Ⅰ 几种细胞固定方法
选择最佳固定液标准是: (1)最好地保持细胞和组织的形态结构; (2)最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的; (3)不要用可能带有自发荧光的固定剂,如带有苦味酸的固定剂,还有甲醛升汞固定液,会使上皮细胞产生非特异性荧光; (4)固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。 单纯固定液(1)4%中性甲醛固定液:最常用的固定液,能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作(Job)。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的,其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处,保存时间不超过一个月。 甲醛(40%) 100ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 4.0g 蒸馏水 900ml (2)乙醇固定液:使用时以80%-95%的浓度为宜,具有硬化、固定、脱水等作用,对组织渗透力较弱,因此很少单独使用,但其保存组织中的核酸强于中性甲醛,故常用于有核酸操作的实验或检查,假如用于证实尿酸结晶和保存糖原,可用于100%乙醇固定组织。 (3)4%多聚甲醛固定液:主要用于培养细胞的固定。 混合固定液(1)乙醇-甲醛(乙醇-福尔马林,AF)固定液:适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用,固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。 甲醛(40%) 100ml 95%乙醇 900ml (2)B5(醋酸钠-升汞-甲醛)固定液:多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。 无水醋酸钠 1.25g升汞 6.0g蒸馏水 90ml 使用前加入甲醛 10ml (3)Bouin固定液:非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀,收缩很少,不会使组织变硬变脆。需现配现用。 饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml(4)Carnoy固定液:穿透能力强,可很好的固定细胞质和细胞核,非凡适用于固定外膜致密的组织,也适用于糖原及尼氏小体的固定。 无水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml (5) Zenker固定液:经此液固定的标本,细胞核和细胞质染色颇为清楚,但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光,以免引起化学变化而失效。 升汞 5.0g 重铬酸钾 2.5g 蒸馏水(加至)100ml
Ⅱ 组织和细胞的固定的方法有哪些
组织和细胞的固定的方法,浸润法
浸润法是组织化学和免疫
组织化学常用的固定方法,一次要处理许多组织样品时也多用此法。
预先需估计固定剂的用量,并在取材前配好固定液,分装于小容器内,在容器上标记组别和取材时间。容器内放人记录组织类型的纸条,以便包埋时辨认。固定液的用量应是样品的40倍,以保证组织充分固定。固定时间可根据所选固定液和组织类型而定。
若进行酶组织化学染色,应在4℃短时间固定,固定时间长会导致酶活性减弱,甚至消失。
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http://doc.bio1000.com/show-3439.html
Ⅲ 请问组织和细胞的固定用什么方法
灌流固定法
此法是经血管途径,将固定液灌注到欲固定的器官内,使生活的细胞在原位及时迅速固定,取下组织之后再浸入相同的固定液内继续固定。
灌流固定时大动物多采用输液方式,将固定液从一侧颈总动脉或股动脉输入,从另一侧切开静脉放血,输入固定液与放血同时进行。固定液的输人量因个体不同而异,即500―2000ml不等。
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生物科研院所
生命科学研究所,生命科学学院,