研究微生物的方法

1. 微生物的培养方法有哪些

微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：
①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长;
②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌;
③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。

2. 微生物多样性研究方法有哪些及其各自的优缺点

微生物生态学，是指研究微生物与其他生物（包括微生物）。而微生物多样性，微生物与环境之间的学科，是研究生物与生物，讲的是微生物的物种的多样性，微生物基因的多样性和微生物生存的生态系统的多样性。微生物生态学的重点在于关系的研究，而微生物多样性在于现状的研究生态学， 生物与非生物之间关系的一门学科，也就意味着，是一个多样性的概念

3. 不可培养微生物的研究方法和研究意义

稀释培养法和高通量培养法 d.pp3D 9/
在地球环境中，海洋环境中迄今可培养微生物的比例最低，仅为0.001% ～ 0.1%，这是由于海洋环境中主要是寡营养微生物，它们在人工培养时往往受到少数优势生长的微生物的竞争作用而不能生长。为了克服该缺陷，1993 年Button从概率论的角度提出一个崭新的方法，即稀释培养法（Dilution culture）。该方法认为，当把海水中微生物群体稀释至痕量时，在海水中主要存在的寡营养微生物可以不受少数几种优势微生物的竞争作用的干扰，因而主体寡营养微生物被培养的可能性会大大提高。随后，Schut等的实际操作验证了该理论的正确性。 ';/84j-3F
2002 年Connon在稀释培养法的基础上提出高通量培养法（High-throughput culturing，HTC）。将样品稀释至痕量后，采用小体积48 孔细胞培养板分离培养微生物。该方法不仅有效提高微生物的可培养性，还可在短期内监测大量的培养物，大大提高工作效率。Cho等利用该方法从太平洋近海和远洋海水中也分离出多种新菌。Rappé 和Connon结合荧光原位杂交技术（FISH），对高通量培养法进行了改进，根据从培养板各孔中针对性地检测SAR11 进化分支的海洋细菌的存在，在较短时间内对目标微生物进行了大量的培养。但是，稀释培养法和高通量培养法成功的原因恰恰又是制约其进一步发展的障碍。在样品稀释、微生物间的不利作用被削弱的同时，有利作用也被削弱。例如，当微生物被极度稀释、初始接种量很小时，一些微生物分泌的代谢产物也被稀释，其他关联微生物细胞由于缺乏这些必须的代谢产物，生长就会受到抑制；另外，缺少种间的共生关系和群体效应，很多微生物仍然不可培养。 O3!d(dY=_
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3.2 扩散盒培养法 GOW"o"S
Kaeberlein〔2〕等在分离培养潮间带底泥中的微生物时使用一种新颖的自制培养仪器，为其起名为扩散盒（Diffusiongrowth chamber）。扩散盒由一个环状的不锈钢垫圈和两侧胶连的0.1μm 滤膜组成，滤膜只能允许培养环境中的化学物质通过而不能让细胞通过。将底泥样品置于扩散盒内的半固体培养基中，扩散盒置于鱼缸底部的天然海洋底泥上，往鱼缸内加入天然海水并保证扩散盒内存有一定空气供微生物生长。培养时，使天然海水循环流动，并不断注入新鲜的海水。培养1 周后培养基上产生大量的微型菌落，数目高达接种微生物的40%。这种培养方法能较大程度地模拟微生物所处的自然环境，由于化学物质可以自由穿过薄膜，可保证微生物群落间作用的存在，提高微生物可培养性。扩散盒法的主要不足是操作比较繁琐。 b%nkIPA
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3.3 细胞包囊法 hNO )~rt
Zengler 等将海水和土壤样品中的微生物先进行类似稀释培养法的稀释过程，然后乳化，部分微生物形成了仅含单个细胞的胶状微滴。然后将胶状微滴装入层析柱内，使培养液连续通过层析柱进行流态培养。层析柱进口端用0.1μm 滤膜封住，防止细菌的进入而污染层析柱；出口端用8μm 滤膜封住，允许培养产生的细胞随培养液流出。该方法的特点是让微生物在开放式培养液中生长，使培养环境接近于微生物的自然生长环境，能够很好地提高微生物可培养性，但成本较高，不利于普及使用。 & zgPN8u
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3.4 序列引导分离技术 _:5=| 2-E
序列引导分离技术（Sequence-guiding isolation）是根据微生物基因组中特定基因的特异性序列，设计引物或杂交探针，以培养物中目标序列存在和变化情况为标准，来指导对微生物最优培养条件的选择，培养出新的微生物。Stevenson在细菌培养过程中采用了多种培养条件的组合，导致培养方案繁多复杂。为了减少分离细菌的工作量、节省时间，用PCR 作为监测手段来确定目标细菌是否得到培养。当细菌在固体培养基上长出菌落后，用缓冲液冲洗培养基表面，提取冲洗液中细菌的DNA，根据目标细菌的16S rDNA扩增情况判断目标细菌的存在与否。继续用PCR方法监测目标细菌直至分离得到纯菌株。Béjà 等通过对尚未培养的海洋变形细菌的BAC 基因文库进行研究，发现该类菌具有编码视紫红质的基因片段。视紫红质是光营养过程中不可或缺的化学物质。据此设想增加光照可提高该菌的可培养性，而进一步的实验结果验证了该假设的正确性。此外，Breznak指出，分子原位杂交技术可以对推断目标微生物的代谢方式和营养需求提供帮助，极大地节省工作时间，操作也很简便，仅需要一种特异性的探针，显示了在微生物培养时引入分子生物学技术作为引导的优势和力量。

4. 研究肠道微生物有哪些方法与技术

研究肠道微生物有哪些方法与技术
肠道微生态系统是哺乳动物健康与疾病的重要基础,在生理、病理、预防、治疗中都具有重要的地位和作用[1]。对于哺乳动物,肠道微生物的营养作用非常重要,如合成维生素、消化碳水化合物、氨的利用、脂的利用以及合成酶类[2]。在食物相对缺乏时,肠道多形类杆菌对糖苷水解酶的分泌会增多,提高肠道微生物群系利用食物的能力[3]。可见,肠道微生态系统能根据食物的特点做出改变,以其功能的多样性和较大的适应性来应对外界环境的变化。人体肠道微生物群基因的多态性还为宿主提供了许多人体自身所不具备的酶与生化途径,从而使得人体不易消化的食物残渣及上皮细胞分泌的内生粘液被发酵利用[4]。为探寻肠道微生物在机体的营养与健康以及疾病与治疗机制中的作用,越来越多的科研工作者开始关注对肠道微生物的研究[5,6]。悉生生物学、厌氧培养技术、电镜技术、细胞分子生物学、基因组学、代谢组学及蛋白质组学等现代科学技术的发展对肠道微生态的研究起到了积极的推动作用[7,8]。在Biolog等研究方法中,需先将肠道中的微生物提取出来,所得到的菌悬液,既保证活体微生物的种类和数量,又去除可能会干扰研究结果的杂质[9]。

5. 研究微生物代谢途径常用的方法有哪些

微生物的代谢调节主要有两种方式：酶合成的调节和酶活性的调节.
酶合成的调节
【酶合成的调节】：微生物细胞内的酶可以分为组成酶和诱导酶两类.组成酶时微生物细胞内一直存在的酶,它们的合成只受遗传物质的控制,而诱导酶则时在环境中存在某种物质的情况下才能够合成的酶.例如,在用葡萄糖和乳糖作碳源的培养基本上培养大肠杆菌,开始时,大肠杆菌只能利用葡萄糖而不能利用乳糖,只有当葡萄糖被消耗完毕以后,大肠杆菌才开始利用乳糖,只有当葡萄糖被消耗完毕以后,大肠杆菌才开始利用乳糖.
酶活性的调节
【酶活性的调节】：微生物还能够通过改变已有酶的催化活性来调节代谢的速率.酶活性发生主要原因时,代谢过程中产生的物质与酶结合,致使酶的结构产生变化.这种调节现象在核苷酸、维生素的合成代谢中十分普遍.
总结
上述两种调节方式时同时存在,并且密切配合、协调作用的.通过对代谢的调节,微生物细胞内一般不会累积大量的代谢产物.

6. 微生物培养方法

微生物培养法是在人为条件下繁殖微生物的方法。根据微生物的种类以及对养料、温度、氧气、水分、酸碱度等环境条件的要求不同，并联系生产和实验上的具体要求，可有不同的培养方法。可分好气培养法和厌气培养法两类。中海生物技术的培养基一是好气微生物培养法，常用：①摇床培养法，即将微生物接种于盛有液体培养基的三角瓶后，放在恒温培养室中的摇床上作有节奏的振荡，使空气不断进入培养液中，促其良好生长;②浅盘培养法，又称表面培养法，在盘内放一浅层培养基，使微生物能够充分接触空气，而有利于生长繁殖，但此法所需空间大，并且容易污染杂菌;③深层培养法，适用于好气微生物的大规模发酵培养，在大容积的液体培养基中，通入无菌空气，并不断搅拌，可使微生物充分接触空气，迅速繁殖并积累代谢产物。二是厌气微生物培养法，实验室常用化学还原剂或抽气机吸除培养基中的分子氧，也有用静止状态的深层培养法。在生产中常用密封式发酵罐或不通风的固体发酵法。

7. 研究微生物的各种试验方法总结！

推荐《微生物学实验》咯，高教社出版的，作为实验教材用的

8. 微生物研究方法

主要为如下：
一、显微技术研究

二、无菌操作技术研究

三、纯种培养技术

更为详细的讲解过程请参考：http://wenku..com/view/59e9691ca76e58fafab00311.html

9. 微生物群落结构的研究方法有哪些

分离培养技术在土壤微生物的研究中有很大的局限性,因为土壤中的微生物大部分还处于不能被分离培养状态.随着微生物研究技术的发展尤其是分子生物学技术的发展,一系列不依赖于培养的技术在土壤微生物研究中得到广泛应用.本文介绍了生物标志物法、SCSU、DNA复性分析、DGGE、TGGE、ARDRA、T-RFLP、SSCP、PAPD和ERIC-PCR图谱分析等方法在土壤微生物群落结构研究中的应用.