❶ bca法测蛋白浓度为什么稀释蛋白质浓度
BCA法测定蛋白质浓度原理:
BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即 BCA 工作试剂。在碱性条件下,BCA 与蛋白质结合时,蛋白质将 Cu2+ 还原为 Cu+,工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm 下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
BCA 蛋白浓度测定试剂盒,Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单,快捷,兼容去污剂的方法,准确定量总蛋白。
成分:
试剂 A,100 mL
试剂 B,2 mL
标准蛋白(BSA)1 mL×2,1 mg/mL
保存条件运输温度:室温(标准蛋白 4~8 ℃ 运输)
保存温度:室温(标准蛋白 -20 ℃ 保存)
有效日期:12 个月
使用方法:
方法一:96 孔板
1.配制 BCA 工作液:根据标准品和样品数量,按 50 体积试剂 A,1 体积试剂 B 配制适量 BCA 工作液。充分混匀。
2.将蛋白标准品按 0 μL,1 μL,2 μL,4 μL,6 μL,8 μL,10 μL 加入 96 孔板的蛋白标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到 10 μL。取 10 μL 待测样品加入 96 孔板的待测样品孔中。每个测定要做 2~3 个平行。
3.向待测样品孔和蛋白标准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即样品与工作液的体积比为 1:20),混匀。
4.37 ℃ 温浴 30 min。冷却至室温。
5.酶标仪 562 nm 波长下测定吸光度。
6.制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。
❷ BCA protein assay试剂盒是检测蛋白浓度的原理是什么
这个原理也是引用别人的。http://..com/question/4033944.html。
BCA实际盒我用过,确实比考马斯亮蓝试剂要灵敏多了。操作也很简便
原理简介
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知,二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子(biuret reaction),一价铜离子和独特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
产品特点
1.步骤简单,45分钟内完成测定,比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl 。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。