布鲁氏菌病研究方法

1. 布氏杆菌凝集试验的介绍

待测血清中抗布氏杆菌抗体与胶乳试剂相遇，发生抗原-抗体反应，出现肉眼可见的凝集反应。

2. 什么是布鲁氏菌在什么情况下就会被感染

布鲁氏杆菌，是一种革兰氏阴性的不运动细菌。这种细菌嗜氧，一般橘铅答无荚膜，而光滑型的布鲁氏杆菌则有微荚膜，呈氧化酶阳激册性，在光学显微镜下多呈微小的球状，球杆状等。大多数在细胞内寄生，可以在很多种家畜体内存活。

简单介绍完了布鲁氏杆菌，那么我们接下来说说它带来的疾病。布鲁氏杆菌可以引起布鲁氏杆菌病，一般将其简称为布病，人和家畜都可以感染到的慢圆慧性传染性疾病，造成的危害很大，而感染此病的多为牛、羊、猪三种常见的家养牲畜。其中在羊身上的细菌，对人的传播性最强，危害最严重。

预防此病要普及预防知识，从根源处避免此病发生，少吃生冷食物，将食物加热，等到熟透了再吃，更要学会挑选合格的商品进行购买。对于家畜要定期检疫，及时发现病菌并消灭，隔离。

3. 怎样防治猪的布鲁氏菌病

猪的布鲁氏菌病是猪感染布鲁氏菌以后发生的一种慢性传染病。主要症状是流产、死产、胎衣滞留以及关节炎等。公猪感染可发生睾丸炎和不育症等。
公母猪都能发病，尤其8～10月龄的猪最易感染，6～7月龄猪次之，5月龄内的猪不感染。
布鲁氏菌广泛存在于病猪流产胎儿、胎衣、乳腺和淋巴结中。常随胎儿、胎衣、尿、乳汁等排出体外，污染棚圈、猪舍及饲养用具，以致广泛传播。
健康猪常由于吃到被病猪粪、尿、流产胎儿、羊水、胎衣等污染过的饲料和饮水而得病。交配是传染的另一途径，种公猪和患布鲁氏菌病的母猪交配时能被传染发病，患病的公猪再和其他健康母猪交配时就会扩大传染。
一般认为公猪和母猪姿漏的发病率高，怀孕母猪，尤其第一胎母猪发病率更高，但阉割后的公、母猪则感染率低。另一方面饲料量不足，营养不全，膘情不好，抗病力低，都容易感染。猪场缺乏严格的卫生防疫制度，病猪的污染物处理不当，病猪隔离不严，都能给疫病传播创造条件。
发病后的症状是母猪多在怀孕后两三个月发生流产，产下死胎多，产后少发生胎衣停滞不下。并发症有下痢，精神不振，食欲减退，乳房水肿，有少数病猪和亩发生阴道炎和子宫炎，以致不能怀孕。有的病猪转入隐性，经交配受孕，第二胎常可正常产仔，极少见到重复流产。
公猪常发生睾丸炎，两侧或单侧睾丸明显肿大、疼痛。如睾丸由于慢性炎症作用常因此萎缩，病猪性欲减退或丧失，失去配种能力。
猪的布鲁氏菌病还表现在关节发炎。因此，显现跛行，据调查，约有41%的病猪后肢关节肿大，疼痛，运动不灵活。
本病防制工作很重要，应从以下几方面入手：
（1）优良品种的种猪场，病猪必须保留时，可在严格隔离下，用金霉素或土霉素治疗。病猪最好不做种用。
（2）在预防上应首先严防本病侵入健康猪群。注意检疫工作，检疫后认为血清凝集价正常，隔离30天再第二次检疫，认为健康时方可合群并迹棚烂圈。
（3）如因不慎引进病猪，应在尚未大量传播开前采取果断措施，病猪和可疑病猪均应隔离淘汰。
（4）本病流行的地区也可用猪种2号弱毒冻干苗进行预防，每次200亿活菌饮服，饮服2次，间隔30～45天。

4. 布鲁氏菌病简介

目录

• 1 拼音
• 2 概述
• 3 病原学

1 拼音

bù lǔ shì jun1 bìng

2 概述

布鲁氏菌病（brucellosis）又称地中海弛张热，马尔他热，波浪热或波状热，是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病，其临床特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大等。

1814年Bur首先描述“地中海弛张热”，并与疟疾作了鉴别。1860年Marston对本病作了系统描述，且把伤寒与地中海弛张热区别开。1886年英国军医Bruce在马尔他岛从死于“马尔他热”的士兵脾脏中分离出“布鲁氏菌”，首次明确了该病的病原体。1897年Hughes根据缓此顷本病的热型特征，建议称“波浪热”。后来，为纪念Bruce，学者们建议将该病取名为“布鲁氏菌病”。1897年Wright与其同事发现病人血清与布鲁氏菌的培养物可发生凝集反应，称为Wright凝集反应，从而建立了迄今仍用的血清学诊断方法。我国古代医籍中对本病虽有描述，但直到1905年Boone于重庆对本病作正式报道。

3 病原学

布鲁氏菌为革兰氏阴性短小杆菌，初次分离时多呈球状，球杆状和卵圆形，故有人建议称“布鲁氏菌”。该菌传代培养后渐呈短小杆状，菌体无鞭毛，不形成芽胞，毒力菌株可有菲薄的荚膜。1985年WHO布鲁氏菌病专家季员会把布鲁氏菌属分为6个种19个生物型，即羊种（生物型1～3），牛种（生物型1～7.9）。猪种（生物型1～5）及绵羊型副睾种，沙林鼠种，犬种（各1个生物型）。我国已分离到15个生物型，即羊种（1～3型），牛种（1～7.9型），猪种（1.3型），绵羊副睾种和犬种各1个型。临床上以羊、牛、猪三种意义最大，羊种致病力最强。多种生物型的产生可能与病原菌为适应不同宿主而发生遗传变异有关。

本菌生长对营养要求较高，目前实验室研究多用牛、羊新鲜胎盘加10%兔血清制作培养基，其效果较好。但即使在良好培养条件下生长仍较缓慢，在不良环境，如坑生素的影响下，本菌易发生变异。当细菌壁的脂多糖（LPS）受损时细菌落即由S型变为R型。当胞壁的肽聚糖受损时，则细菌失去胞壁或形成胞壁不完整的L型布鲁氏菌。这种表型变异形成的细菌可在机体内长期存在，伺环境条件改善后再恢复原扰陆有特性。

本菌有A、M和G三种抗原成份，G为共同抗原，一般牛种菌以A抗原为主。A与M之比为扒咐20：1；羊种菌以M为主，M比A为20：1；猪种菌A：M为2：1。制备单价A、M抗原可用其鉴定菌种。布鲁氏菌的抗原与伤寒、副伤寒、沙门菌、霍乱弧菌、变形杆菌OX19等的抗原有某些共同成份。本菌致病力与各型菌新陈代谢过程中的酶系统，如透明质酸酶、尿素酶、过氧化氢酶、琥珀酸脱氢酶及细胞色素氧化酶等有关。细菌死亡或裂解后释放内毒素是致病的重要物质。

布鲁氏菌在自然环境中生活力较强，在病畜的分泌物，排泻物及死畜的脏器中能生存4个月左右，在食品中约生存2个月。加热60℃或日光下曝晒10～20分钟可杀死此菌，对常用化学消毒剂较敏感。

5. 犬布鲁氏菌病有哪些特征如何防治

布氏杆菌病是一种接触性传染的细菌性人畜共患传染病，犬多数呈隐性感染，少数出现临床症状;其特征主要是引起生殖系统障碍，生殖器发炎、流产等;下面我们一起来看看你犬布氏杆菌病的症状、诊断、治疗及预防方法：

犬布氏杆菌病是一种革兰氐染色阴性的球杆菌;布氏杆菌属有7个种，其中感染犬的主要是流产布氐杆菌(牛型)、马耳他布氏杆菌(羊型)、猪布氏杆菌(猪型)和犬布氏杆菌;各种布氏杆菌在形态上没有区别，只是在致病力方面有所不同;布氐杆菌在普通培养基上可以生长，但以肝汤培养基和马铃薯培养基上生长最茂盛;本菌对自然环境的抵抗力较强，在污染的土壤和水中可存活20~120天;在胎儿体内可存活6个月，在衣服、皮毛上能存活150天;阳光直射可存活4小时;在70℃加热5分祌，即可被杀死，煮沸立即死亡;用2%石炭羡虚酸、来苏尔、0、1%的福尔马林和5%的新鲜石灰水数分钟就可杀灭本菌;

该病传染源主要是病犬和带菌犬;最危险的传染源是受感染的妊娠母犬，在其流产和分娩时随胎儿、胎衣排出大量病菌，流产后的阴道兄樱燃分泌物和乳汁也含有病菌;感染公犬精液中含有病菌,可通过交配传染给母犬;传播途径主要是消化道和黏膜，多因摄取被病菌污染的饲料和饮水而感染;另外通过有损伤的皮肤和结膜也能感染;犬感染布氏杆菌病后，病菌主要在淋巴结、脾脏、子宫、胎盘以及前列腺的巨噬细胞内增殖，可引起公犬及母犬的不孕(育)或流产;

犬布氏杆菌病的症状

大多为隐性感染，少数表现发热性全身症状;临床检査偶尔可见发热、嗜睡、淋巴结病变及体重下降;性成熟犬多表现繁殖障碍;母犬妊娠后3月时发生流产，流产后阴道内流出褐色或绿灰色的分泌物，持续时间1~6周不等、或不孕或发生早期胎儿自溶，或弱胎;公犬常发生睾丸炎、前列腺炎、睾丸萎缩，导致不育;

犬布氏杆菌病的诊断

单从临床症状做出诊断较难;确诊需要血液，精液或组织(胎儿、胎盘、脾、淋巴结、前列腺等)进行细菌培养及鉴定;常用的有快速平板凝集试验、试管凝集试验及琼脂凝胶扩散反应;建议进行综合分析，最后确诊;

犬布氏杆菌病的防治

1、狗狗的血清如呈现阳性反应，应马上采取隔离;

2、加强检疫，发现病犬即行隔离或扑杀;目前尚未研究出有效的菌苗;被污染的犬舍、产房要用10%石灰乳或5%热火碱彻底消毒，流产胎儿、胎衣、羊水及阴道分泌物要妥善消毒或深埋;为犬接生或处理时应带上手术手套;

3、布氏杆菌对卡那霉素、庆大霉素、链霉素及氯霉素等均敏感，对病犬可在隔离条件下进行治疗;配合应用维生素C、维生素K，效果更好;

4、不要接触患有布氏杆菌病的动物以及人，实验室应合理地处理患病动物，照顾患病的动物的人要穿防护衣，洗手消毒;空颂扰气飞沫传染也会使本病在实验设施中大规模的发生;

6. 布鲁氏菌的具体研究

布鲁氏菌部分外膜蛋白基因的克隆、表达及免疫原性研究
中文摘要:布鲁氏菌是革兰氏阴性的兼性细胞内寄生菌，可以引发世界范围内人和牲畜及野生哺乳动物的感染，也是生物武器研究的热点。布鲁氏菌引发的传染性疾病和巨大的经济损失已经引起全世界的关注。 常用布鲁氏菌疫苗功能基因序列分析及AMOS检测方法研究
中文摘要：试验内容,AMOS-PCR是一种能够鉴别诊断布鲁氏菌病原的一种PCR方法,本试验中对其分型鉴定进行了研究。对我国常用疫苗S2、M5、S19、104M使用该方法，并做单一基因的AMOS-P.... 布鲁氏菌荧光定量PCR快速检测方法的建立及检测试剂盒的组装
中文摘要: 本研究以布鲁氏菌(Brucella)基因组编码31kDa核周质蛋白的BCSP31基因设计了布鲁氏菌属荧光定量PCR特异性引物和Taqman荧光探针，优化了荧光定量PCR反应体系和条件。
布鲁氏菌BLS-L7/L12重组亚单位疫苗的初步研究
中文摘要：布鲁氏菌病(Brucellosis)(简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella．spp)引起的人、畜共患传染病。世界上有170多个国家和地区有人、畜布病存在和流行。在我国布病已波及28个....
布鲁氏菌种特异性抗原抗体免疫胶体金试纸条的研制及初步应用
中文摘要: 将牛布鲁氏菌杂交瘤细胞株4B8、1C9、1G9、1E2和羊布鲁氏菌杂交瘤细胞株3C6、2D10、1E10扩大培养,制备单克隆抗体。纯化后抗体非特异带消失,抗体效价为1×106万....
布鲁氏菌种特异性单克隆抗体的研制和抗原捕捉ELISA方法的建立
中文摘要: 本研究选用两株光滑型布鲁氏菌B.abortus 544A和B.melitensis 16M,采用热酚法和酚-甲醇法提取纯化了二者的LPS和O链抗原，选择SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖....
布鲁氏菌新型疫苗的构建及其免疫原性研究
中文摘要: 布鲁氏菌病（Brucellosis）是由细胞内寄生的革兰氏阴性小杆菌布鲁氏菌引起的一种人畜共患病。它以发热，流产为主要症状，严重威胁着人畜健康。全世界每年出现500,000例人布鲁氏菌病....
白城地区布鲁氏菌病的流行病学调查及病原学研究
中文摘要：布鲁氏菌病(Brucellosis)是一种人畜共患疾病,流行于世界160多个国家。“近年来在我国畜牧业发展地区”，布鲁氏菌病在人、畜间疫情愈演愈烈，范围逐渐扩大，呈暴发和流行态势，仅2006....
树突状细胞在布鲁氏菌疫苗诱导免疫应答中的作用研究
中文摘要:：布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种耸薰不即静主要经消化道、呼吸道和泌尿生殖黏膜以及皮肤伤口感染,引起母畜流产和人的“波浪热”等疾病。
大量研究证明：巨噬细胞是布鲁氏菌的易感细胞。
奶牛布鲁氏菌的PCR检测与分子分型研究
中文摘要: 为了调查奶牛布鲁氏菌病的流行和发病情况,本研究利用虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)对浙江省奶牛养殖较为集中的金华地区30个奶牛场28243头奶牛进行布鲁氏菌病原普查,结....
布鲁氏菌外膜蛋白Omp39和Omp14的原核表达及其免疫原性鉴定
中文摘要：布鲁氏菌病(Brucellosis)是由细胞内寄生的革兰氏阴性布鲁氏菌引起的一种人畜共患病。临床上以发热,流产为主要症状,严重威胁着人畜健康。据世界卫生组织统计表明,全世界每年出现50万....
牛、羊布鲁氏菌单克隆抗体乳胶凝集试验检测方法的建立及初步应用
中文摘要: 参考已报导LPS和O-侧链的提取方法，热酚法、冷酚法。对牛布鲁氏菌(B.abortus 544A)、羊布鲁氏菌(B.melitensis 16M)的LPS和O-侧链进行了提取纯化鉴定。
羊布鲁氏菌是革兰氏阴性需氧杆菌。分类上属于布鲁氏菌属,为非抗酸性,无芽孢,无荚膜,无鞭毛呈球杆状。组织涂片或渗出液中常集结成团,且可见于细胞内，培养物中多单个排列。布鲁氏菌在皮肤里能生存45～60天,土壤中存活40天，乳中存活数周。
对热抵抗力弱，一般消毒药能很快将其杀死。 布鲁氏菌分子标记、毒力缺失疫苗株△YZ-2的研究
中文摘要: 当前布鲁氏菌疫苗种类繁多,但各有缺陷。比如不能区分人与动物是人工免疫接种还是野生菌感染,并且病毒强,返祖现象严重,甚至使接种的人与动物发病,而不能广泛应用,致使当前布鲁氏菌病趋年上升。 ....
布鲁氏菌的脂肪酸分型研究
中文摘要: 目的获得布鲁氏菌脂肪酸成分的数据资料,探索脂肪酸分型方法对布鲁氏菌进行分型的可能性。 方法选择布鲁氏菌的19个标准株、7个疫苗株、64个野毒株,经化学方法提取菌体脂肪酸后，用气相....

7. 影响布病虎红平板凝集实验因素有哪些

由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻而且时间长，所以布鲁氏菌病的诊断以血清学诊断为主。其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应，用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。
虎红平板凝集试验（RBPT）灵敏度高，价格便宜，操作方便，检测快速，适于群体布鲁氏菌病的普查。在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。
检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体用虎红染料染色后，悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。

试验原理：虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性（PH3.6-3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反应的特异性。
虎红平板凝集试验具体方法如下：
一、材料准备
1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。
2、被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。
3、洁净的玻片或玻璃板，其上划分成4cm2的方旅族昌格。
4、吸管或移液器，适于滴加0.03mL液体。
5、牙签、混合棒或火柴杆，供搅拌用。
二、操作方法
1、实验前，应将血清和抗原在室温放置30-60min。
2、将玻璃板上各格标记被检血清号，然后加相应被检血清0.03mL。
3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原0.03mL。
4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在5分钟内观察结果。
5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。
三、结果判定
1、在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。
2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。

四、方法评价
1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病，方法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检疫；
2、该方法敏感性较好，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。
3、因为在酸性环境下IgM活性受抑，该法主要是检查IgG类凝集抗体，所以特异性较好，与补体结合试验、二巯基乙醇（2-ME）试验和抗球蛋白试验有穗高较高的吻合率。
4、该法受制备抗原时条件影响较大，所以每批制备拆扒抗原应予以检查、标化方可应用。

8. 母畜传染性流产的布鲁氏菌病

布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、细胞内寄生菌，能引起人禅顷和多种动物的急性和慢急性感染，被感染的人和动物表现为流产及不孕不育等症状。 布鲁氏菌细胞膜销闹是一个三层膜的结构，最内层的膜称为细胞质膜、外层膜称为外周胞质膜，最外层膜称为外膜。外膜与聚肽糖（peptidoglycan，PG）层紧密结合组成细胞壁，外膜含有脂多糖（lipolpolysaccharide，LPS）、蛋白质和磷脂层。 布鲁氏菌种特异性抗原抗体免疫胶体金试纸条的研制及初步应用 中文摘要: 将牛布鲁氏菌杂交瘤细胞株4B8、1C9、1G9、1E2和羊布鲁氏菌杂交瘤细胞株3C6、2D10、1E10扩大培养,制备单克隆抗体。纯化后抗体非特异带消失,抗体效价为1×106万.... 布鲁氏菌种特异性单克隆抗体的研制和抗原捕捉ELISA方法的建立 中文摘要: 本研究选用两株光滑型布鲁氏菌B.abortus 544A和B.melitensis 16M,采用热酚法和酚-甲醇法提取纯化了二者的LPS和O链抗原,选择SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖.... 布鲁氏菌新型疫苗的构建及其免疫原性研究 中文摘要: 布鲁氏菌病（Brucellosis）是由细胞内寄生的革兰氏阴性小杆菌布鲁氏菌引起的一种人畜共患病。它以发热，流产为主要症状，严重威胁着人畜健康。全世界每年出现500,000例人布鲁氏菌病.... 白城地区布鲁氏亏袭罩菌病的流行病学调查及病原学研究 中文摘要: 布鲁氏菌病(Brucellosis)是一种人畜共患疾病,流行于世界160多个国家。近年来在我国畜牧业发展地区,布鲁氏菌病在人、畜间疫情愈演愈烈,范围逐渐扩大,呈暴发和流行态势,仅2006.... 树突状细胞在布鲁氏菌疫苗诱导免疫应答中的作用研究 中文摘要: 布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人兽共患传染病,主要经消化道、呼吸道和泌尿生殖黏膜以及皮肤伤口感染,引起母畜流产和人的“波浪热”等疾病。大量研究证明,巨噬细胞是布鲁氏菌的易感细胞。