体外药物分析方法的建立

1. 药物分析：检验的基本程序与方法

一、鉴别试验
鉴别就是利用化学法、物理法及生物学方法来确证生化药物的真伪。通常，需用标准品或对照品在同一条件下进行对照试验。枝蠢现将常用的鉴别方法简述如下。
1.化学反应法 通常利用药物与某试剂在一定条件下反应，生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。例如，溶菌酶的鉴别采用呈色法：溶菌酶分子中的四个肽键上的氮原子能与铜离子（cu2＋）络合，生成有颜色的络合物，肽键越多，产生的颜色越深。胃蛋白酶的鉴别采用沉淀法：胃蛋白酶是具有高效、专一催化活性的特殊蛋白质，易受酸、碱、重金属或有机溶剂等的作用，破坏蛋白质肽链的空间结构，引起蛋白质变性，生成不溶性的沉淀。
2.紫外分光光度法 三磷酸腺苷二钠的分子中具有共轭系统，能吸收紫外光。本品的0.01mol/l盐酸水溶液（20μg/ml），在（257±1）nm的波长处有最大吸收。a250nm/a260nm的值应为0.17～0.27。
3.酶法 尿激酶是专属性较强的蛋白水解酶，根据尿激酶能激活牛纤维蛋白溶酶原，而具有相同作用的链激酶不能激活牛纤维蛋白溶酶原而加以区别，并用直接观察溶解纤维蛋白作用的气泡上升法作为判断指标。
4.电泳法 肝素的鉴别采用糖凝胶电泳法：肝素是由d-硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子间组成的酸性粘多糖，其水溶液带强负电荷历纯，于琼脂凝胶板上，在电场作用下，向正极方向移动，与肝素国家标准品对照，其移动位置应相应，
5. 生物法利用生物体进行试验来鉴别药物。例如，用家兔惊厥试验来鉴别胰岛素，是通过胰岛素的降血糖作用进行鉴别的，当剂量过大，血糖降低至一定水平（约30％），家兔即发生惊厥，迅速静注50％葡萄糖注射液，补充血糖，惊厥停止，说明惊厥是胰岛素所致低血糖而引起的。又如，根据肝素钙具有延长血凝时间的特性进行鉴别。
应该指出，由于生化药物的结构复杂，仍有一部分生化药物目前还未找到有效的鉴别方法。例如糜蛋白酶、糜胰蛋白酶、胰蛋白酶等。
二、杂质检查 生化药物分子较大，结构复杂，有时成分并非单一，纯化工艺较难，因此，生化药物的杂质检查就显得非常重要。
1.一般杂质检查 生化药物的一般杂质检查项目包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。其检查的原理及方法与化学药物中的一般杂质检查相同，不再赘述。
2.特殊杂质检查特殊杂质主要是指从生产工艺中引入或原料中带入的杂质。许多生化药物是从生物组织中提取或用微生物发酵法制得，药物中易残存一些杂质或其他成分。例如，胰蛋白酶是从动物膜中提取制得的一种蛋白水解酶，在制备过程中.易带入杂质糜蛋白酶，中国药典（1995年版）和usp（23）均规定要检查此酶，根据胰蛋白酶的特性选用n-乙酰-l-酪氨酸乙酯为底物作糜蛋白酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白酶为 2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5％（g/g）。
三、安全性检查
1.热原检查法（家兔法） 本法是将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，以其体温升高的程度，判定该供试品中所含热原是否符合规定，是一种限度试验法。
（1）检查法：取适用的家兔3只，测定其正常体温后15min以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，然后每隔1h按前法测量其体温1次，共测3次，从3次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高度数。如3只家兔中有1只体温升高0.6℃或以上，或3只家兔体温升高均低于 0.6℃，但升高的总数达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
（2）结果判断：在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总数低于1.4℃；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃ 以上的家兔数仅有1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总数为3.5℃或3.5℃以下，均认为供试品肢搭咐的热原检查符合规定。

2. 如何建立好药物含量的高效液相色谱分析方法

1，首先必须去进行配制药物溶液前处理的工作。找出该药物的溶解性，探索出该药物的有效溶剂，使该药物能在该溶剂中充分溶解，这是药物溶液配制的前处理必然途径，也是进行高效液相色谱含量分析的首要条件。

2，然后就是根据该药物配制溶液的前处理方法，配制好适当浓度的药物溶液，利用该药物溶液，在紫外-可见分光光度计上进行紫外扫描，找到该药物的最大吸收波长，确立适合的高效液相色谱分析的检测波长。因为它是进行高效液相色谱含量分析的基本条件

3，再是色谱柱的选择：根据药物的极性来选择合适极性的色谱柱类型

4，再是流动相的确立。配制一系列的流动相，考察合适的流动相。

5，再是准确度考察。通过精密度、重复性和重现性的考察来衡量仪器的准确度

6，接着是线性关系考察。配制不同浓度的一系列溶液，进行其溶液的色谱扫描。根据所得的不同浓度下的药物峰面积作为纵坐标（Y轴）、以溶液浓度为横坐标（X轴）进行线性回归，得到其线性图，考察其线性程度，即线性相关系数R=？。考察的目的就是：为了我们在做含量分析时，选择一个合适的浓度进行检测，不至于你配制的待测溶液浓度范围不在线性范围之内，造成测量结果的错误。

7，再是最低检测浓度和检测限的考察。目的是为了考察这种方法的实用性，是否符合痕量分析的要求。

8，再是回收率考察。目的是考察方法的准确性。

9，再是稳定性考察。目的是考察试验方法的时间性，指导我们在分析检测时，建立合适的溶液配制到进样的时间段，保证实验结果的准确性。

10，最后是专属性考察。

3. 药物分析中所建立的方法需要分析方法验证其内容有哪些

药物分析中所建立的分析方法内容介绍如下：

3、PH值测定方法：

pH值是溶液中氢离子活度的负对数，用来表示溶液的酸度。用于pH值测定的装置称为pH计或酸度计，酸度计由pH测量电池和pH指示器两部分组成。

4、光谱技术：

光谱技术的主要原理就是可以通过不同的频率对其要检测的药物进行辐射，在一定范围中的频率被一些物质接受的时候就会出现振动以及转动的状况。

5、化学发光技术：

在药物分析检测中，化学发光法是一种较为常见的技术方式，其主要就是基于化学检测系统中相关检测物的浓度以及体系的化学发光强度在特定状况之下呈线性定量关系的原理，通过仪器对整个体系的化学发光强度进行检测，确定待检测的实际含量的方式就是一种痕量分析方法。

6、色谱法：亩判

色谱法又称为“色谱分析”、“色谱分析法”、“层析法”，是一种分离以及分析的方式与手段。它主要就是通过不同的物质在不同的相态之下对其进行有选择的分配，通过流动相对固定相中存在的混合物进行洗脱操作，而在混合物中存在的不同物质会则会通过不同的速度基于固定相进行移动，进而实现分离的最终效果。

7、电泳法：

电泳法是生物技术及生化药物分析的重要手段之一，具有灵敏度高、重现性好、检测范围广、操作简便并兼备分离、鉴定、分析等优点。

8、DNA扩增法：

DNA扩增技术属于PCR技术，可以把试管中的DNA样品的片段进行拓展，达到上百万倍左右，可以通过肉眼直接对其进行观察。

4. 药物分析主要是采用什么等方法和技术

药物分析主要采用色谱、光谱、质谱、比色、生物分析法的方法和技术。具体如下：
1、色谱分析法：包括气体色谱、档派则液相色谱、毛细管电泳等多种方法，主要用于药物分子结构的鉴定、分离和纯化。
2、光谱分析法：包括红外光谱、紫外光谱、荧羡碧光光谱、原子吸收光谱等方法，可以用于药物中特定化合物的鉴定、测定和定量分析。
3、质谱分析法：包行棚括质谱仪、液相色谱-质谱联用仪等方法，常常用于药物中极微量的化合物分离、鉴定和定量分析。
4、比色分析法：该方法通过观察溶液的颜色变化来确定药物中特定化合物的存在量。
5、生物分析法：包括生物检测、酶联免疫吸附测定、分子生物学方法等，主要应用于药物代谢产物、代谢途径的鉴定和制剂中杂质的检验等。

5. 药物分析常用的分析方法有哪些

药物分析常用的分析方法有中和法历行配、非水滴定法、银量法、络合法、碘量法、重氮化法。

一、药品检验工作的基本程序

取样；肢指性状观测；鉴别；检查；含量测定；检验记录与报告

三、统计学

测量误差：测量值和真实值之差。绝对误差和相对误差。真实值：是有经验的人用最可靠的方法对试样进行无限次测定所带饥得的平均值，实际上就是理论值。

系统误差：方法；试剂；仪器；操作误差偶然误差：不可定或随机误差，由偶然原因引起。可增加平得测定次数。测量值的准确度表示测量的正确性，测量值的精密度表示测量的重现性。精密度是表示准确度的先决条件，只有在消除了系统误差后，才可用精密度同时表达准确度。