荧光分光光度法定性定量分析方法

❶ 在分光光度法中，定量的方法有哪些

1、标准管法

将待测溶液与已知浓度的标准溶液在相同条件下分别测定A值，然后按下式求得待测溶液中物质的含量。

CT=（AT/AS）*CS

2、标准曲线法

先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测定出它们的A值，以A值为横坐标，浓度为纵坐标，作标准曲线（A~c工作曲线），可以求出标准曲线的回归方程。在测定待测溶液时，操作条件应与制作标准曲线时相同，以待测液的A值从标准曲线上查出（得到）该样品的相应浓度。

3、吸光系数法

当某物质溶液的浓度为1mol/L，厚度为1cm时，溶液对某波长的吸光度称为该物质的摩尔吸光系数，以ε表示。ε值可通过实验测得，也可由手册中查出。

(1)荧光分光光度法定性定量分析方法扩展阅读

分光光度法中标准曲线的影响因素

1、分析法自身的精密度：如显色反应灵敏度不高时，被测物质低于某一浓度就不能显色，当显色溶液中的掩蔽剂或缓冲液能够络和少量被测离子，就会使标准曲线线性关系不好。

2、测定用仪器（包括量具）的精密度：在分光光度法中要求在最大吸收峰处测定吸光度，分光光度计有效谱带宽度越窄越好，有利于获得纯度高的单色光，当单色光的纯度不够时，测定的吸光度就会偏低。

3、易挥发溶剂所引起的测定溶液浓度改变：如用亚甲蓝分光光度法测定阴离子合成洗涤剂时用四氯化碳、氯仿溶剂，因溶剂挥发性及实验时间的延长，会使测定的溶液浓度增大，导致吸光度重现性较差。

4、污染：制作标准曲线的操作步骤中，当存在损失或沾污时，会造成相关系数达不到实验要求。

5、空白值：空白值影响测定方法的检出限，也影响测定结果重现性，特别是对低浓度样品的测定，因此应引起足够重视，影响空白值主要因素有：纯水的纯度、操作过程中的沾污、实验条件的异常变化等。

❷ 分光光度法中定量分析常用的方法有哪些

分光光度法中定量分析常用的方法有：标准曲线法和标准加入法。

❸ 紫外分光光度法和荧光分析法的区别和各自的优缺点

1、原理不同：

（1）紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

（2）荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定。可根据不同的物质其组成与结构调整所吸收的紫外-可见光波长和发射光的波长。

2、应用范围不同：

（1）紫外分光光度计主要用于实验室。例如：鉴定物质：根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长λmax和摩尔吸收系数ε是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。与标准物及标准图谱对照等。

（2）荧光分光光度法的灵敏度通常比分光光度法高2〜3个数量级。在卫生检验、环境及食品分析、药物分析、生化和临床检测等方面有着广泛的应用。

3、所用灯不同：

（1）紫外光区通常用氢灯或氘灯。

（2）荧光分光光度法通常用钨灯或卤钨灯。

4、优缺点：

（1）紫外分光光度计高自动化程度，维护方便、操作简便、效率高。

（2）荧光分光光度法具有检测灵敏度高、专属性较强和使用简便等特点，常用于微量甚至痕量毒物的定量分析。

(3)荧光分光光度法定性定量分析方法扩展阅读

紫外-可见分光光度计的结构与功能：

由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统五大部分组成。

（1）光源：是提供符合要求的入射光的装置，有热辐射光源和气体放电光源两类。热辐射光源用于可见光区，一般为钨灯和卤钨灯，波长范围是350~1000nm；气体放电光源用于紫外光区，一般为氢灯和氘灯，连续波长范围是180~360nm。

（2）单色器：功能是将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束，它是分光光度计的心脏部分。

（3）吸收池：又称比色皿，供盛放试液进行吸光度测量之用，其底及两侧为毛玻璃，另两面为光学透光面，为减少光的反射损失，吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。根据材质可分为玻璃池和石英池两种，前者用于可见光光区测定，后者用于紫外光区。

（4）检测器：是将光信号转变为电信号的装置，测量吸光度时，并非直接测量透过吸收池的光强度，而是将光强度转换为电流信号进行测试，这种光电转换器件称为检测器。

（5）信号显示系统：是将检测器输出的信号放大，并显示出来的装置。

❹ 荧光分光光度法定性,定量分析的依据是什么

定量的根据是朗伯比尔定律，定性的依据是吸收曲线的特征值以及整个吸收曲线的形状

❺ 影响荧光分光光度法定量测定的主要因素有哪些

影响荧光分光光度法定量测定的主要因素

1．激发光照射

有一些荧光物质若受到强光照射，会发生分解而导致F↓。所以，荧光分光光度计通常在激发光单色器后装配有光闸，在测定时才打开光闸让激发光照射样品池。

2．温度

温度↑，荧光效率下降，F↓。因为，温度↑，增加分子间碰撞机会而使能量消耗掉。

3．pH值

pH值能改变某些荧光物质的电子构型从而影响荧光强度。

4．溶剂

有些溶剂会使荧光效率下降，也可能带来干扰荧光。

❻ 光学分析法是根据什么建立起来的分析方法 所涉及的方法都可以进行怎样分类

光化学分析法是主要根据物质发射，吸收电磁辐射以及物质与电磁辐射的相互作用来进行分析的一类重要的仪器分析法。
光学分析法是基于物质对光的吸收或激发后光的发射所建立起来的一类方法，比如紫外-可见分光光度法，红外及拉曼光谱法，原子发射与原子吸收光谱法，原子和分子荧光光谱法，核磁共振波谱法，质谱法等。
主要分为三类：
一、紫外-可见分光光度法
紫外-可见光区一般指波长200nm至760nm范国内的电磁波。根据物质分子对此光区电磁波的吸收特性进行定性和定量分析的方法称为紫外-可见分光光度法。紫外分光光度法使用的辐射波长范围是200~400nm，主要是引起分子中的外层价电子的能级跃迁。分子吸收此区域的紫外线后，在发生价电子能级跃迁的同时，也伴随着分子的振动和转动能级的跃迁，故形成带状紫外吸收光谱。据此可进行某些类型的有机物的定性、定量和结构分析：可见分光光度法使用的辐射波长范围是400~760nm，具有长共轭结构的有机物或有色无机物吸收一定波长的可见光后，发生价电子能级跃迁，并伴随振动和转动能级的跃迁，其吸收光谱也是带状光谱。通常紫外分光先度计都有可见光波段，因此常将两者一起称为紫外-可见分光光度法。
二、荧光分析法
荧光分析法是一种利用某些物质的荧光光谱特性来进行定性、定量的分析方法。一般所说的荧光分析法，是指以紫外或可见光作为激发光源，所发射的荧先波长较激发光波长要长的分子荧充分析法。
三、红外分光光度法
红外光谱是由于样品分子吸收电磁辐射导致振动-转动能级的跃迁而形成的分子吸收光谱，中红外区使用的辐射波长是2.5—50μm。分子吸收红外辐射必须满足两个条件；即只有当电磁辐射的能量与分子的振-转能级之间的跃迁所需要的能量相当时，分子才吸收这部分辐射；其二是被红外辐射作用的分子必须要有偶极矩的变化，也就是只有发生偶极据变化的振动，才能引起红外吸收谱带，这种振动才是红外活性的。

❼ 紫外可见分光光度法的定性,定量分析的依据是什么

1，定性分析的依据：紫外光波长具有一定的范围，不同的物质最大吸收波长不一样，比如甲物质在紫外的a和b波长处有吸收现象，而且在a处达到最大吸收，则甲物质的紫外最大吸收波长是a。不同的物质的这种波长不一样。

2，定量分析依据：根据朗伯-比尔定律，物质浓度和吸收波长的强度成正比关系。

紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。

当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。

(7)荧光分光光度法定性定量分析方法扩展阅读：

紫外分光光度计注意事项：

1，开机前将样品室内的干燥剂取出，仪器自检过程中禁止打开样品室盖。

2，比色皿内溶液以皿高的2/3～4/5为宜，不可过满以防液体溢出腐蚀仪器。测定时应保持比色皿清洁，池壁上液滴应用擦镜纸擦干，切勿用手捏透光面。测定紫外波长时，需选用石英比色皿。

3，测定时，禁止将试剂或液体物质放在仪器的表面上，如有溶液溢出或其它原因将样品槽弄脏，要尽可能及时清理干净。

4，实验结束后将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。

❽ 求问分光光度法原理

分光光度法
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。
在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法；用可见光光源测定有色物质的方法，称为可见光光度法。它们与比色法一样，都以Beer-Lambert定律为基础。
上述的紫外光区与可见光区是常用的。但分光光度法的应用光区包括紫外光区，可见光区，红外光区。
波长范围
(1)200～400nm的紫外光区，(2)400～760nm的可见光区，
(3)2.5～25μm(按波数计为4000cm<-1>～400cm<-1>)的红外光区。
仪器
紫外分光光度计，可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。
编辑本段基本原理
当一束强度为I0的单色光垂直照射某物质的溶液后,由于一部分光被体系吸收,因此透射光的强度降至I,则溶液的透光率T为:
根据朗伯(Lambert)-比尔(Beer)定律:
A=abc
式中A为吸光度，b为溶液层厚度（cm），c为溶液的浓度（g/dm^3)，
a为吸光系数。其中吸光系数
与溶液的本性、温度以及波长等因素有关。溶液中其他组分（如溶剂等）对光的吸收可用空白液扣除。
由上式可知，当固定溶液层厚度l和吸光系数a时，吸光度A与溶液的浓度成线性关系。在定量分析时，首先需要测定溶液对不同波长光的吸收情况（吸收光谱），从中确定最大吸收波长
，然后以此波长
的光为光源，测定一系列已知浓度c溶液的吸光度A，作出A~c工作曲线。在分析未知溶液时，根据测量的吸光度A，查工作曲线即可确定出相应的浓度。这便是分光光度法测量浓度的基本原理。
(参考网络)

❾ 分子荧光分光光度法

分子荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定的方法。

由于不同的物质其组成与结构不同，所吸收的紫外-可见光波长和发射光的波长也不同，同一种物质应具有相同的激发光谱和荧光光谱，将未知物的激发光谱和荧光光谱图的形状、位置与标准物质的光谱图进行比较，即可对其进行定性分析。

荧光分光光度计是最常见的实验仪器，主要用于对经光源激发后产生荧光的物质或经化学处理后产生荧光的物质成份分析。在检测食品安全、自然环境污染等重要的人类课题上，发挥积极的作用。

荧光分光光度计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器，有滤光片荧光计、滤光片-单色器荧光计等，通常均由以下四个部分组成：激发光源、用于选择激发光波长和荧光波长的单色器、样品池及测量荧光的检测器。