毒，可以从相当于2.8mg鲜重的菊花样品中检测到菊花矮化类病毒CSVd，并同时可检测10～20个样品材料。总之，制备用于正反向电泳的粗核酸的方法简便，需要的鲜叶量少，可以作为该类病毒的常规检测方法。正反向电泳凝胶电泳与双向凝胶电泳比较，省去了第一项电泳完后割胶回收的试验步骤，操作更为简便。

F. 妫娴媤in7绯荤粺鐢佃剳鏄钖﹀瓨鍦ㄦ綔鍦ㄧ梾姣掔殑鏂规硶

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