信号传导的研究方法与工具

Ⅰ 信号传导的信号转导的基本步骤

信号转导通常包括以下步骤：特定的细胞释放信息物质→信息物质经扩散或血循环到达靶细胞→与靶细胞的受体特异性结合→受体对信号进行转换并启动细胞内信使系统→靶细胞产生生物学效应。通过这一系列的过程，生物体对外界刺激作出反应。

Ⅱ 人类传递信息的手段和工具的发展

论人类传播史上的五次革命
邵培仁
杭州大学新闻与传播学院

内容提要：在人类传播史上经历了五次革命——语言传播、书写传播、印刷传播、电子传播、互动传播（ 以电脑为主体、以多媒体为辅助的多种功能的信息传播）。每一次传播革命都对社会进步具有重大的推动作用 ，将人类带进一个新的境界，新的时代。每个国家或地区传播上的优势地位必然会导致竞争中的优势地位。它 警示我们，必须积极参与传播革命，十分重视传播科技的开发、引进和运用，否则，国家付出的代价将是极其 巨大的。
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人类传播史上的第一次革命——创造了语言——发生在10万年前；人类在公元前约3500年发明了文字，实 现第二次传播革命；在第三次传播革命中，中国人在唐朝初期首先发明了印刷术；1844年，人类进行第四次传 播革命，迎来了电讯传播的曙光；1946年，电脑在第五次传播革命中出现。
在人类传播史上，五次传播革命所产生的巨大作用，不仅有力地改变了人类在过去的所感所触和所见所闻 ，而且深刻地影响着人类在现今的所思所想和所作所为。因此，对人类传播史上的五次传播革命的起因、过程 和意义进行分析研究，无疑既有深刻的历史意义，又有重要的现实意义。
语言传播：第一次传播革命
语言的产生，是人类第一次传播革命的直接推动力。那么，语言是何时产生和怎样产生的呢？ 菲利浦•列 伯曼在《人类说话的进化》（1984）中推断：人类的远祖大约在9万年前的某个时候开始“说话”，大约在3.5 万年前的某一时期开始使用语言。罗伯特•芬（1985 ）的推断与此稍有不同。至于语言是怎样产生的？各种猜 测可谓异彩纷呈：“汪汪”派认为，言语是通过模仿狗叫等自然的声音形成的；“哼哟”派认为，言语是在从 事某项群体的重体力劳动时为协调动作发出的声音形成的；“感叹”派认为，语言是由偶然地表现感情（疼痛 、高兴、恐惧、悲哀）所产生；“唱歌”派认为，语言是从传播感情和欢乐事件的歌声中演变而来。在众多的 猜测中，恩格斯的“语言起源于共同劳动”的假说〔1〕，百多年来受到非议最少。
关于语言的产生，我们倾向于这样的假设和猜测：它起源于劳动，但并不局限于群体的共同劳动；它出现 在简单劳动之后和制造工具之前，而不是在制造工具的过程之中或之后。显然，劳动不仅锻炼双手，也锻炼大 脑，同时它也是人类积累经验、发展知识的源泉。而制造工具，光有灵巧的手和发达的脑是不够的，还必须有 足够的经验和知识。但经验和知识的积累和发展，任何单个人猿或人都是无法完成的，它必须通过无数个体间 的信息传递与交流来实现，而在当时，用来传播信息的最佳手段只有语言。
人类创造了语言，语言也就成了人类的标征，成了人类进行交际与传播的工具，也成了人类认识世界和改 造世界的有力武器。据考古发现，在人类漫长的进化史上，最先出现的尼安德特人在没有天灾人祸的情况下奇 怪地绝种了，而后起的克罗马农人却成了人类最直接的祖先。一个十分有力的推论是：前者没有语言，而后者 创造了语言。语言拯救和帮助了克罗马农人，人类也从此脱离了动物的信号传播藩篱，踏上了人类的语言传播 大道。第一次传播革命中的语言传播，使个人经验和见闻为大家所共享，使前人的文化积累为后人所继承。正 是在这种情况下，我们的祖先懂得了钻木取火、草药治病、保藏食物、饲养动物、耕种粮食、敬奉神祗，还掌 握了“知识含量”很高的制陶、纺织、炼铁等技术。若没有语言传播，这些转变就不会发生，“社会就会停止 生产，就会崩溃，就会无法作为社会而存在下去。”〔2〕
书写传播：第二次传播革命
在第二次传播革命中，人类发明了文字，开始进入书写传播时代。以往的语言传播，是人与人之间的口耳 相传、心记脑存，既不能“通之于万里，推之于百年”，亦不能保证信息在传播中不被扭曲、变形、重组和丢 失。因此，文字的发明及其应用于文献记录，可谓是人类传播史上的一大创举。它一方面引导人类由“野蛮时 代”迈步进入“文明时代”，另一方面从时间的久远和空间的广阔上实现了对语言传播的真正超越。
论及文字的产生，埃及人归功于智慧之神，巴比伦人归功于命运之神，希腊人归功于奥林匹斯的传令官和 使者赫耳墨斯，只有中国人将文字发明的功劳归之于人自己——仓颉。现在，我们无需再作种种猜测，地下文 物和文献记录，已一再向我们表明了文字的最早存在，就象语言一样，文字也不是先在一两个地方形成的，形 成的也不是只有几种文字，但有一点是共同的：它们都是从古老的图画或洞穴图画经验中演变而来。易言之， 文字源于图画。大约在公元前3500年，在古埃及、克里特和中国大地上就最先出现了“图画文字”和“形象文 字”，它们一画一“字”，一“字”一意，几个画组合在一起则构成一个故事或事件。到了商代，中国人创造 了“象形文字”，而那些刻写在龟甲兽骨上的则叫“甲骨文”。这些文字基本上仍是图画的和表现性的，有的 就是简单的图画（如日、月、山、川等字），进一步发展才形成后来的指事、形声、会意等文字形态。
自从有了标准化的文字，人类既可以用它来记载口语、描绘事件、传播信息，也可以通过它反复阅读、慢 慢译解那些超越时空的来自远方的信息或早已死去的人留下的信息，并用它来保存和继承人类积累的精神财富 和文化遗产，而不必费尽脑汁去铭记，从而将较多的时间用于处理现有信息和为未来制订计划。
由于书写传播时代初期的图画文字或形象文字在发展中先后分化为符号——音节体系（如英语、法语等） 和单字——表意体系（如汉语、日语等），结果其功能与优势亦有差异。研究表明：英语、法语就比较容易学 、容易使用，也容易变化，这可能导致了西方人较为关注变革和发展的精神倾向；汉语、日语要花较长的时间 才能掌握几千个单字，用来阅读较为浅显通俗的文章，这同东方人关注稳定、团结和怀念过去的深厚感情颇为 一致。不过，虽然汉语和日语不易学习和掌握，然而一旦具有阅读能力，人的大脑对单字——表意体系的文字 的反映明显快于其它体系的文字。东京电机大学教授小谷城（1996）的研究进一步指出，同在单字——表意体 系，人的大脑对汉字反应的速度要比假名（日文）快三倍。他说，人们认识汉字单词，不需多声转化过程，从 字形就可以直接理解意思，具有其它文字所没有的快速阅读优势。此外，汉字还不会随着口头语言的变化而改 变，因此，人们有时虽听不懂（如方言），但能看得懂。于是在某种意义上，汉字成了中华民族团结统一的特 殊凝聚剂，成了社会和谐、安详、稳定的潜在力量。这是我们的祖先在发明文字时无论如何也料想不到的巨大 贡献。
在第二次传播革命中，书写媒介则经历了从沉重的石头、泥土逐步向较轻的龟甲、兽骨、木板、竹简和软 绵、便携的羊皮、绢帛、纸张的转变，而书写工具则经历了从划字的树枝、棍尖到刻字的石刀、铁刀到写字的 的毛笔的转变。这些转变反映了当时中国人在传播的文明程度上是怎样地让西方人所望尘莫及。对于这些，用 施拉姆（1982）的话说：“它是历史上震撼地球的大事之一。”
在充分肯定了中国人在文字发明上的成就之后，德弗勒（1981）接着写道：“与此同时，中国人又在另一 项发明——印刷方面，领先于西方。”
印刷传播：第三次传播革命
印刷术的发明，不仅给中国，也给欧洲和整个世界的文明带来了曙光，使人类社会发生了翻来覆去的巨大 变化，并引导人类传播真正步入了一个崭新的大众传播时代。
以往，由于媒介笨重、符号复杂、复制困难和传播垄断，书本知识只掌握在少数人手里，竹简、帛书等书 写媒介也只在上流社会流传。只有印刷术的产生和流传才打破了少数人对知识的垄断和在传播上的特权，冲破 了黑暗的中世纪宗教牢笼，开始了文艺复兴，进而又导致了工业革命。
印刷术起源于公元200年的中国拓印术，大约在唐朝初年（627 —649）中国人发明了雕版印刷术。唐长庆 年间，白居易的作品即常被人“缮写模勒（刊刻），炫卖于市井”（唐•元稹，824）。世界上现存的第一本印 刷品是我国唐咸通九年（868）印刷的佛典《金刚经》。北宋庆历年间（1041—1048），毕shēng＠①发明 了活字印刷术。元朝后期，我国的印刷术连同其它发明随着蒙古军队传向西方。许多年后，德国铁匠古登堡在 此基础上经过20多年的摸索和钻研，发明了铅活字和手压印制设备，于1456年首次印成了42行本的《圣经》。
随着印刷业的飞速发展，在15世纪末和16世纪初，整个欧洲的主要城市几乎都有了印刷所，印刷传播业日 益兴旺。印刷品的大量出现，大大激发了人们的求知欲望，推动了教育的发展、文化的普及和科学启蒙、社会 进步；反过来，公众文化知识的提高又导致了对宗教、科学、哲学、文学书籍等印刷媒介的更大需求，于是形 成了一种良性循环，也加速了欧洲封建主义的崩溃和资本主义的诞生。
按照美国社会学家查尔斯•库利在《社会组织》（1909）一书中的观点，报纸、书籍和杂志作为新的大众 媒介，它不仅消除了人们相互隔绝的障碍，影响到社区相互作用的方式，而且推进了社会的组织和功能的重大 变化，甚至永久地改变了那些使用者的精神面貌和心理结构。一句话，印刷传播革命使人类社会在各个方面都 发生了前所未有的深刻变化。
电讯传播：第四次传播革命
千百年来，人类一直梦想自己能有两只“顺风耳”、一对“千里眼”，以突破时间和空间的限制，迅速而 真切地得到远方的信息；更梦想自己的声音和形象能够记录下来，传之千里，流之百年。这曾被认为是天方夜 谭。但是，自从美国人莫尔斯于1844年发明了电报，贝尔于1876年发明了电话，爱迪生于1877年发明了留声机 ，法国人马瑞根据中国灯影原理于1882年发明了摄影机，以及随之而来的电影、广播、电视的相继出现，人类 的梦想已不再是梦想了，而是实实在在的存在。
在人类的第四次传播革命中，以广播和电视为主体的电讯传播，不仅彻底突破了时间和空间的限制，使信 息传播瞬息万里，而且挣脱了印刷传播中必不可少的物质（书、报、刊）运输（通过人及交通工具把印刷品送 到读者手中）的束缚，为信息传播开辟了一条便捷、高效的空中通道。特别是广播、电视一旦插上卫星转播的 翅膀，这种传播就已不再是通常的大众传播了，而是无处不在、无时不有的跨国传播甚至全球传播了。因此， 电讯传播正被人们看作是继武器仗之后的符号仗，军事大战之后的信息大战，而且肯定会随着传播科技的进步 愈演愈烈，并日益成为强国争霸的工具。
同时，电讯传播也不象印刷传播那样是将人推向信息，而是将信息推向人。电讯传播是“在没有识字需要 的情况下，为人类提供了超越识字障碍，跳入大众传播的一个方法。”（罗杰斯，1988）。电视集声、光、电 和音、字、形于一身，一出现便光彩照人，这又曾让报纸和广播自惭形秽，大声呼救，唯恐陷入灭顶之灾。事 实上，今日的报纸、广播、电视已在新闻传播领域形成三足鼎立之势，它们各有特点，互动互助，共演共进， 一起为人类的传播事业作出贡献。相信这种共同发展的趋势还会继续下去。
互动传播：第五次传播革命
互动传播是指以电脑为主体、以多媒体为辅助的能提供以交谈方式来处理包括捕捉、操作、编辑、存贮、 交换、放映、打印等多种功能的信息传播活动。由于它是指各种数据和文字、图示、动画、音乐、语言、图像 、电影和视频信号组合在电脑上，并以此互动，所以我们以1946年埃克特等人研制成功的世界第一台电脑主机 “埃尼阿克”的诞生年，作为第五次传播革命的纪元。接着，苏联于1957年发射了第一颗人造卫星；美国于19 69年实现电脑对接，又于1980年结成互联网络；1994年各发达国家纷纷提出“信息高速公路计划”，中国亦宣 布跟进。50年来，电脑更新换代愈来愈快，初期每四年换一代，接着一年换一代，而1995年却换了两代，即在 486之后又研制成586（奔腾）和686 （高能奔腾）。个人电脑的体积越来越小，造价越来越低，而功能却越来 越多，操作也越来越方便。如今，电脑以及部分多媒体系统已进入千家万户、寻常人家。预计到2000年，电脑 将在全世界的各行各业和众多普通家庭中使用。在这一次的传播革命中，电脑加上各种软件和多媒体（诸如电 话、录像机、录音机、收音机、电视机、传真机、打印机、游戏机等），将成为人们综合处理人际传播、组织 传播、大众传播和跨国传播乃至全球传播的主要媒介。人类已经进入信息社会，并且即将进入一个综合传播的 新时代。
互动传播与传统的印刷传播、电子传播的最大不同之处在于：它是在电话高度网络化的基础上形成的，因 此它除了具有其它传播的特点之外，还具有自己的主动性、参与性、交谈性和操作性的特点。以往，人们只是 被动地阅读、收听和观看他们所“不讨厌的内容”，传播者积极地将信息推向受众，受众则消极地打开“开关 ”等待信息的来临；而互动传播中的人则必须自己主动地去寻找信息、追逐信息，向资料库、电子图书馆、影 视中心索要信息。以往，受众对传播的参与和交流程度极低，互动传播则要求人们有很高的个人参与性，即不 仅要主动地选择、寻找、索要信息，而且要积极地向“信息高速公路”输送信息，或者通过“电子信箱”交流 信息，或者通过互联网络（INTERNET）召开会议、远程会诊、合作攻关，甚至可以远距万里而在网络上对同一 文件进行共同修改。此外，互动传播中的各种媒介将在发展中有机地组合、集成为一体化多功能的多媒体电脑 ，而各大传播机构（如邮局、报社、电台、电视台、电影公司、图书馆等）也将有序地聚合成一种松散的超级 信息传播系统。互动传播和信息革命正在进入一种“临界状态”，一个崭新的社会即将到来，新的社会包容着 整个世界，互动传播连接着整个人类。每一种传播科技的出现与发展都在缩短着时间和空间，消弥着文化差异 ，扩展着思想观念。
结语：主要观点及其推论
通过对人类传播史上的五次传播革命的描述与分析，本文的主要观点及其推论为：
从五次传播革命的历程所呈现的状态看，我们认为有四种状态应引起传播学界的重视：（1）人类传播革命 的步伐一直呈加速度状态发展。从动物传播进化到人类的语言传播用了200万年，从语言传播进入书写传播用了 9.5万年，从书写传播跨入印刷传播花了约4千年，而从印刷传播迈进电讯传播只用了1200年，从电讯传播进入 互动传播的时间更短，只有102年，而互动传播至今只有50年。可见，传播革命的步伐、传播技术和手段的革新 在时间上是以逐步加快、越来越快和间隔越来越短的情势发展的。（2）传播符号、传播媒介和传播科技始终呈 叠加性状态发展。即新的传播革命爆发后，人类在旧的传播革命中所使用的传播手段不会被随之抛弃，而总是 以一种新的面貌又出现在新的传播活动之中。它们的生存与发展似乎不遵循优胜劣汰物竞天择的法则，好像更 符合互动互助、共进共演的原理。因为，书写传播并未淘汰语言传播，电讯传播并不排斥印刷传播，而互动传 播的发展似乎要将各种传播的形式与手段集于一身。（3）叠加性状态又导致了整合性状态。如电话是对语言传 播和电报传播的整合，广播是对电话和唱机的整合，电视是对广播与电影的整合，而电脑的发展将整合一切传 播媒介。（4）信息和知识的增长和积累呈金字塔状态发展。据统计，图书馆的规模每14年增加一倍，每一世纪 增加140倍。14世纪初，巴黎大学图书馆藏书1380册，当时是欧洲最大的图书馆，现在世界上已有12个图书馆藏 书超过800万册。目前，全世界每年出版50万种图书，平均每分钟就出版一种新书。科学知识的增长愈来愈快， 过去每隔10—15年人类知识就要翻一番，如今3—5年就要翻一番。有人曾对美国化学文摘作过统计分析，发现 文摘的数量达到第一个百万条花了30年，第二个百万条花了18年，第三个百万条花了4年，第四个百万条只用了 2年半……。还有人统计得知，人类全部科技知识总量的80％以上都是本世纪产生的。〔3〕显然，这一状态与 前述三种状态是一种相辅相成，互为因果的关系。
从五次传播革命所形成的结果看，每一次传播革命都将人类带进一个新的境界、新的时代。（1）语言传播 是人类的重要特征，也是社会的凝固剂。它拯救了人类，使人类可以交流信息、积累知识，从而由动物世界进 入人类社会，由野蛮时代进入文明社会。（2）书写传播使人类可以将事件和自己的经历、见闻、思想固定或记 录下来，并超越时间和空间的限制进行传播。梁衡（1996）认为：语言文字还是民族生命的一部分。对内，它 是整合民族感情的粘接剂；对外，它是抵御外来文化侵略的一道屏障。（3）印刷传播打破了少数人的传播特权 ，导致了文化和教育的普及，使人类由人际传播时代进入大众传播时代。（4）电讯传播则将人类由国内传播引 入国际传播。（5）互动传播是将以往的各自独立的单一传播转变为综合传播，将单功能的媒体转变为多功能的 媒体，将人类由工业社会带进了信息社会。信息成了社会财富的象征和社会运作的“核能”。可见，每一次传 播革命不仅极大地提高了人类的传播能力，而且从物质到精神都给人类带来前所未有的巨大变化。
再从五次传播革命与社会进步的互动关系来看，我们认为传播革命对社会进步具有巨大的推动作用。（1） 每一次传播革命爆发都为人类的生存与发展带来新的机遇，开拓了新的空间。（2）人类传播革命与社会文明进 步不仅互相促进而且步调一致，在步幅和步频上基本上成正比关系。（3）最先发生传播革命的地方或国家，不 仅社会进步和文明的程度高，而且在竞争中也处于明显的优势地位，如语言传播时代的克罗马农人，书写传播 时代的古埃及人和希腊人，印刷传播时代的中国人，电讯传播和互动传播时代的西方发达国家。（4）传播上的 优势地位必然会导致文化上的优势地位，因此在发达国家的文化侵略面前，弱小国家几乎没有还手之力。于是 ，小国文化将首先消融在邻近的发达大国的文化洪流之中，进一步的竞争将会逐步形成几块区域文化（如以儒 教为核心的亚洲文化，以伊斯兰教为核心的中东文化，以及以标榜自由与民主为特征的西方文化，等等）。这 一切都警示我们，必须积极参与传播革命，十分重视传播科技的开发、引进和运用，同时还要加强对人类传播 活动的研究。否则，国家付出的代价将是极其巨大的

参考资料：http://..com/question/13773342.html?fr=qrl3

Ⅲ 信号通路研究思路

原文：信号通路研究思路_网络文库 https://wenku..com/view/449d5a41ec3a87c24128c450

证明一个药物能通过抑制P38表达而发挥保护细胞的作用，需要做的是：

要证明你的药物是通过抑制P38表达而发挥保护作用，

首先 ，要证明P38表达增加会导致损伤。

其次，要证明你的药物存在保护作用。

再次，证明你的药物可以抑制P38表达。

最后，证明你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。

这里需要建立一个损伤模型。正如你提到的，钙离子导致P38mapk的增高，如果某种损伤可以通过钙离子导致P38mapk的增高，那么你就建立起了一个损伤模型。这时，对P38做个RNA干扰，使其表达下降，再来损伤刺激，如果这时损伤刺激不会导致损伤，那么可以说P38mapk的增高会导致损伤。

这里最好不要用P38的抑制剂SB来处理，因为这个抑制剂是针对P38活性的抑制剂，抑制的是P38的磷酸化，而不是表达量。

如果说明的问题是p38磷酸化水平增加而导致损伤，那么我建议用抑制剂。这时还可以用Dominant-negative。抑制剂的实验证实该药物不影响P38表达，而影响其活化。（应该首先考虑选用抑制剂，因为目前一些药物的作用机制不是抑制靶点的表达，而是抑制靶点的激活。如果在此应用RNAi的话，很可能会漏掉这个机制或增加实验步骤。）

当然就是用你的药物先处理一下，再来损伤刺激，如果这时损伤刺激不会导致损伤，那么可以说你的药物存在保护作用。

用你的药物先处理一下，再来损伤刺激，再检测P38表达，如果用药组相对于没有用药组P38表达下降，那么可以说你的药物可以抑制P38表达。

这一步看似不必要，其实是最重要的步骤，而国内的文章往往忽略了这一关键环节。

这里建议还是用RNA干扰P38表达，再用你的药物处理，再进行损伤刺激，如果用药组与没有用药组的损伤程度一致，那么才可以说你的药物是由于抑制了P38表达而发挥保护作用。

抑制剂也有其局限性，有时是“致命”的，主要原因是抑制剂缺乏特异性。虽然我们在文章里看到用抑制剂的时候都说是什么什么的特异性抑制剂，但真的那么特异吗？其实往往是作者为了写文章发文章的需要而夸大了抑制剂的特异性。细胞里无数的信号通路，谁也不能保证抑制剂在作用于靶分子时不会影响其他信号通路。其实无论什么抑制剂，对剂量的要求都相对比较苛刻，为什么？就是因为一旦浓度高了，就不知道会干扰到其他哪些信号通路，从而产生很多说不清道不明的现象。

PI3K的抑制剂---LY294002和wortmannin,它们都能抑制PI3K和相关的激酶，但LY294002的浓度达到200μM常用来抑制DNA依赖的蛋白激酶（DNA-PK）；wortmannin在浓度超过3μM常用来抑制运动失调性毛细血管扩张基因突变（ATM)以及DNA-PK。相对而言，MEK1/2的抑制剂U0126和PD98059以及P38MAPK的抑制剂SB203580就要好一些。所以研究人员一般应用LY294002时采用20μM，应用wortmannin时采用0.2μM，以此来最小化其他的效应。有些学者们同时应用两种抑制剂进行对比，也许也有顾及于此的原因吧。

但是，从严谨的角度讲起特异性的话，RNAi也不能说是绝对特异的，我们只能说它是高特异性，因为RNAi的机制中还有很多没有完全阐明。 一些研究者会在RNAi处理后，还要在实验中应用Western来同时检测该蛋白所在家族的其他成员的表达量变化以检测其特异性和选择性，以表严谨 。举个例子：

比如针对Survivin进行RNAi之后，你最好同时检测XIAP , cIAP1/2等蛋白。当然，如果你所针对基因的siRNA构建已经很成熟，有前人的文章检测特异性做基础，那就另当别论了，所以给科研态度很严谨的lwjssry兄弟提个醒，如果你的siRNA序列尚无很好的文献应用基础，这个问题你也许应该考虑的。

临时找到一个描诉相关内容的06年文献，影响因子3分多，截取其中的内容供参考

信号通路有细胞特异性和条件特异性，即同一信号通路在不同的细胞之间或同一细胞在不同的条件下，作用机理可能是不同的。

细胞内的信号通路之间存在复杂的相互作用，想证明哪一个分子是另一分子的充要条件真的很难。本人最近研究了一个信号系统的两个信号分子，A和B。A在细胞质，B在细胞核。以往的研究已经证明A是B的上游信号通路之一。我们的研究是想证明在某种病理过程中A和B作为一个系统发挥作用。我们首先应用能够提升该系统的药物干预，发现A升高的同时B也得到升高，但这也不能说明什么问题。所幸的是A分子目前有特异性的阻断剂，于是我们便对A分子的激活进行阻断，结果发现B分子的激活也收到抑制。由此初步推测A和B可能在某种病理过程中作为一个系统发挥作用。但也只能证明了A是B的必要条件而已。

做信号传导的在于你研究一种的机制有什么作用，其机制是否于信号传导有关，有哪些关系，是什么原因导致此信号传导的表达，表达后的下游基因怎么变化，这中间最好有基因敲出或者抑制剂和激动剂干预后看看上游 下游之间的变化和你预期的结果有没有关系。如果单纯的做信号传导而去做没有什么意义的，就像前面楼上说的一样信号的启动/最终发挥功能！

“想证明哪一个分子是另一分子的充要条件真的很难”。 我最近正在做一个实验，证明A对B的作用。先用外源物处理细胞，跑wetern blot，发现A和B都有所增加，B的量增加在A之后。于是用抑制剂抑制A，以及用siRNA使A knockdown，然后看B的表达量也下来了。但是这也只能证明A和B有关联，无法证明A对B是直接作用还是间接作用。甚至无法说明B的改变是A信号knockdown造成的，还是A信号knockdown以后，细胞为了弥补该信号的不足，补充促进了C信号，而C信号可以改变B信号。最近在考虑用Co-IP证明A和B有结合作用，也许能证明A和B的直接关系。

探讨信号转导中分子间的充要条件，与探讨数学中的充要条件是不一样的，因为细胞中信号转导通路往往存在反馈机制。即使X是上游信号，Y是下游信号，改变Y信号也会通过反馈机制使得X信号发生改变。所以，在考虑生物体内的信号分子间充要条件时会复杂得多，要慎之又慎下结论。

信号分子的环路效应普遍存在

个人觉得研究A分子与某个信号通路应该更具体得分为两种情况：

1，以前还不知道A分子是这个信号通路的成分，这时我们要证明A分子是这个信号通路的成分，这时的研究就是上文谈到的研究内容了。

2，A分子是信号通路的成分，这是已知的，现在发现某个现象跟这个通路有关，现在我们要证明A分子是这个信号通路参与这个现象的关键分子，则又是另一种模式。1，“创造信号通路”，别人没有研究过A和B 之间的相互作用，而你发现了，并证明了，这就是创造，其实准确点说应该是“发现”，因为信号通路是客观存在的，只不过被找到了而已，不过用“创造”这个词比较形象。这一类的研究是开创性的，比较困难的，研究的时候常常是用免疫共沉淀去把与某个蛋白结合的一堆蛋白都搞出来，再做质谱分析，进行鉴定，再进一步证明两者间的相互作用，这就涉及到充分必要条件的证明。单纯进行这一类的研究缺乏目的性和研究的意义，所以通常还是建立于某种现象基础上的，用自己“创造”的信号通路来解释某种现象，也就是下面说的第二种模式。

2，“利用信号通路”，利用别人或自己“创造”的信号通路来解释某个具体的现象，比如，某个药物、某种毒物、某种应激、某种射线、等等，在这些刺激下，具体到某种细胞的某条信号通路发挥调控作用。

在第一类中，是用充分必要条件来证实A分子与B分子的作用。

在第二类中，是用充分必要条件来证实A现象与B信号通路之间的关系。

看文献是最基础的训练，看文献，一是看思路，二是学技术和逻辑思维。思路告诉我们为什么去做，技术和逻辑思维教我们怎么去做。

过表达A基因，发现B基因的mRNA水平明显增加，对应的B的蛋白水平也明显增加；干扰A基因表达，发现B基因的mRNA水平明显降低，对应的B的蛋白水平也明显降低。投稿，被拒稿，主要原因是审稿人提出：应该弄清楚A是如何调控B的表达的。请问各位老师，A调控B可能是通过什么途径？需要做什么实验？A和B都是脂类代谢中的酶基因，它们在胞浆和核内都有表达。

回答：

1、下一步应该搞清楚B基因mRNA改变的原因是什么，在转录水平还是影响了RNA的稳定性。

2、假设A和B是直接关联的（假定A影响B的转录），是否一般得做两个实验：Luciferase reporter assay和CHIP assay？只做一个CHIP实验行不行？其中Luciferase reporter assay是否就是为了检验A蛋白是否能结合到B基因的Promoter区？是不是A蛋白必须得是转录因子才有可能结合到B基因的Promoter区？另外，怎么知道A蛋白是不是转录因子呢？

针对这个问题的回答：不过建议找几篇JBC上的文章看看，JBC上这种调调的文章挺多的，精读3-5篇，把它的outline搞清楚，你就胸有成竹了。——我打开JBC网站一看，呵呵，每期专门有Gene Regulation板块。根据JBC上面的文章，A调控B基因，很多都是通过第三者如转录因子实现的。我再翻出以前自己的Real-time PCR实验结果，发现过表达A基因后，转录因子C的mRNA水平显着增加，而干扰A基因表达，转录因子C的mRNA水平显着降低。目前这个现象还没有文献报道。后期，我准备通过Luciferase reporter assay和CHIP assay来验证转录因子C是否能与B基因作用。我想请教的问题是：A基因调控转录因子C，除了前期的Real-time PCR实验（当然再补一个Western Blot实验），我还需要做其他实验吗？会不会审稿人再提出：你需要弄清楚A基因如何调控转录因子C才行。说简单点：A基因通过转录因子C调控基因B，是否要将A影响C，C影响B两步都弄清楚？——看你的目标杂志了，如果是JBC这样偏机制的，估计会要你说清楚的

3、A可以影响B的mRNA水平，也能影响B的蛋白水平，这样的话，可能是只通过影响B的RNA水平影响B的蛋白表达，也可能同时影响B的RNA水平和B的蛋白稳定性。B的蛋白稳定性你可以通过加入CHX检测B的半衰期。另外就是你说的Luciferase reporter assay实验。

4、A和B的变化总是一致的，应该很有可能是通过转录水平调控的，因为你的mRNA、蛋白都变了。既然是转录水平，那就要找到B的启动子的序列，对应和这个序列结合的蛋白，这个蛋白可能是A也可能是其他的间接的。

http://..com/question/187327495.html
将两种因子A和B分别做基因沉默，沉默A gene 看看A和B表达的情况，然后沉默B gene 再看看A和B表达的情况。上游的因子被沉默表达后，下游的因子肯定表达下调或不表达。而下游因子被沉默表达后，上游因子的表达不会受影响。还可以做个免疫共沉淀，看看上游因子是不是直接结合（作用）于下游因子的基因启动子区，开启下游表达。如若不是，可能另有其他的环节在中间过程。

http://www.helixnet.cn/bbs/thread-19295-1-1.html
《受体信号转导研究方法（第2版） 》
作者： （英）维拉斯（Willars，G.B.），（英）查理斯（Challiss，R.A.J）原着，
张幼怡主译
出 版 社： 北京大学医学出版社
出版时间： 2008-3-1 <wbr>
这本书全面反映了G蛋白偶联受体(GPCR)及其信号转导领域中最新的研究现状和成就，详细介绍了受体及其信号转导研究的技术、方法及原理。内容涉及受体与配体的结合、受体抗体的制备、受体与G蛋白的相互作用和激动、受体表达和定位、受体内化和翻译后修饰、GPCR与蛋白质相互作用以及如何利用敲除和敲人策略研究受体生理与药理功能等新技术、新策略。

可以通过对受体 加抗体处理 或者 RNAi/过表达 等方式，调节受体表达量，然后用 基因芯片技术 研究下游通路各基因的表达情况。

在上述方法做完后，可以用受体的好用的抗体，做个免疫共沉淀(CoIP)，将所有和它相互作用的蛋白抓下来，直接煮珠子(protein A-argrose-beads)，做SDS-PAGE，用IgG做对照，然后打质谱，鉴定出差异蛋白，当然这只是补充试验，胶图上分子量大的可能是下游蛋白，而分子量小的可能是上下游信号蛋白。

Ⅳ 如何研究信号传导通路请问研究某种受体或蛋白的下游信号传导通路，实验设计的一般方法，都有哪些谢谢

在KEGG或BioCarta这些pathway数据库里找到你感兴趣的通路，在pathway图上找到你感兴趣的蛋白后就能确认它的下游。实验方法大体上就是上调（瞬时表达、mimics）或下调（Knockout、RNAi）你的Gene of Interest，再检测下游的蛋白发生了上调还是下调，看看你的GOI和它们什么联系。