化学发光免疫分析方法与应用进展

Ⅰ 简介免疫分析技术

免疫技术为20世纪90年代优先研究、开发和利用的农药残留分析技术，世界粮农组织(FAO)已向许多国家推荐此项技术。免疫分析法(immunoassay，IA)是将免疫反应与现代测试手段相结合而建立的超微量测定技术。免疫分析法是生物酶技术、荧光光谱技术、辐射技术、免疫分析技术应用于农药残留分析领域的一门新技术，是基于抗原和抗体之间的特异性识别和结合反应为基础的一种微量分析方法。免疫是机体识别和排除进人体内的抗原性异物的保护性应答反应。较大分子的农药可以直接作为抗原进入脊椎动物的体内产生免疫应答，从而得到可以和该农药分子特异性结合的抗体；小分子量的农药(相对分子质量<2500)一般不具备免疫原性，不能刺激动物产生免疫反应，但有与相应抗体在体外发生吸附反应的能力，即有反应原性，这类小分子物质在免疫学上称为半抗原。农药是半抗原，一般不具备抗原性，不能刺激动物产生免疫反应，需要首先将该小分子通过与一定碳链长度、大分子的载体蛋白质(通常使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白)以共价键偶联制备成人工抗原，使动物产生免疫反应，产生识别该农药并与之特异性结合的抗体。以共价键偶联成人工抗原使动物产生免疫反应从而产生识别该农药并与之相结合的抗体(多克隆抗体)，通过对半抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素等)，利用标记物的生物、物理、化学放大作用，对样品中的特定的农药残留进行定性或定量检测。通过对半抗原或抗体进行标记(放射性核素、酶、荧光素标记等)，利用标记物的生物或物理或化学放大作用来进行工作，它集测定的高灵敏性和抗体反应的强特异性于一体。它的开发过程需要投入较多资金和较长时间，但具有简单、快速、灵敏度高、特异性强、价廉、样品所需量少等优点。目前多用于单一农药残留检测，不适合应用于多残留检测。1971年Ercegovich[坞。]最先讨论了农药DDT、马拉硫磷及氨三唑(amino—triazole)的免疫测定。随后，大量研究免疫分析法在农药残留中的应用。Kun等报道了利用免疫分析测定对硫磷杀虫剂农药残留，最低检测限达到26ng／mL，相对标准偏差小于10
9／6。Laura等[坞0]报道利用化学发光免疫分析(cL—IA)测定农药残留。Anne等报道用非同位素免疫分析法(cMIA)测定氯麦隆杀虫剂，采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)作为检测器，极大提高灵敏度。农药残留的免疫学技术检测食品的范围很广，包括水果、蔬菜、饮料、啤酒、葡萄酒、乳、肉、动植物油、蜂蜜、豆类、谷物等。一些商品化的试剂盒也相继开发出来。国家农业部环保所李治祥和黄土忠于1990年研制了农药残毒速测箱，其原理就是有机磷和氨基甲酸酯类农药对动物和昆虫的致毒作用是通过特异性抑制胆碱酯酶(chE)来实现的。将chE与样品提取液反应，若chE受到抑制，表明样品提取液中含有OPS和氨基甲酸酯类农药，这时基质不能水解，就不能变色；否则ChE不受到抑制，基质水解产生蓝色。另外，国外还推出了多种酶标试剂盒应用于常规分析及田间检测的快速筛选，作为仪器分析的辅助方法发挥了一定的作用。免疫分析法作为农药残留快速筛选检测方法受到重视。 更多相关资讯/技术资料，请参考国家标准物质网www.rmhot.com.

Ⅱ 化学发光分析的应用

化学发光分析的灵敏度高，是痕量分析的重要手段之一，在环境监测、临床分析、生物化学等领域里，例如污染物测定、酶分析、免疫测定法和痕量金属分析等方面得到广泛的应用。例如，致癌物亚硝胺经热解后产生亚硝酰自由基NO·，后者与臭氧反应，产生激发态二氧化氮NO壗，最后成为二氧化氮而发光,可用于亚硝胺的检测,灵敏度达亚ppb级。鲁米诺在某些氧化剂存在下的发光反应，可用于测定这些氧化剂；苯巴比妥与过氧化氢的反应为某些过渡金属及其他一些物质所催化，可用来测定这些起催化作用的物质。又如，用化学发光分析可测定配庆腺嘌呤核苷圆卖嫌三磷酸酯(ATP),检出限为10～10摩尔；许多酶催化的过程以 ATP作为反橘手应物或产物，借测量ATP可测定酶的活性。

Ⅲ 化学发光免疫分析法有哪三类

1、直接化学发光，标记物为吖啶酯（雅培）或者ABEI（新产业）

2、酶促化学发光，标记物为碱性磷酸酶（厦门波生）或者辣根过氧化物酶（强生）

3、电化学发光，标记物为三联吡啶钌（罗氏）

注：括号内为代表厂家。

Ⅳ 化学发光免疫分析的书籍

本书主要分两大部分，第一部分1-9章介绍化学发光免疫分析的新方法和基础理论研究；第二部分10～18章侧重于化学发光免疫分析的应用，主要针对临床检测、环境分析以及食品安全三大应用领域。第19章简要介绍并宏分析过程的质量管理与控制。附录收集了常用的化学发光免疫试剂盒和相关用语的中英文对照。书中每个章节既有独立性又有相互参考性，尽最大可能地收集与每一章节有关的参考文献。
本书可供从事临床分析、食品检测、环境监测等科研人员和分析工作者参考，也可作为大专院校和科研院所相关专业师生的教学参考书。 第1章基本原理
1.1引言
1.2化学发光
1.2.1化学发光反应的基本原理
1.2.2化学发光反应体系
1.2.3化学发光的应用和最新进展
1.3免疫技术
1.3.1免疫的基本原理
1.3.2抗原抗体反应
1.3.3免疫测定的基本原理及其在临床检验中的应用
1.4化学发光免疫分戚蔽虚析技术
1.4.1化学发光免疫分析方法的建立
1.4.2化学发光免疫分析的主要类型
1.5化学发光标记技术
1.6化学发光免疫研究的新方法以及研究展望
参考文献
第2章电化学发光免疫分析
第3章流动注射化学发光免疫分析
第4章高效液相色谱化学发光免疫分析
第5章毛细管电泳化学发光免疫分析
第6章微流控芯片化学发光免疫分析
第7章纳米粒子及量子点标记化学发光免疯分析
第8章化学发光免疫分析仪
第9章化学发光免疫分析技术发展趁势
第10章化学发光免疫诊断试剂
第11章肿瘤标志物
第12章内分泌疾病
第13章激素与细胞因子
第14章血液和心血管疾病
第15章其他疾病
第16章治疗药物监测
第17章食品安全检测
第18章环境内分泌干扰物
第19章化学发光免疫分析的质量管理与控制
附录I常用化学发光免疫分析方法
附录II相关用语中高燃英文对照
……

Ⅳ 公卫医师实践技能考试辅导：化学发光免疫分析的类型

-
化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型：
（一）化学发光酶免疫测定

化学发光酶免疫测定（CLEIA）是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大，具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光裤兄增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶，发光底物为dioxetane磷酸酯，固相载体为磁性微粒。

（二）化学发光免疫测定

化学发光免疫测定（CLIA），是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物，在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。

用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件：

1.能参与化学发光反应。

2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。

3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。

4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性，特别是免疫活性。

鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。

（三）微粒子化学发光免疫分析

该免疫分析技术有两种方法：一是小分子抗原物质的测定采用竞争法；二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小，其直径仅1.0μm，这样大大增加了包被表面积，增加抗原或抗体的吸附量胡滚袭，使反应速度加快，也使清洗和分离更简便。其反应基本过程：（1）竞争反应：用过量包被磁颗粒的抗体，与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育，其免疫反应的结合形式有两种，一是标记抗原与抗体结合成复合物；二是测定抗原与抗体的结合形式。（2）双抗体夹心法：标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应备烂形式，即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。

Ⅵ clia是什么意思

clia是化学发光免疫分析。

化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起滚饥来的一项最新免疫测定技术。

Ⅶ 免疫分析方法有哪些

（1）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）。RIA技术是使用以放射性同位素（如125I、32P、3H等）作标记的抗原或抗体，用γ－射线探测仪或液体闪烁计数器测定γ－射线或β－射线的放射性强度，来测定抗体或抗原量的技术。它包括以标记抗原为特点的放射免疫分析和以标记抗体为特点的免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）。前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。

RIA在早期建立的农药免疫分析方法中占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2，4－D和2，4，5－T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫分析法。尽管该方法灵敏度非常敏锐（RIA通常为10-9g、10-12g，甚至10-15g），应用范围广，但进行RIA需使用昂贵的计数器，也存在放射线辐射和污染等问题，因此在农药残留检测领域的应用和发展受到了一定的限制，并逐步为其他免疫分析方法所取代。

（2）酶免疫分析法（enzymeimmunoassay，EIA）。EIA是继RIA之后发展起来的一项免疫分析技术。其检测原理与放射免疫法类似，但所用的标记物为酶，它将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用做标记物的酶有辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，AKP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GO）、脲酶（urease）等。酶标记反应的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多数采用96孔酶标板（MTP）作为固相支持物。这种板的检测容量大，样本数量多，只需有台简单的酶标仪就可得出准确的检测数据。也有学者采用磁珠作为固相材料进行EIA研究，其原理是将高分子材料（聚苯乙烯、聚氯乙烯等）包裹到金属小颗粒（Fe2O3，Fe3O4）外面，再通过化学方法键合上氨基（－NH2）、羧基（－COOH）、羟基（－OH）等活性基团，再与抗体或抗原耦联，制成免疫性微珠。该方法的优点是微珠比表面积大，吸附能力强，能悬浮在液相中快速均匀的捕获样品中的待测物，通过外加磁场后能够实现微珠与样品液的快速分离，从而减少检测时间、提高检测灵敏度。

由于酶标试剂制备容易、稳定、价廉，酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，故近年来EIA技术发展很快，已开发了多种EIA方法。其中酶联免疫法（，ELISA）是目前农药残留检测中应用最广泛的酶免疫分析技术。

（3）荧光免疫分析法（fluorescenceimmunoassay，FIA）。FIA检测的基本原理是将抗原抗体的高度特异性与荧光的敏感可测性有机地结合，以荧光物质作为示踪剂标记抗体、抗原或半抗原分子，制备高质量的特异性荧光试剂。当抗原抗体结合物中的荧光物质受到紫外光或蓝光照射时，能够吸收光能进入激发态。当其从激发态回复基态时，能以电磁辐射形式放射出所吸收的光能，产生荧光。绘制农药浓度－荧光强度曲线，可以定性、定量检测样品中的农药残留量。

适用于抗体、抗原或半抗原分子标记的荧光素须符合要求：①应具有能与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团，或易转变成这类反应形式而不破坏其荧光结构；②标记后，荧光素与抗体或抗原各自的化学结构和性质均不发生改变；③荧光效率高，与蛋白质结合的需要量很少；④荧光素与蛋白质结合的过程简单、快速，游离的荧光素及其降解产物容易除去；⑤结合物在一般储存条件下性能稳定，可保存使用较长时间。

（4）化学发光免疫分析法（luminescentimmunoassay，LCIA）。LCIA又可分为化学发光免疫测定（chemiluminescentimmunoassay，CLCIA）和生物发光免疫测定（bio-luminescentImmunoassay，BLCIA）。

1976年，Shroeder首先用生物素（B）－亲和素（A）系统建立了均相化学发光免疫测定技术，尔后Halman和Velan又将其引伸到非均相体系，现已渗入到生物学研究的各个领域。其原理是以发光指示抗原与抗体的结合，当发光标记物与相应的抗体或抗原结合后，底物与酶作用，或与发光剂产生氧化还原反应，或使荧光物质（例如红荧烯等）激发，释放光能。最后用光度计测定其发光强度，进行定量分析。常用发光标记物有辣根过氧化物酶（HRP）、鲁米诺（luminol）、异鲁米诺（isoluminol）、咯粉碱（lophine）、光泽精（lucigen）、双（2、4、6－三氯苯）草酸酯、联苯三酚和6[N-（4－二氨基丁基）－N－乙基]－氨基-2，3－二氢吩嗪-1，4－二酮（ABEI）等。用上述发光标记物标记的抗体（或抗原）在一定的pH缓冲溶液中与相应的抗原（或抗体）结合时，在协同因子（例如H2O2等）的作用下发光，其发光强度与被测物的浓度成正比，故可以用于定量分析。

发光免疫测定具有特异性强、灵敏度高（检测限量达10-15mol/L）、快速（1～3h）、发光材料易得等优点。但其发光过程和强度常受到发光物质本身的化学结构、介质的pH、协同发光物质和金属离子杂质等影响。

（5）金免疫层析分析法（goldimmuno-chromatographyassay，GICA）。GICA检测原理是将配体（抗体或抗原）以线状包被固化于硝酸纤维素膜等微孔薄膜上，胶体金标记另以配体或其他物质并以干态固定在吸水材料上，通过毛细作用，使样品溶液在层析条上泳动，当泳动至胶体金标记物处时，如样品中含有待检受体，则发生第一步高度特异性的免疫反应，形成的免疫复合物继续泳动至线状包被区时，发生第二步高度特异性的免疫反应，形成的免疫复合物被截留在包被的线状区，通过标记的胶体金而显红色条带（检测带），而游离的标记物则越过检测带，与结合的标记物自动分离。通过检测带上颜色的有无或色泽深浅来实现定性或定量测定2。

2金标试纸条检测

GICA法具有快速（5～20min）、廉价、结果明确、无需复杂操作技巧和特殊设备、携带方便等优点。但相对于其他免疫分析方法，该方法检测灵敏度稍低，主要适合现场快速定性或半定量测定。目前该方法已被应用于医学和生物学等众多研究领域，尤其在发达国家已经得到了广泛的应用。

（6）免疫分析与仪器分析技术的联用技术。使用单一的IA技术进行农药残留分析获得的信息量少，而理化分析方法的选择性又比较差。Kramer等人将免疫分析法和液相色谱法（LC）联合起来使用，从而简化了分析方法，提高了检测效率。LC-IA的联用，将LC的高分离能力和IA的高灵敏性和高特异性融为一体。该分析法尤其适合多组分残留分析和微量分析。免疫分析与气相色谱/质谱（GC/MS）的联用可减少结构相似的农药或代谢产物分析中的交叉反应，以降低假阳性。

Ⅷ 为什么要开展化学发光

一、 化学发光免疫分析简介
化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检念哗验方法中最为重要的技术之一。 化学发光 免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、 性激素、甲状腺功能 等方面的体外诊断实验中。
化学发光是一种特异的化学反应，有机分子吸收化学能后发生能级跃迁，产生一种高能级的电子激发态不稳定的中间体，当其返回到基态而发出光子，即为化学发光。将化学发光与抗原抗体相结合而形成的免疫分析技术，即为化学发光免疫分析。
化学发光的发光类型通常分为闪光型（flash type）和辉光型（glow type）两种。闪光型发光时间很短，只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型，发光时间从几分钟到几十分钟，或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量，必须配以全自动化的加样及测量仪。测量辉光型的样品可以使用通用型仪器，也可以配全自动化仪器。 泰格科信的化学发光免疫分析诊断试剂 发光类型 为 辉光型 。
化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳烂蠢定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者，是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛，已占各种免疫分析的首位 ，是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。

二、 化学发光免疫分析的 优势 ：
1、 灵敏度高
灵敏度高 是 化学发光免疫分析 关键的优越性，其灵敏度可达 10 -16 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L ）。 化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质，对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。

2、 宽的线性动力学范围
发光强度在 4 ～ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度（ OD 值）为 2.0 的范围相比，优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围，但放射性限制了其应用。
3、 光信号持续时间长
辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。
4、 分析方法简便快速
绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂 （ 或复合试剂）的一步模式。
5、 结果稳定、误差小
样品系直接自己发光，不需要任何光源照射，免除了各种可能因素（光源稳定性、光散射、光波选择器等）给分析带来的影响，使分析结果灵敏稳定可靠。
6、 安全性好及使用期长
免除了使用放射性物质。到目前为止，还未发现其危害性；试剂稳定，保存期可达一年仔历行。
三、市场前景

化学发光免疫分析法作为非放射性的免疫分析法，具有灵敏度 高、所需时间短、无污染、检测范围宽等特点，随着各种自动发光分析仪器面市，以及不同类型的化学发光免疫分析试剂盒的不断推出，使得检测项目更多，检测速度提高，这些势必推动化学发光免疫分析的迅速发展， 成为时间分辨、放射免疫和酶联免疫分析的取代者，将成为检验的主流。 使实验室更好、更快地为临床服务

Ⅸ 化学发光免疫分析为什么测试标本少了

临床检验过程中，经常需要检测与分析一系做斗列表征性物质，以此对疾病进行判断[1]。现阶段，化学发光免疫分析技术的应用范围呈现逐渐扩展的趋势，在临床检验中的作用也越来越重要；握胡肆在化学发光免疫分析技术还未出现之前，免疫技术主要包括：免疫酶技术、放射免疫技术以及免疫荧光技术，由于这三项技术具有的优点与缺点较为明显，所以在临床检验上的应用存在局限性；而化学发光免疫技术具有测试时间短、标本量少、污染少、获取结果迅速、操作简单等一系列优点，所以在临床检验中的应用范围逐渐拓宽[2]。 1化学发光免疫技术的工作原段轿理 1.1检测器的检测原理 化学反应的检测过程中，一些化学基团在处于被氧化状态之后，会形成一个激发态，在回归至基态的过程中，会发射出光子，实质上就是免疫反应与化学反应有机结合在一起之后形成的一种分析方法，即微量倍增技术。微量倍增技术在临床检验中的应用，主要是通过粒径比较小的颗粒磁粉增大复合物表面的面积

Ⅹ 化学发光免疫分析原理是什么

化学发光免疫分析原理是什么

化学发光免疫分析包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，同时发射出光子(hM)，利用发光讯号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体)直接标记在抗原(化学发光免疫分析)或抗体(免疫化学发光分析)上，或酶作用于发光底物。
化学发光免疫分析根据其所采用的标记物的不同可分为发光物标记、酶标记和元素标记化学发光免疫分析三大类。发光物标记的CLIA是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物(如吖啶酯)，在反应体系中发光物质在碱性介质中氧化祥枝时释放大量自由能，产生激发态的中问体，该激发态的中间体由最低振动能级回到稳定的基态，各个振动能级产生辐射时，同时产生能量，多余的能量即为发射光子，从而产生发光现象。利用发光讯号的测量仪器，分析接收的光量子产额，通过计算机系统转换成被测物质的浓度单位。在此系统中包含两个部分，化学发光反应系统和免疫反应系统，即在抗原一抗体特异性反应过程中，伴随有化学反应过程而产生光的发射现象。化学反应系统中以化学反应为基础，化学发光的首要条件是吸收了化学能而处于激发态的分子或原子必须能释放出光子或者能将能量转移到另一个物质的分子上并使这种分子激发，当这种分子回到基态时释放出光子。
化学发光与荧光的根本区别是形成激发态分子的激发能原理不同。荧光是发光物质吸收了激发光后使分子产生发射光；化学发光是化学反应过程中所产生的化学能使分子激发产生的发射光。因此，化学拆早发光反应过程必须产生足够的激发能是产生发光效应的重要条件。化旅宴雀学发光反应可在气相、液相或固相反应体系中发生，以液相发光在免疫学检测中最常应用。摘自 :sd1861./xianghealth399.htm引自 :sd1861./

化学发光免疫分析法的原理

化学发光免疫分析原理
:yhyg./articleview/2008-1-25/article_view_4863.htm
很详细的...你可以参考下

化学发光免疫分析报告

您好！很正常。

化学发光免疫分析单怎样看