邻甲苯胺方法的实验分析

‘壹’ 肾上腺素和胰岛素对血糖浓度的影响实验方案

胰岛素和肾上腺素 对家兔血糖浓度的影响 掌握血糖 (blood sugar) 的测定方法及 激素 (hormone) 对血糖浓度的影响。 了解血糖测定的临床意义。 实验目的与要求 机体的血糖水平受多种激素的调节而维持稳定 影响血糖的激素分为两类： 降低血糖的激素：胰岛素 (insulin) 升高血糖的激素：肾上腺素 (adrenaline) 、胰升糖素、 糖皮质激素和生长激素 血浆 (plasma) ：全血经抗凝处理后得到的液体成分， 含有凝血因子、纤维蛋白原等 血清 (serum) ：全血凝固后析出的液体， 不含纤维蛋白原 血 样 实 验 原 理 620 nm 测定待测血样的吸光度 (A) 与同样处理的葡萄糖标准溶液比较 ( 标准管法 ) 即可求得血样中葡萄糖的含量。 酸性、加热 -3 H 2 O 羟甲基糠醛 邻甲苯胺 醛亚胺（蓝色） 葡萄糖 (glucose) 邻甲苯胺法测定血糖浓度 2 、血样的采集 1 ）心脏内取让烂模血 5ml ，加入抗凝剂（草酸钠）【胰 -1 、肾 -1 】 2 ）皮下注射 胰岛素 0.5ml/kg （ 2U/kg ）， 1 小时后 1% 肾上腺素 0.4ml/kg ，半小时后 3 ）心脏内取血 5ml ，加入抗凝剂【胰 -2 、肾 -2 】 1 、动物的准备 家兔两只，禁食一晚。标记后，测量体重并记录坦缓。 实 验 步 骤 4 、邻甲苯胺法测定血历歼糖浓度 1 ）取大试管，按 Page78 表格添加试剂 2 ）混匀各管，沸水浴中加热 10min 后取出，流水冷却。 3 ）用空白管校正吸光度零点，读取各管 620nm 的吸光度。 3 、血浆的制备 血样采集后， 2000rpm 离心 5min ，取上清。 数据 空白 对照 注射激素前 注射激素后 胰岛素组 胰 -1 胰 -2 肾上腺组 肾 -1 肾 -2 G 胰 -1 ＞ G 胰 -2

‘贰’ 激素对血糖浓度的影响及血糖的测定实验报告

一，实验目的
掌握血糖的测定原理和方法；掌握血糖的正常范围及意义；熟悉调节血糖的激素对血糖浓度的影响。
二，实验原理
家兔动物实验。获取家兔注射激素前后的血液样本并对其；进行血糖测定。邻苯甲胺方法测定血糖浓度。
实验采取前后对照的方法，对家兔注射肾上腺素和胰岛素，并通过耳缘静脉采血，获取激素注射前后的血液样本，采用邻甲苯胺法处理样本，最终与标品比色得出结论。
1.调节血糖的激素有：胰岛素、肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质激素、生长素和甲状腺素等。胰岛素是体内唯一能使血糖降低的激素，其他激素均使血糖升高。
2.肾上腺素升高血糖的机制主要作用于肝细胞膜受体，通过cAMP-蛋白激酶系统激活肝磷酸化酶，同时抑制糖原合成酶，导致肝糖原分解加速。胰岛素降低血糖的机制是：降低肝细胞cAMP水平，从而抑制肝磷酸化酶，激活糖原合成酶，促进肝糖原的合成；胰岛素诱导糖酵解关键酶类的合成，阻遏糖异生关键酶的合成；胰岛素促进葡萄糖进入红细胞、肌肉等组织的异化扩散，促进糖的利用。
3.血液中的葡萄糖，在热的冰醋酸溶液中可脱水生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛（或称羟甲基糠醛）。后者在与邻甲苯胺缩合，生成蓝绿色的西夫式碱（Schiffbase）。其色泽的深浅与葡萄糖浓度成正比。与同样处理的标准葡萄糖溶液比色，即可求得待测血液中葡萄糖的含量。
三，实验材料
1.材料：家兔两只,刀片，草酸钠，小烧杯。
2.试剂：①肾上腺素(1mg／lml)②胰岛素(20单位／ml)③碘酒、消毒酒精④饱和硼酸溶液⑤邻甲苯胺-硼酸⑥5％ 三氯醋酸溶液⑦饱和苯甲酸溶液⑧标准葡萄糖贮存液⑨标准葡萄糖应用液
四，实验方法
1.取健康正常家兔一只，实验前饥饿14~16h左右，称体重。
2.耳缘静脉采血。小刀刮去耳缘的毛，用酒精棉球擦拭使其充血，再用干棉球擦干。 刀片划开耳缘静脉，使血液滴入成有足够草酸钠的小烧杯中，注意收集期间要不断地晃动烧杯防止血液凝固。采集完毕后干棉球压迫血管止血。
3.给家兔注射肾上腺素（0.5mg/只），半小时后同样方法采得血液。
4.缓缓放入洁净试管内，加5%三氯醋酸3.6ml，同时摇动使之充分混亩穗轿丛匀。3000rpm离心5min，制得无蛋白血滤液（上清液）。
5.取四支试管，分别加入2.5ml邻甲苯胺试剂。并向试管1加入1ml蒸馏水，试管2加入1ml标准葡萄糖应用液，试管3加入1ml注射激素前的血液的无蛋白滤液，试管4加入1ml注射激素后的血液的无蛋白滤液。
6.混匀后沸水加热8min，取出并用自来水冲洗试管使之冷却。而后置于722型分光光度计630nm比色，空白管校正零点。
7.表加试剂如下表：
ml
空白管
标准管
待测管甲（药前）
待测管乙（药后）
蒸馏水
1.0
―
－
－
标准葡萄糖应用液（1mg/ml）
－
1.0
－
－
无蛋白血滤液（药前）
－
－
1.0
－
无蛋白血滤液（药后）
－
－
－
1.0
邻甲苯胺试剂
2.5
2.5
2.5
2.5
同理，对家兔进行肾上腺素注射（剂量为5单位/公斤体重）并进行上述步骤，最终得出结果。
五，实验结果
据试验，在注射胰岛素实验中，家兔重量为2.95公斤，依照比例注射15单位的胰岛素。在注射肾上腺激素的实验中，家兔重量为2.90公斤，注射1mg的肾上腺激素。
血糖测定：（葡萄糖标准液浓度为5.50mmol/L）
空白管
标准管
注 射胰岛素前
注射 胰岛素后
注射肾上腺激素前
注射肾上腺激迅帆卜素后
血清/ml
-
-
0.02
0.02
0.02
0.02
葡萄糖标准液/ml
-
0.02
-
-
-
-
生理盐水/ml
0.02
-
-
-
-
-
酶酚混合液/ml
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
曝光值
0
0.135
0.363
0.116
0.315
0.508
由此得出：
注射胰岛素前血糖浓度为14.79mmol/L。
注射胰岛素后血糖浓度为4.73 mmol/L。
注射肾上腺激素前血糖浓度为12.83 mmol/L。
注射肾上腺激素后血糖浓度为20.70 mmol/L。
得出结论：注射胰岛素可有效的降低血糖。2．注射肾上腺素能使血糖上升。
六，讨论
实验中要注意如下问题：
1.采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安静。家兔不安静的情况下，肾上腺素分泌增多，血糖浓度升高，对实验结果有影响。
2.采血后要及时分离出血浆，避免溶血。溶血时红细胞内糖类扩散到血浆中，会对实验结果有影响。
3.采血量要准确，不能采得太少不够实验需要的血量，也不能采得太多伤及家兔。
4.由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利用，因此, 采血后及时进行检测，否则血糖浓度将逐渐降低。

‘叁’ 那些因素影响邻甲苯胺法测定血糖的显色反应如何减少这些因素对实验的影响

1.本法不需要除去蛋白质，邻甲苯胺试剂只与糖醛起反应，不与血中其他还原物质起反应。故闷基咐测定值较Folin-吴宪法为低。

2.显蚂纯色反应与水的含量有关，故应使标准管和测定管的含水量一致。

3.温度对显色反应有明显影响，煮沸时间和温度应锋汪准确控制。

4.显色后颜色不稳定，室温每放置1分钟，颜色降低0.15％。

5.邻甲苯胺试剂中冰醋酸浓度很高，使用不当容易损坏比色仪器。

6.邻甲苯胺是致癌剂，测定过程中应小心使用。

‘肆’ 实验室邻甲本胺的处理方法

为了实现邻甲苯胺及其同分异构体的完全分返郑离,先将邻甲苯胺及其同分漏裤颂异构体乙酰化,再采用气相色谱一质谱联用方法,通过改进色谱条件,使其取得了完全分离.试验结果表明,采用气一质联用方法可以实现邻甲苯胺及其同分异构体的完全纯蔽分离.

‘伍’ 邻甲苯胺的合成方法

1.由邻硝基甲苯还原而得。还原反应可利用铁粉作还原剂，也可在铜催化剂存在下于260-280℃运梁进行加氢反应制得邻甲苯胺。工业品邻甲苯胺的含量（总氨基物含量）在99%以上，加氢还原法每吨产品消耗邻硝基甲苯1300kg、氢气940m3。
2.其制备方法是由邻硝基甲苯经催化加氢还原制得。由于加氢催化剂的不同，反应条件各异，如用铜催化剂，反应温度260℃，也可用镍催化剂。
精制方法：按照制造方法不同，含有间甲苯胺、对甲苯胺、硝基甲苯等杂质。特别是对甲苯胺含量较多，并含有微量的水分。精制方法和苯胺类似，但用蒸馏的方法难以将其他的甲苯胺分离。因此首先将粗制邻甲苯胺蒸馏两次，再溶解于四倍体积的乙醚中，加入等当量的草酸乙醚溶液。将生成的对甲苯胺草酸绝高盐过滤除去，滤液蒸去乙醚后旁宏运滤出生成的邻甲苯胺草酸盐。用含有草酸的水重结晶5次，再用碳酸钠溶液处理。游离出的邻甲苯胺用氯化钙干燥后减压蒸馏三次可得纯品。
3.取邻硝基甲苯在稀酸介质中用铁粉还原，然后分离。上述所得邻甲苯胺粗品加酸溶解成盐，再加氢氧化钠沉淀，即得纯品。

‘陆’ 新生儿大便红细胞隐血怎么回事

新生儿最容易出现的问题就是肠胃问题，判断他们肠胃是否存在问题最直接有效的方法就是仔细观察他们的大便状况。如果新生儿的大便形态和气味出现异常，就要怀疑是肠胃问题。 新生儿大便红细胞隐血怎么回事 ？盯仿

大便潜血(又称便隐血)是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。

血红蛋白中的亚铁血红素，有类似过氧化物酶的作用，具有弱过氧化物酶活动，能催化过氧化物酶，放出新生态氧，将无色的受体氧化为显色的物质。

1、邻甲苯胺法

试剂：①150g/l邻甲苯胺—冰醋酸溶液：称取邻甲苯胺150g，加冰醋酸到1000ml。或用10g/l邻甲联苯胺溶液：称取邻甲联苯胺1g，溶于冰醋酸及无水乙醇各50ml的混合液中置棕色瓶中，保存于4℃冰箱中，可用8～12周，知姿若变为暗色，应重新配制。

②3%过氧化氢液。

2、匹拉米洞法

试剂：①50g/l匹拉米洞：称取匹拉米洞(氨基比林)5g，加95%乙醇至1000ml，摇至全部溶解。

②冰醋酸，

③3%过氧化氢液。

3、无色孔雀绿法

试剂：①10g/l无色孔雀绿：称取1g无色孔雀绿溶于100ml 95%乙醇中，摇至全部溶解，如呈绿色加少许锌粉，退色后过滤。滤液中加入少许锌粒，贮存于棕色瓶中。

②冰醋酸液

③3%过氧化氢液。

4、硫酸甲氨基酚法

试剂：①10g/l硫酸甲氨基酚乙酸溶液：称取硫酸甲氨基酚1g，溶于40ml蒸馏水中，加冰乙酸30ml溶解，蒸馏水加至100ml混匀 。放入棕色瓶中避光保存，如有变色则应重新配制。

②3% 过氧化氢溶液。

方法：取少许粪便涂于玻片中央，滴加10g/l硫酸甲氨基酚乙酸溶液3滴，及3% 过氧化氢溶液3滴混匀，立即观察结果。

阴性(-)：3分钟后不出现玫瑰红色或樱红色。(+)：30~60秒钟内显玫瑰红色或樱红色。强阳性(++)：立即显玫瑰红色或樱红色。

最强阳性(+++)：立即显深玫瑰红色或深樱红色。

轻微腹泻的孩子，常拉出象血一样的粪便，实际上这是食物或药物中的颜料染上的，每当产生怀疑时，可化验粪便，这样可以消除父母的疑虑。

当宝宝的腹泻是由感染引起的时，有时会出现一种短暂的但又引人注目的血性粪便。宝宝可能会发高烧，不仅便便里有血，偶尔还有脓、黏液和未消化的食物。这时候请及时带宝宝就医。通常情况下，当医生发现宝宝的这种情况时，会第一时间观察宝宝是否有脱水的症状，然后再做化验。

不仅要确定腹泻和出血的原因，测定血细胞数，还要做粪便的培养和涂片，以找出特殊感染的证据。某些腹泻可用抗生素来治疗，因此所有患这种疾病的病人都要由医生诊断和治疗，特别要注意急性均痢。

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