美司钠液相有关分析研究方法

❶ 液体成份的检测

需要找专业的检测机构，外面大大小小做检测的机构很多，但是精准度层次不齐，首先得选择业内口碑好的公司，一些小企业很多也只是外包的，因此周期和费用也是偏差的。

❷ 药学毕业设计(论文)开题报告

药学毕业设计(论文)开题报告范本

课题名称 HPLC法测定伏立诺他有关物质和含量的研究

[研究的主要目的和意义]

vorinostat (商品名Zolinza) 是Merck 公司开发的世界上第一个抑制组蛋白脱乙酰基酶( his2tone deacetylase ,HDAC) 的新型抗癌药物,该药于2006 年10 月6 日获得美国FDA 批准上市,用于其他药物治疗时或治疗后仍不能治愈、或恶化、或病情反复情况下的转移性皮肤T 淋巴细胞瘤。vorinostat 化学名: N-羟基-N苯基辛二酰胺;英文名: N-hydroxy-N-phenyloctane-diamide

vorinostat 属于组蛋白去乙酰化酶抑制剂类抗肿瘤药物,低浓度( IC50 < 86 nmol·L - 1) 即可以有效抑制组蛋白脱乙酰酶HDAC1 、HDAC2 、HDAC3 和HDAC6 的活性,抑制组蛋白次乙酰化,因而从基因水平调控细胞周期,阻断癌细胞基因复制,并激活其凋亡基因,达到抑制和杀灭癌细胞的效果。但vorinostat 的抗癌机制仍在深入研究之中,其具体作用机制尚不完全清楚[6 - 7 ] 。两项临床试验证明了vorinostat 的安全性和有效性,其中包括107 名接受其他药物治疗后又复发的CTCL 患者。按皮肤损伤改善标准评分等级的判断,接受Zolinza 治疗的患者中30 %有所改善,疗效平均持续168 d。

一些生物学数据已经证明了vorinostat 在皮肤癌，前列腺癌治疗中的有效性。而且近年研究vorinostat 不仅可以单独作为肿瘤治疗药物,还可以与其它抗癌药物联合用药, 减少对正常细胞的'毒性,具有增效作用。可与转录调节因子(如52 杂氮22′2 脱氧胞苷、视黄酸、mRNA 转录抑制剂flavopiridol)[51- 53] 、凋亡受体配体(如阿霉素、长春新碱、依托泊苷、多 烯 紫杉醇)[54- 56]、化疗药物(如抗代谢药吉西他宾、全反式维甲酸) [57,58]以及激酶抑制剂、放射线等联合用药。近年来研究发现vorinostat

还可影响到有丝分裂、DNA 复制和修复以及调控非组蛋白的蛋白质乙酰化程度。但是该药用于临床治疗癌症仍然需要解决一些问题如: 抑制剂对HDAC 酶系的选择识别作用、选择最佳药用剂量、治疗周期以及寻找更多可以促进这种药抑制作用的物质等。毋庸置疑,随着对HDACIs 抗癌机理的深入研究,vorinostat 将会有广阔的应用前景。

伏诺立他目前在国内还没有上市，我们准备仿制该品种，建立该药的质量标准，用建立的标准对原料和制剂进行有关物质和主药含量进行研究。

[采用的研究手段及文献综述]

根据破坏试验的结果，结合伏立诺他合成工艺，建立伏立诺他有关物质检查方法，并对其进行方法学验证。

1.仪器与药品

Waters 996光电二极管阵列检测器，Waters Empower色谱工作站，试药及其中间体均由南京海纳医药科技公司提供

2. 色谱条件的建立

2.1检测波长的选择

取伏立诺他适量,用流动相制成每1ml含15μg的溶液,照分光光度法(中国药典2005年版二部附录Ⅳ A)在200～400 nm波长范围内扫描测定

2.2系统使用性试验

色谱柱:Diamonsil C18 ( 250 mm ×4. 6 mm, 5μm)色谱柱为分析柱;乙腈- 0.1%磷酸溶液(三乙胺调PH3.0)为流动相，不断调节流动相比例，梯度洗脱，流速为1.0 ml ·min- 1 , 检测波长为241nm, 柱温30℃, 进样量: 20μl。

根据合成工艺,伏诺立他成药中可能引入一系列的合成中间体及原料还有杂质，取本品可能带入的杂质、中间体分别加流动相适量溶解;另取杂质中间体及伏立诺他适量,用流动相制成适宜浓度的溶液,精密吸取杂质，中间体与吡非尼酮混合溶液各20 μl,分别进样，考察分离度，理论塔板数，及拖尾因子，再根据具体条件进行调整，选出最适合的条件。

2.3专属性试验

取供试品,进行高温、光照、酸、碱、氧化破坏试验。

热降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,置140℃高温4 h后,用流动相溶解并稀释至刻度; 光降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,用流动相制成每1 ml含吡非尼酮0. 8 mg的溶液,置紫外灯光下48 h;

酸降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加2mol·L - 1盐酸溶液5 ml,放置4 h,用2 mol·L - 1氢氧化钠溶液调至中性,加流动相稀释定容;

碱降解溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加2mol·L - 1氢氧化钠溶液放置4 h,溶液颜色变黄,另加2 mol·L - 1盐酸溶液调至中性,加流动相稀释定容;

氧化破坏溶液的配制:取本品20 mg,置25 ml量瓶中,加过氧化氢5 ml,避光放置4 h,用流动相稀释定容。照高效液相色谱法,取上述各溶液各20μl进样,记录结果，进行分析 2.4线性范围：

精密称取伏立诺他对照品约15 mg,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。分别精密量取贮备液1、2、3、4、5 ml置10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取溶液20μl分别注入色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,由溶液浓度(C) 对峰面积(A)线性回归。

2.5检测限：取空白基线一段,计算其噪音峰高,再将伏立诺他样品溶液用流动相稀释适当浓度进样,使其峰高为噪音峰高的3倍,记录检测限。

2.6精密度试验

2.6.1 进样精密度：取标准曲线项下高、中、低三种浓度的溶液,分别重复进样5 次,以峰面积来考察精密度。

2.6.2中间精密度：选择不同人员,分别测定同一批样品的含量。

2.7重复性试验：分别取同一批样品, 6份,精密称定,照样品测定项下操作,计算含量。 2.8稳定性试验：照标准曲线项下的方法配制高、中、低三种浓度 的溶液,分别于0、1、2、4、6、8 h测定。考察其稳定性

2.9含量测定：取本品适量,精密称定,用流动相制成每1ml含50μg的溶液,作为供试品溶液,精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积;另取经干燥至恒重的伏立诺他对照品适量,同法测定,按外标法以峰面积计算,即得。

2.10有关物质测定：取本品适量,精密称定,用流动相制成每1 ml含0.5mg的溶液,作为供试品溶液;精密量取供试品溶液1 ml,置100 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。精密量取对照溶液20μl,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的10% ～25%;再精密量取供试品溶液和对照溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰,最大单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的1 /2 ( 0.5% ) ,各杂质峰面积总和,不得大于对照溶液主峰面积( 1% )。

参考文献：

【1】胡 杨，陈国华，吴 燕，杨尚彦.伏诺立他的合成[J].中国医药工业杂志，2009，40(7)：481-482.

【2】黄小平，徐江. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂类抗癌药Vorinostat[J].化工中间体，2009，06：11-13.

【3】Sakajiri S, Kumagai T, Kawamata N, et al. Histone deacetylase inhibitors profoundly decrease proliferation of human lymphoid cancer cell lines [J]. Exp Hematol, 2005,33(1): 53-61.

【4】Robert A.Parise, Julianne L.Holleran, Jan H.Beumera, Suresh Ramalingama, Merrill J. Egorin. A liquid chromatography–electrospray ionization tandem mass spectrometric assay for quantitation of the histone deacetylase inhibitor, vorinostat (suberoylanilide hydroxamicacid, SAHA),and its metabolites in human serum[J]. Chromatography B, 840 (2006) 108

❸ 三氟乙酸钠液相分析方法

1、须高pH。前曾述及当pH高于8会融溶“硅胶”的骨干造成伤害，因此 pH高于8的移动相，则不建议使用。若必须使用高 pH 移动相以增进分离效应者，须选用耐高 pH 的层析管。一般的认知，硅胶具高纯度、高质量的官能基化学键结及完善硅醇基的终结处理，都是降低或减少被融溶，即降低对层析管材质的伤害。或是少用“磷酸盐”因为高 pH会促进硅胶的融溶。或是有机相改用 Pyrrolidone 可防止在高 PH的融溶。即使是如此的注意使用，旦常用于高 pH 移动相，层析管寿命会受影响的。
2、须调和盐类的浓度。移动相调和盐类在于提供适切的 pH，若仅为 pH 需求，则些许少量即可。多数注入分析的量大约是在ng/ml至ug/ml范围，如此即使注入了 100ul 作分析，也不过是数百 ng 的量，只要些许于 pKa 值的一个pH 变化量的盐类即够充分。层析管材料被盐类充分布满也是 Buffer 量的考虑，然而，越是更纯的硅胶,越是毋须高 Buffer量的使用。这一点，可由 Figure 4，不同TFA使用量的移动相所获得不同的图峰型，Figure4左边的三种层析管，使用了 0.1% TFA 之图峰型优良。若降低为 0.01%TFA 时，有的图峰则变得不成峰型，以上就是三氟乙酸钠液相的分析方法。

❹ 液相色谱+质谱，对脂质组学进行分析，求助各位

色谱可作为质谱的样品导入装置，并对样品进行初步分离纯化，因此色谱/质谱联用技术可对复杂体系进行分离分析。因为色谱可得到化合物的保留时间，质谱可给出化合物的分子量和结构信息，故对复杂体系或混合物中化合物的鉴别和测定非常有效。气相色谱／质谱联用和液相色谱／质谱联用等已经广泛用于药物分析。

液相色谱/质谱联用，主要用于分析GC/MS不能分析，或热稳定性差，强极性和高分子量的物质，如生物样品（药物与其代谢产物）和生物大分子（肽、蛋白、核酸和多糖）。

简单的说，就是利用HPLC的分离技术，将混合的东西分离成单一的物质，依次进入质谱，打成碎片，然后从物质的结构分析，可以大体判断键的断裂方式，然后通过质荷比对照相应的对照图库大概判断碎片的分子结构，从而来对未知物质做定性，但是质谱并不是百分百的确定结构，要准确的确定物质结构，还要做很多其他的东西，比如核磁H谱C普等。

因质谱需要离子化，所以流动相的要求比较高，常见的钠盐钾盐都不可以用，给你个表参考

❺ 高效液相色谱仪(HPLC)检测水中的多环芳烃的方法

高效液相色谱仪检测水中的多环芳烃;此方法适用范围：仅适用于水中的多环芳烃的检测

取样；取1000mL水样(富集时可根据水质情况适当增减)，加入5g氯化钠和10mL甲醇待净化。净化；SPE柱：WelchromCI8E(500mg/6ml)活化：10ml二氧甲烷、10ml甲醇以及10ml水上样：将处理好的水样加入到SPE柱洗脱：10ml正已烷分三次洗脱,收集洗脱液,60°CN浓缩近干,用乙睛定容至1ml,供HPLC分析色谱条件；试验仪器：APS80-16PLUS高效液相色谱仪色谱柱：APS-C18(250mmx4.6mm,5μm)柱温：20°C进样量：20μl流速：1.0ml/min流动相：甲醇-水采用梯度洗脱：如表1所示

❻ 请问HPLC是做什么的原理操作方法

HPLC是高效液相色谱，英文全称是High Performance Liquid Chromatography。该方法在化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中被用来做重要的分离分析技术。

用途：高效液相色谱更适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛应用于核酸、肽类、内酯、稠环芳烃、高聚物、药物、人体代谢产物、表面活性剂，抗氧化剂、杀虫剂、除莠剂的分析等物质的分析。

原理：高效液相色谱以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析和分离。

操作方法：如下图所示，溶剂贮器中的流动相被泵吸入，经梯度控制器按一定的梯度进行混合然后输出，经测其压力和流量，导入进样阀（器）经保护柱、分离柱后到检测器检测，由数据处理设备处理数据或记录仪记录色谱图，馏分收集器收集馏分，废液瓶收集废液。

(6)美司钠液相有关分析研究方法扩展阅读：

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。

HPLC根据固定相和流动相的成分分为正相色谱和反向色谱。

正相色谱法

采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）。

反相色谱法

一般用非极性固定相（如C18、C8)；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。适用于分离非极性和极性较弱的化合物。RPC在现代液相色谱中应用最为广泛，据统计，它占整个HPLC应用的80%左右。

参考资料：网络-高效液相色谱

❼ 怎样用液相色谱分析1-2-4三氮唑钠含量

怎样用液相色谱分析1-2-4三氮唑钠含量
1，首先必须去进行配制药物溶液前处理的工作。找出该药物的溶解性，探索出该药物的有效溶剂，使该药物能在该溶剂中充分溶解，这是药物溶液配制的前处理必然途径，也是进行高效液相色谱含量分析的首要条件。

2，然后就是根据该药物配制溶液的前处理方法，配制好适当浓度的药物溶液，利用该药物溶液，在紫外-可见分光光度计上进行紫外扫描，找到该药物的最大吸收波长，确立适合的高效液相色谱分析的检测波长。因为它是进行高效液相色谱含量分析的基本条件

3，再是色谱柱的选择：根据药物的极性来选择合适极性的色谱柱类型

4，再是流动相的确立。配制一系列的流动相，考察合适的流动相。

5，再是准确度考察。通过精密度、重复性和重现性的考察来衡量仪器的准确度

6，接着是线性关系考察。配制不同浓度的一系列溶液，进行其溶液的色谱扫描。根据所得的不同浓度下的药物峰面积作为纵坐标（Y轴）、以溶液浓度为横坐标（X轴）进行线性回归，得到其线性图，考察其线性程度，即线性相关系数R=？。考察的目的就是：为了我们在做含量分析时，选择一个合适的浓度进行检测，不至于你配制的待测溶液浓度范围不在线性范围之内，造成测量结果的错误。

7，再是最低检测浓度和检测限的考察。目的是为了考察这种方法的实用性，是否符合痕量分析的要求。

8，再是回收率考察。目的是考察方法的准确性。

9，再是稳定性考察。目的是考察试验方法的时间性，指导我们在分析检测时，建立合适的溶液配制到进样的时间段，保证实验结果的准确性。

❽ 高效液相色谱法检测保健食品中肉碱的含量要怎么检测

高效液相色谱法检测保健食品中肉碱的含量

1范围

建立了高效液相色谱法测定保健食品中肉碱含量的方法。

本法适用于以肉碱为主要原料的保健食品中肉碱的测定。

2原理

用0.5mmol/l盐酸溶液超声提取样品中的肉碱，用反相高效液相色谱法分离。标准样品的保留时间是定性的，外部标准方法是定量的。

3试剂和材料

注：除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1 磷酸氢二钾（K2HPO4）。

3.1.2辛烷磺酸钠(C8H19NaO3S)。

3.1.3 盐酸（HCl）。

3.1.4磷酸（H3PO4）。

3.1.5硅藻土（SiO2）：化学纯。

3.1.6乙腈(C2H3N)：色谱纯度。

3.2 试剂配制

3.2.1盐酸溶液（0.50 mmol/L）：吸收4.2 ml盐酸，用水稀释，体积为100 ml。然后取1mL上述溶液，用水稀释，定容至1L·L~(-1)。

3.2.2缓冲液：分别称取磷酸氢二钾8.7g，辛烷磺酸钠0.4325g，溶于水，稀释至1L，用磷酸调节至pH 2.5。

3.3 标准品

肉碱（C7H15NO3）：纯度≥98%或经国家认证认可的标准物质..

3.4 标准溶液配制

3.4.1肉碱标准储备液（1.0 mg/ml）：肉碱标准品25 mg（精确至0.1 mg）精密称取25 ml容量瓶中，溶于盐酸溶液中，定容至刻度，摇匀。

3.4.2肉碱标准工作液：标准肉碱标准保留液在5 mL瓶中，用盐酸稀释至规模化，经0.50 mL、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL准确吸收，得到0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.40 mg/mL、0.60 mg/mL、0.80 mg/mL、1.0mg/mL的标准工作液。

4仪器

4.1高效液相色谱法：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。

4.2平衡：灵敏度为0.1mg和0.01mg

4.3 超声波提取器。

5分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 试样处理

5.1.1.1 固体试样

样品粉碎混合均匀称取0.1g~2g（精确至0.001g）（含待测组分约5mg~50mg）。将盐酸溶液加入50ml容量瓶中，超声提取10min，冷却，用盐酸溶液稀释至刻度，混匀，过滤，计数一次滤液毫升数，收集滤液，经0.45um水相膜过滤，取连续滤液进行检测。

5.1.1.2 软胶囊试样

样品被切开、挤压和混合，重量为0.1g≤2g(精确到0.001g)，加入相同量的硅藻土，进行均匀分散研究，并说其中一部分(精确到0.001g，约5 mg~50 mg)，被测组分用塞状三角瓶转移到250 ml，吸收盐酸溶液50 ml，加入三角瓶，称重，填充超声萃取10 min，冷却，与盐酸溶液混合，在毫升中丢弃初始滤液，收集滤液，经过0.45μm的水相滤膜，取滤液进行测量。

5.1.1.3 液体试样

精密测量：1毫升～5毫升（含约5毫克～50毫克的待测组分），35毫升盐酸溶液加入50毫升容量瓶，超声提取10分钟，冷却，用盐酸溶液稀释，混合，过滤，丢弃一级滤液毫升，收集滤液，通过0.45微米水相滤膜，取连续滤液进行测定。

5.1.2 稀释

根据样品中肉碱的含量，将溶液中的肉碱稀释至0.10mg/mL~1.0mg/mL。用盐酸溶液。

5.2 色谱参考条件

5.2.1柱：C18柱：4.6*250 mm，5微米或同性能柱。

5.2.2流动相：缓冲溶液90 10。

5.2.3流量：0.8ml/min。

5.2.4 检测波长：210nm。

5.2.5 进样量：20μL。

5.3 标准曲线的制作

将肉碱标准工作液(3.4.2)分别从低浓度到高浓度注入高效液相色谱(HPLC)中，并测定相应的峰面积。以标准工作液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线

5.4待测溶液的测定

在相同的色谱条件下，将待测液（5.1.1.1，5.1.1.2，5.1.1.3，5.2.1）注入高效液相色谱法按保留时间定性测定峰面积，按标准曲线计算待测溶液中肉碱的浓度

6 分析结果的表述

试样中肉碱含量按式（1）计算：

X—固体样品中肉碱含量为g/100g，液体样品中肉碱含量为g/100ml。

根据每毫升毫克标准曲线(毫克/毫升)计算待测溶液中肉碱的浓度。

V—试样的稀释体积，单位为毫升（ml）；

M/L-取样质量，以克(G)为单位；抽样量，以毫升(毫升)为单位；

F——稀释倍数；

100——单位转换；

1000——单位转换。