㈠ 简述几种DNA测序的方法，比较优缺点
基因芯片的原理是碱基配对。样品通过一条或多条已知序列经过标记的核酸探针进行杂交，通过检测杂交结果而测定样品序列，优点是可以一次分析大量样品，缺点是容易出现假阳性。基因测序的原理是双脱氧链终止法，用仪器测定一条DNA序列，优点是准确率高，没有假阳性，只是通量略低。
㈡ 如何对基因测序结果进行分析
测序过程常见问题分析与解答
1、为什么找不到pcr引物?
答：以下几种情况，将无法找到做pcr时的引物序列
(1)用pcr引物作为测序引物进行测序时，所测序列是从引物3’末端后第一个碱基开始的，所以自
然就找不到您的引物序列了。有两种方法可以得到您的引物序列。对于较短的pcr产物(<800bp)，
可以用另一端的引物进行测序，从另一端测序可以一直测到序列的末端，就可以在序列的末端得到
您的引物的反向互补序列。对于较长的序列，一个测序反应测不到头，因此就只能将您的pcr产物片
段克隆到适当的载体中，用载体上的通用引物进行测序。由于载体上的通用引物与您的插入序列之间
还有一段距离，因此就可以得到您的完整的引物序列。由于在测序的起始端总会有一些碱基无法准确
读出，因此，您如果想得到您的pcr产物的完整序列，最好克隆后进行测序。
(2
pcr产物用t载体克隆后，由于克隆的方向是随机的，因此，当您在一条链上找不到您的引物序列
时，试图在互补链上寻找您的引物序列。
(3)当测序引物离您的插入片段很近时，有时可能也无法找到您的引物的全序列。这主要是因为有时
测序的起始端由于未去除的染料或引物二聚体的干扰，造成起始区的序列不好，可能无法找到您的引
物完整序列。
(4)有时，质粒做模板进行测序时，由于某些原因，质粒上没有插入外援片段，为空载体，所测的序
列完全为载体序列，此时自然也找不到引物序列。
2、dna测序样品用什么溶液溶解比较好?
答：溶解dna测序样品时,用灭菌蒸馏水溶解最好。dna的测序反应也是taq酶的聚合反应,需要一个最佳的
酶反应条件.如果dna用缓冲液溶解后,在进行了测序反应时,dna溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体系条件,造成taq酶的聚合性能下降。
有人溶解dna测序样品时使用te
buffer。的确，te
buffer能增加dna样品保存期间的稳定性，
但te
buffer对dna测序反应有影响，根据经验，推荐使用灭菌蒸馏水来溶解dna测序样品。
3、提供dna测序样品时，提供何种形态的比较好?
答：推荐客户提供菌体，由测序公司来提取质粒，这样dna样品比较稳定。
如果自己提供dna样品，我们也很欢迎，但一定要注意样品纯度和数量。
提供的测序样品为pcr产物时，特别需要注意dna的纯度和数量。pcr产物应该进行切胶回收，否则无法得到良好的测序效果。
有关dna测序样品的详细情况请严格参照“测序模板的要求”部分的说明。
㈢ DNA测序原理及方法
这位是搞分子生物学的吗?
DNA测序的方法有很多种. 目前最常见的是双脱氧终止法了. 在测序用的缓冲液中含有四种dNTP及聚合酶. 测序时分成四个反应, 每个反应除上述成分外分别加入2,3-双脱氧的A, C, G, T核苷三磷酸(称为ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP), 然后进行聚合反应. 在第一个反应物中, ddATP会随机地代替dATP参加反应一旦ddATP加入了新合成的DNA链, 由于其3位的羟基变成了氢, 所以不能继续延伸. 所以第一个反应中所产生的DNA链都是到A就终止了; 同理第二个反应产生的都是以C结尾的; 第三个反应的都以G结尾, 第四个反应的都以T结尾, 电泳后就可以读出序列了. 也许这样说你不一定明白. 举一个例子, 假如有一个DNA, 互补序列是GATCCGAT, 我们试着做一下:
在第一个反应中由于含有dNTP+ddATP, 所以遇到G, T, C三个碱基时没什么问题, 但遇到A时, 掺入的可能是dATP或ddATP, 比如已合成到G, 下一个如果参与反应的是ddATP则终止, 产生一个仅有2个核苷酸的序列: GA, 否则继续延伸, 可以产生序列GATCCG, 又到了下一个A了. 同样有两种情况, 如果是ddATP掺入, 则产生的序列是GATCCGA, 延伸终止, 否则可以继续延伸, 产生GATCCGAT.
所以在第一个反应系统中产生的都是以A结尾的片段:
GA, GATCCGA,
同理在第二个反应中产生的都是以C结尾的片段:
GATC, GATCC,
在第三个反应中产生的都是以G结尾的片段:
G, GATCCG
在第四个反应中产生的都是以T结尾的片段:
GAT, GATCCGAT,
电泳时按分子量大小排列, A反应的片段长度为2, 7; C反应的为4, 5; G反应的为1, 6; T反应的为3, 8, 四个反应的产物分别电泳, 结果为
8 7 6 5 4 3 2 1
A | |
C | |
G | |
T | |
我们可以从右向左读, 为GATCCGAT, 至此, 测序完成(上面这个图在网络知道中显示不正常, 因为网络知道的网页用的是比例字体, 你如果想看它, 拷贝到记事本中, 用等宽的字体来看).
㈣ DNA测序基本原理及流程是什么
PCR循环测序法是将PCR扩增和核酸序列分析技术相结合,从而形成的一种测定核苷酸序列的研究方法,也称作线性扩增测序.该方法采用PCR仪加热使DNA模板变性,在TaqDNA聚合酶作用下,以温度循环模式在模板上进行多轮的双脱氧核苷酸测序反应,线性扩增标记的DNA分子.
PCR循环测序法与以往的测序方法相比,其优点在于：大大减少所需的模板量；能提高测序反应产生的信号,降低了操作的复杂性,且聚合酶的用量减少；可在小量制备的模板上进行筛选反应；高温下进行的测序反应使DNA聚合酶催化的聚合反应能够通过模板二级结构的区域；双链闭环DNA可以直接作为反应模板应用,不用作预先碱变性处理.由于PCR循环测序法能够简单、快速地检测特定序列,因此, PCR循环测序法在核酸序列分析研究中受到广泛的重视.