dna合成实验研究方法是什么

⑴ 基因分离的化学合成是怎样做的

化学方法合成DNA片段是一种十分成熟和简便的技术，利用DNA合成仪，根据待合成的DNA片段预定的核苷酸序列，可自动地将4种核苷酸单体按3′→5′磷酸酯键连接成寡核苷酸片段。目前常用此方法合成引物、寡核苷酸接头（linker）以及基因片段等。

根据某基因测定的核苷酸序列，或者根据蛋白质氨基酸序列推导的核苷酸序列，可以化学合成相应的基因片段。不同的是组成基因的DNA片段一般比较长，先必须按基因的核苷酸序列化学合野侍成几个200bp左右的DNA片段，然后采用酶促连接法再组装成为含完整目的基因的DNA片段。

主要包括磷酸二酯法和亚磷酸三酯法两种方法合成基因生段，磷酸二酯法的基本原理是，将两个分别在5′-或3′-末端带有适当保护碱基的脱氧单核苷酸连接起来，形成一个带有磷酸二酯键的脱氧二核苷酸；亚磷酸三酯法原理是将所要合成的寡聚核苷酸链的3′-末端链脊李先以3′-OH与一个不溶性载体，如多孔玻璃珠（CPG）连接，然后依次从3′-5′的方向将核苷酸单体加上去，所使用的核苷酸单体的活性官能团都是经过保护的，合成反应的一个循环周期分为脱保护基、偶联反应、封端反应和氧化作用四步反应。

化学合成寡聚核苷酸片段的能力一般局限于150200bp，而绝大多数基因的大小超过了这个范围，需要将较长的基因先几个合成较短的寡核苷酸片段后，再适当连接组装成完整的基因，而这往往使基因制备难度加大，而且化学基因合成相比之下比较价格昂贵，棚迟因此这种方法主要适用于已知核苷酸序列的、分子量较小的目的基因的制备。对于较长的基因的合成，可根据基因或氨基酸序列，将化学合成寡核苷酸方法与酶促合成DNA的方法结合起来，也可进行基因的人工合成，具体的操作为：首先化学合成多个含有80100个核苷酸的寡聚核苷酸；每个寡聚核苷酸片段之间有1924个核苷酸的重叠序列；再将各个寡聚核苷酸等量（摩尔浓度）混合，在DNA聚合酶（或emphasis：role=italicTaqemphasis酶）作用下，通过重叠延伸拼接技术（sequence：overlapped：extension，SOE-PCR），各寡聚核苷酸又作为模版，使单链部分补齐成为双链；DNA变性成单链，各单链寡聚核苷酸片段之间仍有1924个核苷酸的重叠序列，两个单链部分再经SOE-PCR补齐，获得双链。

⑵ 典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤

重组DNA技术主要包括四个步骤：提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。

1、提取目的基因：

获取目的基因主要有两条途径：一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因；另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。

2、目的基因与运载体结合：

目的基因与运载体结合的过程实际上是不同来源的DNA重新组合的过程，是基因工程的核心。

3、将目的基因导入受体细胞：

用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞，主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。目的基因导入受体细胞后，就可以随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌的繁殖速度非常快，在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。

4、目的基因的检测和表达：

目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过检测与鉴定才能知道。受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过程。

(2)dna合成实验研究方法是什么扩展阅读：

重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。