1. 流式细胞术分析细胞因子，结果图分析，四个区域如何分析分别代表什么
这种四个象限的图，一般都是看两种染色的关系（横坐标和纵坐标）。
左下象限，是两种目标抗原都没有表达（染色阴性）。右上象限，是两种都有表达（双阳性）。
而左上象限则是纵坐标的那个抗原有表达（单阳性），但是横坐标那个没有表达（阴性）
右下象限是横坐标那个抗原有表达（单阳性），但纵坐标那个没有表达
这个图没有贴出来的是做实验时候的阴性对照（全部在左下象限），这样才能原来设置象限的位置。还有做代偿的对照（compensation control），是设置机器，排除假阳性用的。
2. 细胞活性和细胞毒性检测的实验方法
细胞数量确定
1.将细胞悬浮液（100μL/孔）接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育（例如，在37℃，5％CO2下）。
2.向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。
3.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。
4.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。
细胞增殖和细胞毒性测定
1.将种子细胞以103-104个细胞/孔的密度在96孔板中在100μL培养基中培养。将细胞在CO2培养箱中于37℃培养24小时。
2.将不同浓度的待测物质加入板中。
3.将培养板在培养箱中孵育适当的时间（例如，6,12,24或48小时）。
4.使用重复移液器向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡，因为它们会干扰O.D.读数。
5.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。
6.在读取孔板之前，重要的是在轨道振动器上轻轻混合1分钟，以确保颜色均匀分布。
7.使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。
数据分析
统计分析有几种方法，您可以选择使用O.D.值或细胞数量，我们提供其中一种方法。
细胞存活率（％）= [（As-Ab）/（Ac-Ab）]×100
抑制率（％）= [（Ac-As）/（Ac-Ab）]×100
As =实验孔吸光度（含有细胞，培养基，CCK-8和待测化合物的孔的吸光度）。
Ab =空白孔吸光度（含有培养基和CCK-8的孔的吸光度）。
Ac =对照孔吸光度（含有细胞，培养基和CCK-8的孔的吸光度）。
制作标准曲线
1. 细胞计数板计数细胞悬液中的细胞数。
2. 使用培养基，等比稀释细胞悬液为一个浓度梯度，通常需要5-7个浓度梯度，每组几个复孔。然后接种细胞。（注意每孔的细胞数量。如果您将细胞悬液稀释在管中，在加入培养板的孔之前，请小心再次混匀细胞。每孔中细胞悬液的体积应该是一致的。）
3. 培养直至细胞贴壁（通常2-4小时），然后每100 μl培养基加入10 μl CCK-8。继续孵育1-4小时，用酶标仪测量450nm处的吸光度。制作出一条以细胞数为X轴坐标，O.D.值为Y轴坐标的标准曲线。
可以基于该曲线确定待测样品的细胞数。使用此标准曲线的先决条件是培养检测条件相同。
注意事项
1. 确保药物和CCK8均匀分布在培养基中。
2. 细胞增殖越多, 颜色越深; 细胞毒性越强，颜色越浅。
3. 对于贴壁细胞，每孔至少需要1000个细胞（100 μl培养基）。对于白细胞，由于灵敏度较低，每孔至少需要2500个细胞（100 μl培养基）。推荐的96孔板每孔最大细胞数为25000。如果使用24孔或6孔板进行该检测，请计算相应的每孔的细胞数，并调整CCK-8的体积，使其为每孔总液体体积的10％。
4. 因为CCK8测定是基于活细胞中的脱氢酶活性，影响脱氢酶活性的条件或化学物质可能导致实际活细胞数与使用CCK-8测定活细胞数之间有差异。
5. WST-8可能与还原剂反应生成WST-8 formazan。如果使用还原剂 (例如一些抗氧化剂)会干扰检测。如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。
6. 孵育2小时后，背景O.D.值一般为0.1-0.2单位。
7. 注意不要在孔中引入气泡，因为它们会干扰O.D.值。
8. 如果您想对CCK8溶液进行灭菌，请使用0.2 μm的膜过滤溶液。
9. 孵育时间因孔中细胞的类型和数量而异。通常，白细胞着色较弱，因此可能需要较长的孵育时间（长达4小时）或大量细胞（~105细胞/孔）。
10. 如果细胞悬液中存在高浊度, 测量并减去样品在600nm或更高波长的O.D值。
11. CCK8不能用于细胞染色。
12. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。
13. CCK8的毒性非常低，在CCK8测定完成后，相同的细胞可用于其他细胞增殖测定，例如结晶紫测定，中性红测定或DNA荧光测定。（除非细胞极为稀少，不推荐。）
14. 该试剂盒可用于大肠杆菌，但不能用于酵母细胞。
15. 在读取平板之前，您可以在摇床上轻柔混匀。
16. 我们建议将细胞接种在靠近培养板中央的孔中，最外围一圈孔中的培养基容易蒸发，可以用PBS，水或培养基填充这些孔。
17. 如果您没有450nm滤光片。您也可以使用吸光度在430和490nm之间的滤光片, 450nm滤光片具有最佳灵敏度。
18. 测量450nm处的吸光度，如果您需要进行双波长测定，作为参考波长可以测定650nm处的吸光度。
19. 药物中金属离子的存在可能会影响CCK8的灵敏度。终浓度为1mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5%、15%、 90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。
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推荐测试剂 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
3. hochest33258法检测细胞凋亡该怎么分析
实验方法
Hoechst-PI染色法检测细胞凋亡
亚“G1 ”峰方法简便，但只是代表G0 /G1 期发生凋亡的细胞，S期和G2 期细胞凋亡发生于G1 峰后，无法观察。此外，由于全部细胞均经固定，因此不能区别死细胞和活细胞。Hoechst-PI染色则可弥补上述不足。Hoechst 33258 可被活细胞摄取，与DNA结合在紫外光下呈蓝色荧光。继而PI使死细胞着染产生红色荧光。因此在细胞二维直方图上根据红蓝两种荧光可分辨三种细胞：正常活细胞对染料有拒染性，蓝色和红色荧光均较少；凋亡细胞有膜通透性改变，主要摄取Hoechst染料，表现为强蓝色荧光，弱红色荧光；坏死细胞由于有很强的PI嗜染性并可覆盖Hoechest染色，故呈弱蓝色强红色荧光。
【材料及试剂】
（1）碘化丙啶（PI）贮存液：100mg/ml，4℃避光保存。
（2）Hoechst 33258贮存液：100mg/ml，4℃避光保存。
（3）0.01mol/L PBS pH 7.0~7.2
【操作步骤】
（1）常规制备单细胞悬液；
（2）加入Hoechst 33258 溶液，使其终浓度为1mg/ml，37 ℃水溶，7分钟；
（3）冰上冷却， 离心弃染液， PBS重悬；
（4）加入PI染液，使其终浓度为5mg/ml，冰浴；
（5）离心弃染液，PBS洗一次，进行流式细胞仪进行分析，、直外激光检测记录400~500nm处蓝色荧光和大于630nm处红色荧光；
【结果判断】
正常对照细胞呈弱蓝色及弱红色荧光；凋亡细胞呈蓝色及弱红色荧光，坏死细胞呈强红色及弱蓝色。
4. 怎么对药物与细胞作用实验中mtt结果进行统计学分析
⒈选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成数量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。
⒉药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。
⒊
时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。
⒋培养时间。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。
⒌MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。
⒍理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。
⒎实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。
⒏避免血清干扰。用含15%胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10%胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。
MTT
溶液的配制方法
5. 摄取实验需要根据细胞在每个孔内的量的多少来分析其对药物的摄取情况
博凌科为解答：细胞总蛋白质含量测定广泛用于细胞生长实验以及用作表示酶，受体及细胞外代谢产物特异性活性的度量单位，蛋白质含量测定最常用的方法是Lowry's法和 考马斯亮蓝测定法，后者比前者更敏感，细胞用量少，50-10000个细胞即可。具体方法请查阅司徒镇强编写的细胞培养P188-189。
6. 流式细胞术结果运用什么统计方法来分析
要看具体实验般原则先gate所需要细胞群再看染色流式检测数情况都检测相百比平均荧光强度同种荧光通道都阳性细胞比较荧光强度
7. 细胞的传代培养结果分析
培养的细胞由于细胞增殖，数量增加，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，将培养的细胞分散，以1：2或1：3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养，一般细胞可传代10一50代2、细胞后贴壁过程3、培养细胞的一代生长过程（1）潜伏期：细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间二倍体细胞系该段时间较长，大概为24一96h；连续细胞系时间短，大概10一30min（2）指数生长期：细胞增殖最旺盛时期，此时进行细胞实验较佳指数生期持续3一5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制。而恶性细胞则无接触抑制现象；癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制（3）停滞期：细胞数量达到饱和密度后，细胞与营养液的交换面积减少，代谢产物积累，pH下降细胞停止增殖，进入停滞期。此时应该进行细胞传代，但是得传1一2代细胞才能恢复。4、细胞传代的一般步骤a、悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代b、贴壁细胞（1）实验准备，超净台喷洒酒精，紫外照射30min。准备好培养瓶／皿离心管，10％DMEM，0.25%胰酶，D一hanks液等，带上手套，口罩等（2）倒去旧培养基，用D一hanks液清洗一遍，去除沉积的死细胞等（3）加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。8. 高中生物所有实验的实验过程，方法，结论总结
生物实验总结
实验一 观察DNA和RNA在细胞中的分布
实验原理：DNA 绿色，RNA 红色
分布：真核生物DNA主要分布在细胞核中，线粒体和叶绿体内也含有少量的DNA；RNA主要分布在细胞质中。
实验结果: 细胞核呈绿色,细胞质呈红色.
实验二 物质鉴定
还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀 脂 肪 + 苏丹III 橘黄色
脂 肪 + 苏丹IV 红色 蛋白质 + 双缩脲试剂 紫色反应
1、还原糖的检测
（1）材料的选取：还原糖含量高，白色或近于白色，如苹果，梨，白萝卜。
（2）试剂：斐林试剂（甲液：0.1g/mL的NaOH溶液，乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液），现配现用。
（3）步骤：取样液2mL于试管中→加入刚配的斐林试剂1mL（斐林试剂甲液和乙液等量混合均匀后再加入）→水浴加热2min左右→观察颜色变化（白色→浅蓝色→砖红色）
★模拟尿糖的检测
1、取样：正常人的尿液和糖尿病患者的尿液
2、检测方法：斐林试剂（水浴加热）或班氏试剂或尿糖试纸
3、结果：（用斐林试剂检测）试管内发生出现砖红色沉淀的是糖尿病患者的尿液，未出现砖红色沉淀的是正常人的尿液。
4、分析：因为糖尿病患者的尿液中含有还原糖，与斐林试剂发生反应产生砖红色沉淀，而正常人尿液中无还原糖，所以没有发生反应。
2、脂肪的检测
（1）材料的选取：含脂肪量越高的组织越好，如花生的子叶。
（2）步骤： 制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央
↓
染色（滴苏丹Ⅲ染液2～3滴切片上→2～3min后吸去染液→滴体积分数50%的酒精洗去浮色→吸去多余的酒精）
↓
制作装片（滴1～2滴清水于材料切片上→盖上盖玻片）
↓
镜检鉴定（显微镜对光→低倍镜观察→高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒）
3、蛋白质的检测
（1）试剂：双缩脲试剂（A液：0.1g/mL的NaOH溶液，B液：0.01g/mL的CuSO4溶液）
（2）步骤：试管中加样液2mL→加双缩脲试剂A液1mL，摇匀→加双缩尿试剂B液4滴，摇匀→观察颜色变化(紫色)
考点提示：
（1）常见还原性糖与非还原性糖有哪些？
葡萄糖、果糖、麦芽糖都是还原性糖；淀粉、蔗糖、纤维素都是非还原性糖。
（2 )还原性糖植物组织取材条件？
含糖量较高、颜色为白色或近于白色，如：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜等。
（3)研磨中为何要加石英砂？不加石英砂对实验有何影响？
加石英砂是为了使研磨更充分。不加石英砂会使组织样液中还原性糖减少，使鉴定时溶液颜色变化不明显。
（4）斐林试剂甲、乙两液的使用方法？混合的目的？为何要现混现用？
混合后使用；产生氢氧化铜；氢氧化铜不稳定。
（5)还原性糖中加入斐林试剂后，溶液颜色变化的顺序为？ 浅蓝色 棕色 砖红色
（6）花生种子切片为何要薄？ 只有很薄的切片，才能透光，而用于显微镜的观察。
（7）转动细准焦螺旋时，若花生切片的细胞总有一部分清晰，另一部分模糊，其原因一般是什么？
切片的厚薄不均匀。
（8）脂肪鉴定中乙醇作用？ 洗去浮色。
（9）双缩脲试剂A、B两液是否混合后用？先加A液的目的怎样通过对比看颜色变化？
不能混合；先加A液的目的是使溶液呈碱性；先留出一些大豆组织样液做对比。
实验三 观察叶绿体和细胞质流动
1、材料：新鲜藓类叶、黑藻叶或菠菜叶，口腔上皮细胞临时装片
2、原理：叶绿体在显微镜下观察，绿色,球形或椭球形。
用健那绿染液染色后的口腔上皮细胞中线粒体成蓝绿色,细胞质接近无色。
知识概要：
取材 制片 低倍观察 高倍观察
考点提示：
（1)为什么可直接取用藓类的小叶，而不能直接取用菠菜叶？
因为藓类的小叶很薄，只有一层细胞组成，而菠菜叶由很多层细胞构成。
（2）取用菠菜叶的下表皮时，为何要稍带些叶肉？
表皮细胞除保卫细胞外，一般不含叶绿体，而叶肉细胞含较多的叶绿体。
（3)怎样加快黑藻细胞质的流动速度？最适温度是多少？ 进行光照、提高水温、切伤部分叶片；25℃左右。
（4）对黑藻什么部位的细胞观察，所观察到的细胞质流动的现象最明显？ 叶脉附近的细胞。
（5）若视野中某细胞中细胞质的流动方向为顺时针，则在装片中该细胞的细胞质的实际流动方向是怎样的？ 仍为顺时针。
（6）是否一般细胞的细胞质不流动，只有黑藻等少数植物的细胞质才流动？
否，活细胞的细胞质都是流动的。
（7）若观察植物根毛细胞细胞质的流动，则对显微镜的视野亮度应如何调节？
视野应适当调暗一些，可用反光镜的平面镜来采光或缩小光圈。
（8）在强光照射下，叶绿体的向光面有何变化？叶绿体的受光面积较小有一面面向光源。
实验四 观察有丝分裂
1、材料：洋葱根尖（葱，蒜）
2、步骤：（一）洋葱根尖的培养
（二）装片的制作
制作流程：解离→漂洗→染色→制片
1. 解离: 药液: 质量分数为15%的盐酸,体积分数为95%的酒精(1 : 1混合液).
时间: 3~5min .目的: 使组织中的细胞相互分离开来.
2. 漂洗: 用清水漂洗约3min. 目的: 洗去药液,防止解离过度,并有利于染色.
3. 染色: 用质量浓度为0.01g / mL或0.02g / mL的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色3~ 5min
目的: 使染色体着色,利于观察.
4. 制片: 将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片. 然后用拇指轻轻地按压载玻片. 目的: 使细胞分散开来,有利于观察.
（三）观察
1、先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。
2、换高倍镜下观察：分裂中期→分裂前、后、末期→分裂间期。（注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点）。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。
考点提示：
（1)培养根尖时，为何要经常换水？ 增加水中的氧气，防止根进行无氧呼吸造成根的腐烂。
（2）培养根尖时，应选用老洋
9. 细胞试验的mtt数据应该怎么分析
用什么样的数据统计主要看你的实验要求。直接用OD值、细胞存活率、细胞抑制率都可以。文献中上述几种表示方法都有，你可以看看。自己绘制曲线完全可以，用EXCEL或SPSS都可以。我的方法：测得各组的OD值后，求每组的平均值，再用以下公式计算各组的细胞增殖率：细胞增殖率（%）＝（本组OD均值－调零组OD均值）/（未处理组OD均值－调零组OD均值）X100%公式的基本意义是：假设未处理组（或称阴性对照组）的细胞增殖率为100%，调零组为0，各组计算后所得值为相对于对照组的一个相对增殖率。要计算细胞抑制率，用1减去所得到的增殖率即可。