新型生物分析方法

‘壹’ 土壤微生物的新方法

用生物化学技术能快速地检测土壤酶活性，使土壤酶学研究在60年代后期至80年代比较热门，其中尿酶、磷酸酶、脱氢酶在土壤中的含量和变化规律研究较多。但土壤酶测定方法用于土壤微生物研究的一个致命弱点是不能直接的反映土壤实际微生物状况。Visser等对酶检测用于土壤微生物群落和土壤质量评价提出了怀疑。Skujins(1978)认为脱氢酶本身的生物化学特征决定了它不可能以胞外酶状态存在于土壤中。为了解决土壤酶测定中的评判问题，Beck（1984）提出了土壤微生物如微生物量（microbialbiomass）、还原酶（rectase）、水解酶（hydrolase）的适宜指标，然而，这些指标从来没有被广泛采用。Beck（1984）和Trasar-Cepedaetal.（1998）认为把酶用于土壤质量评价指标是值得怀疑的，而且缺乏常规可行的酶测定手段，存在药品昂贵等问题[7，8]。
Community-levelphysiologicalprofiling(CLPP)是由GarlandandMills（1991）提出的另一种酶分析方法，微生物群落降解95种不同单一碳源的能力可一次分析，其中BIOLOGGN微平板较多应用于研究土壤和环境微生物区系。作者采用BIOLOGGN微平板培养分析施用生态有机肥对土壤微生物多样性和番茄青枯病的影响，结果表明，连作地施用生态有机肥后，番茄青枯病显着降低，土壤微生物多样性显着提高。由于真菌、放线菌的代谢反应不能分解四氮叠茂，此方法只能检测微生物群落细菌（主要是革兰氏阴性菌）中快速生长的那部分微生物信息。不同的微生物对同一碳源的利用能力是有差异的，微生物对不同单一碳源的代谢指纹差异并不能简单地归纳为微生物群落数量和结构的差异，而且土壤微生物在BIOLOG系统中生长时，由于温育环境的改变引起微生物对野轮搜碳底物实际利用能力的改变，同时在温育过程中存在适应性问题如代谢补偿、代谢适应等。但CLPP方法因快速、简便而受到人们的欢迎，因而有专用于土壤和环境微生物生态研究的生态微平板（EcoPlates）（Insam，1997）。土壤酶测定方法至今没有一个标准的参数和测颂历定标准，不能对土壤微生物生态功能一个准确的答案，若要充分分析土壤特征，了解不同土壤之间的差异，一定要与其他的方法相配合。 土壤微生物是土壤生态系统桐漏中库（pool）和流的一个巨大的原动力。土壤酶测定一般要在适宜的条件下测定，不能作为土壤物流的原位评价。库和流的计算对土壤微生物学家来说很重要，测定土壤微生物呼吸（CO2的释放量），是较好的微生物群落总代谢活性指标。
N、NO3输入引起土壤酸化，甚至引起地下水的N污染。氮的分配（N2O、NO等）对气候变化和臭氧层破坏有极大影响，生物固氮对缓解矛盾有重要的意义，同时也提高农作物产量和减少人类饥饿。从1970年以来，共生和非共生固氮研究很热烈。土壤微生物学家应用分子生物学技术在转基因作物和转基因工程菌方面研究，大大提高了生物固氮效果。许多传统方法，如N矿化测定，硝化潜力或用于反硝化测定的乙炔抑制方法仍然广泛使用。应用15N放射性标记方法可详细地了解土壤中或土壤微生物群落中的N分配和去向。
土壤具有复杂的空间异质性，大多数养分流测定方法不适于田间测定，局限于实验室模拟，目前有较好的地理信息系统软件来统计和分析这些数据。Bruckner等（1999）测定土壤理化和生物指标，研究了温带松果类森林土壤的的空间差异，发现土壤中某些养分转化过程需要在一定的生态点进行，如仅在一定团粒粒级范围内进行。Rasiah等（1999）研究发现不同农业措施会引起土壤紧实度、质地和有机质特性变化。Stenberg等（1998）研究26种不同性质土壤的微生物状况，也证明土壤有巨大的异质性。

‘贰’ 微生物分析法特点是什么

微生物分析法特点
1.准确度高 近50年来，微生物法被广泛地纳入各类标准方法中，如AOAC，AACC，GB以及其他国家的标准方法。以AOAC为例，每种微生物方法的建立，都需要经过全球20家以上的实验室进行方法验证，因此微生物法准确性是被广泛公认的。
2.先期投入少，见效快 该方法的先期投入少，当实验室具备超净台、培养箱、分光光度计、医用灭菌器和一些实验室常用玻璃器皿即可开展微生物法，不需要大量额外的人力和物力，适于在任何水平的实验室快速建立。
3.微生物法的测定结果反映了样品中具有生物活性的被测物含量。 由于微生物法是通过观察微生物的生长繁殖速度来间接测定维生素的含量，并且微生物本身就是一种生物体，所以采用微生物法测定出的维生素均是能够被生物体所利用的。例如，在测定螺旋藻中的维生素B12时，微生物法的测定结果远小于其它方法的测定结果，Herbert 等人的研究证明，虽然螺旋藻含有丰富的维生素B12，但不具有生物活性，在人体内不能发挥其应有的生理作用。 可见，微生物法的测定结果反映了具有生物活性的维生素含量。
通常来说，当实验室目前尚没有准确可靠的其他方法，如维生素B12、叶酸、生物素、泛酸等；或者为了大量降低分析实验的费用；或者为了快速建立分析方法，获得数据；或者为了最大限度的利用实验室有限的空间。

存在问题
虽然微生物具有以上优势，但它仍旧逐渐被其他方法所取代，这是由于它固有的一些致命的缺点，主要包括以下几点：
1.分析周期长 一般在4-6天，而其它方法（HPLC法）一般在1-2天内即可完成。
2.实验步骤烦琐 通常来说，微生物法要包括样品前处理、菌种液的制备、测试管的制备、接种、测定、计算等步骤，与仪器分析方法相比，步骤繁多。
以上两点与目前分析方法简便、快速、高效的发展方向不符，这也正是微生物逐渐被其他方法替代的主要原因。

‘叁’ 微生物群落有哪些分析方法吖

微生物分离、纯培养，核酸序列分析，PCR，基因克隆文库分析法，荧光原位杂交法等等

‘肆’ 目前的生物样品分析方法主要有哪些及运用范围

在分离分析特别是蛋白质分离分析中，层析是相当重要、且相当常见的一种技术，其原理较为复杂，对人员的要求相对较高，这里只能做一个相对简单的介绍。 一、 吸附层析 1、 吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。 2、 薄层层析 薄层层析是以涂布于玻板或涤纶片等载体上的基质为固定相，以液体为流动相的一种层析方法。这种层析方法是把吸附剂等物质涂布于载体上形成薄层，然后按纸层析操作进行展层。 3、 聚酰胺薄膜层析 聚酰胺对极性物质的吸附作用是由于它能和被分离物之间形成氢键。这种氢键的强弱就决定了被分离物与聚酰胺薄膜之间吸附能力的大小。层析时，展层剂与被分离物在聚酰胺膜表面竞争形成氢键。因此选择适当的展层剂使分离在聚酰胺膜表面发生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的连续过程，就能导致分离物质达到分离目的。 二、 离子交换层析 离子交换层析是在以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行，或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。` 三、 凝胶过滤 凝胶过滤又叫分子筛层析，其原因是凝胶具有网状结构，小分子物质能进入其内部，而大分子物质却被排除在外部。当一混合溶液通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质就按不同分子量筛分开了。

‘伍’ 生物样品分析方法一般从那几个方面进行考察

那要看是哪一类的生物样品，主要风险控制在于的方向。

一般要根据样品的种类，所要测定的成份，来确定使用什么药品什么测定方法。

对于植物主要是重金属和农残，铅砷铬镉铜和DDt，666等。

对于动物主要是抗生素、寄生虫药等兽药残留和激素等。

一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。

有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。

(5)新型生物分析方法扩展阅读：

在生物样品的测定中，根据测定项目的不同，首先要经过消解 （或灰化），或提取和分离等处理工作，然后才能进行待检组分含量的测定。处理生物样品的方法有消解法 （又称湿法氧化或消化法，主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-过氧化氢消解法）、灰化法 （又称燃烧法或高温分解法）、提取法（包括振荡提取、组织捣碎、索氏提取器提取）、分离法和浓缩法。

动物一般多用耳缘静脉取血，先去毛，要去净毛，不伤皮肤，用体积分数为75%的酒精擦动物耳朵，例如兔耳朵，用灯泡照射加热使其血管充血，用大头针刺破静脉放血 (先从远心端刺)，将血液放人抗凝杯中，边收集边摇匀，以防凝固。

‘陆’ 生物活性物质常用的分析方法有哪些

生物活性物质，是指来自生物体内的对生命现象具体做法有影响的微量或少量物质。
这种物质的检测只能依靠医学检验相关的分析方法。

‘柒’ 在现代微生物分类中应用了哪些新技术和新方法

经典分类、鉴定指标主要包括形则盯渗态学指标，生理、生化反应指标，生态特性指标等。
在现代微生物分类中应用了一下几种新方法、新技术（有些是方法，有些是思路或技术）：
1、通过核酸分析鉴定微生物的遗传型；
（1）、DNA碱基比孙脊例的测定。即：（G+C）mol%值。
（2）、核酸分子杂交法。
（3）、rRNA寡核苷酸编目分析。
（4）、对微生物全基因组序列进行测定。
2、细胞化学成分用作鉴定指标；
（1）、分析细胞壁的化学成分；
（2）、分析全细胞水解液的糖型；
（3）、分析磷酸类脂成分；
（4）、分析则耐枝菌酸；
（5）、分析醌类；
（6）、用气相色谱分析
3、数值分类法（又称统计分类法）。

每一方法或技术更详细的阐明可以在专业网站或书籍上查询。

‘捌’ 目前常用生物信息学分析方法有哪些

现在比较热门的数据库包括GEO、TCGA
GEO分析主要是芯片做差异分析，得到差异基因，差异基因可以做GO、KEGG功能富集分析
TCGA数据库是癌症分析的利器，可以做差异基因，差异miRNA，差异lncRNA，下载和整理临床数据，做生存分析，高难度的COX分析
这两个数据库可以发到不错的文章