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紫外分析方法验证

发布时间:2023-07-22 18:23:36

1. 紫外分光光度法的验证内容和要求

验证内容??可否理解为能做什么
一般来说,用紫外分光光度计来检测,都是测的微量或痕量离子的含量(一般是浓度),一般其测定需要借助显色剂或退色剂。测定时首先需要配标准溶液,然后测待测样品,得到的吸光度值在标准曲线上查找得到对用的浓度。
要求?检测的要求还是被测物的要求?
监测的时候,一般需要先校正光度计,然后用空白走基线,然后才能开始测定。测定的时候需要有稳定的电压,所以很多时候需要稳压器。
被测物:一般要求被测物中离子的含量不要太高,一般到g/L就足够大了,据我所知,常被监测的浓度范围是ppm或ppb级的。被测物最好不要有太多杂质,不然会干扰测定的,所以测实际样品是一般需要预处理;最好不要有颜色,这样必定会干扰测定;一定不能有固体!

2. 如何验证紫外线的存在

紫外线的最大特点是荧光效应
所以,可以让光照射荧光物质看看能否发光来检测光线中有没有紫外线。
顺便介绍下紫外线的发现就能更详细的明白如果验证紫外线的存在
1801年的一天,有一位研究太阳光谱的科学家突然想要了解太阳光分解为七色光后有没有其它看不见的光存在。当时他手头正好有一瓶氯化银溶液。人们当时已知道,氯化银在加热或受到光照时会分解而析出银,析出的银由于颗粒很小而呈黑色。这位科学家就想通过氯化银来确定太阳光七色光以外的成份。他用一张纸片醮了少许氯化银溶液,并把纸片放在白光经棱镜色散后七色光的紫光的外侧。过了一会儿,他果然在纸片上观察到醮有氯化银部分的低片变黑了,这说明太阳光经棱镜色散后在紫光的外侧还存在一种看不见的光线,这位科学家把这种光线称为紫外线。
这位科学家就是里特,1776年12月16 日,里特诞生于德国的西里西亚。小时候因家境贫寒,没有念过几年书。14岁时就去一家药店当了学徒。在学徒期间,里特贪婪地阅读了许多书籍,懂得了不少化学和物理学知识。凭着刻苦的自学,20岁那年,他考进了耶拿大学,后来在化学和电生理学方面作出的不少贡献。1799年,他用伽伐尼电池成功地从硫酸铜溶液中电解出铜,由此得出静电与伽伐尼电之间是一致的结论。他还正确指出产生伽伐尼电流的原因是伽伐尼电池内部发生了化学反应,从而成为正确解释伽伐尼电流成因的第一个人。1802年,里特制作了第一个干电池,1803年研制成功蓄电池。
里特在物理学方面的主要贡献就是发现了紫外线。紫外线是比紫光波长更短的辐射,是太阳光谱中的一部分,人们用肉眼是看不见的。强烈的紫外光照射,对人体,生物都有害,但适量的紫外光却可使用感到精神爽快,可以促进机体的新陈代谢,紫外光在医学上还被用来杀菌。另外,人们根据紫外线的“光激发光” (紫外线诱发物质发光) 现象,还创造了一种新分析方法,即荧光分析,它不仅可以检测物质的结构,而且还可以很清楚地发现人眼难以发现的机器零件的裂缝。
紫外线的发现给人类带来了福音,可它的发现者里特却由于家境贫寒,生活清苦,正在他充满憧憬向科学高峰攀登时,却被肺病夺去了生命,在死时年仅34岁。

3. 紫外—可见吸收光谱分析方法

4.3.1.1 定性分析

无机元素的定性分析应用紫外—可见分光光度法比较少,主要采用原子发射光谱法或化学分析法。在有机化合物的定性分析鉴定及结构分析方面,由于紫外-可见吸收光谱较为简单,光谱信息少,特征性不强,并且不少简单官能团在近紫外光区及可见光区没有吸收或吸收很弱,在应用时也有较大的局限性。但是,这种方法可适用于不饱和有机化合物,尤其是共轭体系的鉴定,以此推断未知物的骨架结构。此外,还可配合红外光谱法、核磁共振波谱法和质谱法等常用的结构分析法进行定性鉴定和结构分析,不失为一种有利的辅助方法。

吸收光谱的形状、吸收峰的数目和位置及相应的摩尔吸光系数,是定性分析的光谱依据,而最大吸收波长λmax及相应的εmax是定性分析的最主要参数。比较法有标准物质比较法和标准谱图比较法两种。利用标准物质比较,在相同的测量条件下,测定和比较未知物与已知标准物的吸收光谱曲线,如果两者的光谱完全一致,则可以初步认为它们是同一类化合物;利用标准谱图或光谱数据比较,对于没有标准物质或标准物质难于得到的物质,此方法适用。

4.3.1.2 结构分析

紫外—可见分光光度法可以进行化合物某些基团的判别,共轭体系及构型、构象的判断。

(1)某些特征基团的判别

有机物的不少基团(生色团),如羰基、苯环、硝基、共轭体系等,都有其特征的紫外或可见光吸收带,紫外-可见分光光度法在判别这些基团时,有时是十分有用的。如在270~300nm处有弱的吸收带,且随溶剂极性增大而发生蓝移,就是羰基产生吸收带的有力证据;在184nm附近有强吸收带、204nm附近有中强吸收带、260nm附近有弱吸收带且有精细结构,则是苯环的特征吸收,等等。

(2)共轭体系的判断

共轭体系会产生很强的K吸收带,通过绘制吸收光谱,可以判断化合物是否存在共轭体系或共轭的程度。如果一化合物在210nm以上无强吸收带,可以认定该化合物不存在共轭体系;若215~250nm区域有强吸收带,则该化合物可能有两至三个双键的共轭体系,如1,3-丁二烯,λmax为217nm,εmax为21000;若260~350nm区域有很强的吸收带,则可能有三至五个双键的共轭体系,如癸五烯有五个共轭双键,λmax为335nm,εmax为118000。

(3)异构体的判断

包括顺反异构及互变异构两种情况的判断。

顺反异构体的判断:生色团和助色团处于同一平面时,会产生最大的共轭效应。由于反式异构体的空间位阻效应小,分子的平面性较好,共轭效应强,因此λmax及εmax都大于顺式异构体。

互变异构体的判断:某些有机化合物在溶液中可能有两种以上的互变异构体处于动态平衡中,这种异构体的互变过程常伴随有双键的移动及共轭体系的变化,因此会产生吸收光谱的变化。最常见的是某些含氧化合物的酮式与烯醇式异构体之间的互变。例如,乙酰乙酸乙酯就是酮式和烯醇式两种互变异构体,它们的吸收特性不同,酮式异构体在近紫外光区时λmax为272nm(εmax为16000);烯醇式异构体的λmax则为243nm(εmax为16000)。两种异构体的互变平衡与溶剂有密切关系,在像水这样的极性溶剂中,由于羰基可能与H2O形成氢键以降低能量达到稳定状态,所以酮式异构体占优势;而在像乙烷这样的非极性溶剂中,则形成分子内的氢键且形成共轭体系,以使能量降低达到稳定状态,所以烯醇式异构体比率上升。

此外,紫外—可见分光光度法还可以判断某些化合物的构象(如取代基是平伏键还是直立键)及旋光异构体等。

4.3.1.3 定量分析

紫外—可见分光光度法定量分析的常见方法有以下几种。

(1)单组分的定量分析

如果在一个试样中只要测定一种组分,且在选定的测量波长下,试样中其他组分对该组分不干扰,那么进行单组分的定量分析较为简单。一般有标准对照法和标准曲线法两种。

标准对照法:在相同条件下,平行测定试样溶液和某一浓度cS(应与试液浓度接近)的标准溶液的吸光度Ax和AS,则由cS可计算出试样溶液中被测物质的浓度cx

AS=KcS,Ax=Kcx,cx=cSAx/AS

由于标准对照法仅使用单个标准,引起误差的偶然因素较多,故结果往往较不可靠。

标准曲线法:是实际分析工作中最常用的一种方法。配制一系列不同浓度的标准溶液,以不含被测组分的空白溶液作为参比,测定标准系列溶液的吸光度,绘制吸光度-浓度曲线,称为校准曲线(包括标准曲线或工作曲线)。在相同条件下测定试样溶液的吸光度,从校准曲线上找出与之对应的未知组分的浓度。

此外,有时还可以采用标准加入法(做法与原子吸收光谱法相同)。

(2)多组分的定量分析

根据吸光度具有加和性的特点,在同一试样中可以同时测定两种或两种以上的组分。假设要测定试样中的两种组分为A、B,如果分别绘制A、B两纯物质的吸收光谱,可能有三种情况,如图4.12所示。图4.12 a表明两组分互不干扰,可以用测定单组分的方法分别在λ1、λ2测定A、B两种组分;图4.12 b表明A组分对B组分的测定有干扰,而B组分对A组分的测定无干扰,则可以在λ1处单独测量A组分,求得A组分的浓度cA,然后在λ2处测量溶液的吸光度及A、B纯物质的和,根据吸光度的加和性则可以求出cB;图4.12c表明两组分彼此互相干扰,此时在λ1、λ2处分别测定溶液的吸光度

,而且同时测定A、B纯物质的

,然后列出联立方程,解得cA、cB

现代岩矿分析实验教程

式中:Mr为衍生物的相对分子质量,扣除生色团的相对分子质量后得到该化合物的相对分子质量;l为吸收介质厚度(cm)。

(2)氢键强度的测定

溶剂效应对吸收光谱的影响表明,溶剂极性增大,会引起吸收带的蓝移和红移,主要是由于溶质分子与溶剂分子的相互作用而引起的,如果它们之间具有可形成氢键的基团,则是由于形成氢键所引起的,因而可以通过吸收波长的移动程度来测定氢键的强度。

(3)在电化学研究方面的应用

分光光度法与电化学结合,构成了一个崭新的研究领域——光谱电化学。光谱电化学技术包括透射技术、镜反射技术和内反射技术三种。以分光光度法为测量手段,研究某些无机物、有机物和生物物质在电极上的电化学行为,可以同时获得氧化还原体系的吸收光谱和氧化还原电位,以此研究所发生的电化学反应的历程及动力学;还可以测定发生电化学反应所转移的电子数、标准电位、摩尔吸光系数以及反应中间产物或最终产物的扩散系数等。光谱电化学发展很快,在研究无机、有机和生物化学氧化还原机理和均相反应动力学等方面将会发挥极大的作用。

4. 紫外方法验证时定量限、检测限怎么

分别取上述6个浓度的线性测试溶液,按照紫外分光光度计操作规程,用1cm吸收池,在231nm波长处,测定各自吸收度。
4.3.3
线性统计:
以吸收度为纵坐标,测试溶液的浓度为横坐标,用EXCEL软件进行线性回归分析,记录线性回归方程和线性相关系数r。相关系数r应大于0.99。
4.3.4
检测限,定量限根据线性数据中得到的线性回归数据,计算方法的检测限,定量限。检测限为:LOD=3.3×SD/B定量限为:LOQ=10×SD/B据非法规资料,具体怎么来的我也弄不清楚!我也在做清洁验证的紫外方法验证,现在我检测限采用产生吸收度0.01的浓度为检测限

5. 原料药清洁验证可以用紫外检测方法

最好还是别用,紫外不如液相可以留下明确的验证图谱,而紫外自能有一个数字的记录,毕竟验证是给别人看的,要拿出有说服力的证据,至少证据可以保留存档吧。此外,紫外没有选择性,一旦测定波长不能检测到残留的物质,结果可能出现假阴性。如果在验证开始就准备编数据自欺欺人,还是紫外,将来验证的时候好编,也拿不到什么把柄,一旦出问题就是你来负责,你看看那个更合适。

6. 如何利用紫外可见分光光度法对药品含量进行测定

对于已经上药典或取得生产批件,有质量标准的项目,直接按照药品质量标准规定的实验方法测定即可。对于处在研究过程,还没有质量标准的新药,应首先建立含量测定的分析方法,进行严格的方法学验证后即可以测定。方法学验证的工作包括:测定波长选择、样品的稳定性、灵敏度研究、专属性研究、线性范围研究、准确度研究、精密度研究和耐受性研究等,这些工作完成后,证明方法的可行性后,就可以测定药品的含量了。如果是生物样品,还要考虑样品的前处理方法。

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