1. 影响荧光分光光度法定量测定的主要因素有哪些
影响荧光分光光度法定量测定的主要因素
1.激发光照射
有一些荧光物质若受到强光照射,会发生分解而导致F↓。所以,荧光分光光度计通常在激发光单色器后装配有光闸,在测定时才打开光闸让激发光照射样品池。
2.温度
温度↑,荧光效率下降,F↓。因为,温度↑,增加分子间碰撞机会而使能量消耗掉。
3.pH值
pH值能改变某些荧光物质的电子构型从而影响荧光强度。
4.溶剂
有些溶剂会使荧光效率下降,也可能带来干扰荧光。
2. 关于荧光分析的问题,急!!!!!!!!!
一般来说,化学分析法比荧光分析法更为准确。 但是荧光分析以其不需要复杂的制样过程,分析时间短,可实现多种元素同时无损检测等特点得到越来越广泛地应用。
提高荧光分析法准确度的方法如下:
(1)溶剂:溶剂能影响荧光效率,改变荧光强度,因此,在测定时必须用同一溶剂。
(2)浓度:在较浓的溶液中,荧光强度并不随溶液浓度呈正比增长。因此,必须找出与荧光强度呈线性的浓度范围。
(3)酸度:荧光光谱和荧光效率常与溶液的酸度有关,因此,须通过条件试验,确定最适宜的pH值范围。
(4)温度:荧光强度一般随温度降低而提高,因此,有些荧光仪的液槽配有低温装置,使荧光强度增大,以提高测定的灵敏度。在高级的荧光仪中,液槽四周有冷凝水并附有恒温装置,以便使溶液的温度在测定过程中尽可能保持恒定。
(5)时间:有些荧光化合物需要一定时间才能形成;有些荧光物质在激发光较长时间照射下会发生光分解。因此,过早或过晚测定荧光强度均会带来误差。必须通过条件试验确定最适宜的测定时间,使荧光强度达到量大且稳定。为了避免光分解所引起的误差,应在荧光测定的短时间内才打开光闸其余时间均应关闭。
(6)共存干扰物质 有些干扰物质能与荧光分子作用使荧光强度显着下降,这种现象称为荧光的猝灭(quenching);有些共存物质能产生荧光或产生散射光,也会影响荧光的正确测量。故应设法除去干扰物,并使用纯度较高的溶剂和试剂。