⑴ 普通培养基的灭菌宜采用
普通培养基的灭菌宜采用间歇灭菌法。
间歇蒸汽灭菌法(fractional sterilization) 利用反复多次的流通蒸汽加热,杀灭所有微生物,包括芽孢。方法同流通蒸汽灭菌法,但要重复3次以上,每次间歇是将要灭菌的物体放到薯派敏37℃孵箱过夜,目的是使芽孢发育成繁殖体。若被灭菌物不耐100℃高温,可将温度降至75℃~80℃,加热延长为30~60分钟,并增加次数。适用于不耐高热的含糖或牛奶的培养基。
⑵ 培养基,外植体,玻璃器皿,金属用具以及外植体各选择什么灭菌方法
酒精消毒
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⑶ 培养基灭菌方法
1.灼烧灭菌
将微生物的接种工具,如接种环、接种针或其他金属虚御用具,直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,可以迅速彻底地灭菌。此外,在接种过程中,试管口或瓶口等容易被污染的部位,也可以通过火焰灼烧来灭菌。
2.干热灭菌
将灭菌物品放入干热灭菌箱内,在160~170℃加热1~2h可达到灭菌的目的。能耐高温的、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等,可以采用这种方法灭菌。差袜岩
3.高压蒸汽灭菌
将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内。把锅内的水加热煮沸,将其中原好汪有的冷空气彻底排除后,将锅密闭,继续加热使锅内的气压逐步上升,温度也随之升到100℃以上。为达到良好的灭菌效果,一般在压力为100kPa,温度为121℃的条件下,维持15~30
min。
⑷ 培养基灭菌的方法
1、高压蒸汽灭菌纳空陪:高压蒸汽灭菌适用于耐高温培养基、接种器具和蒸馏水的灭菌。培养基在配制过程中混入各种杂菌,分装后应立即灭菌,灭菌工作至少应在24小时内完成。一般可亏模在0.105MPa压力、121℃温度下灭菌15 ~ 30分钟。消毒时间不能太长,也不能超过规定的压力范围,否则有机物,特别是维生素,在高温下会分解,失去营养功能,使培养基变质、变色,甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水放入三角瓶中,含水量一般不超过瓶子的2/3,用牛皮纸或硫酸纸包好密封,然后放入高压锅中灭菌,得到无菌水。灭菌后的培养基可以在培养室中预培养3天。如果没有污染,证明灭菌完成,可以使用。暂时不用的培养基最好保存在10℃下。含IAA或GA3的培养基应在一周内用完,其他培养基最多不超过一个月。2、过滤灭菌:一些植物生长调节剂和有机物质,如IAA、GA3、ZT、CM等。,加热时易分解,不能用培养基高温灭菌,所以要用细菌过滤器把洞蠢杂菌过滤掉。细菌过滤器和滤膜(孔径0.45微米)在使用前应高压灭菌。过滤后的溶液应立即加入培养基中。如果是液体培养基,可以在培养基冷却到30℃时添加。如果是固体培养基,必须在培养基凝固前(50-60℃)加入,溶液必须摇匀,与其他成分混合均匀。