液相色谱提高分析速度的方法

① 与普通的色谱法相比高效液相色谱法是如何提高分离速度的

提高分离速度是由于对流动相加压，使流动相流速加快。提高分离度是由于采用粒径小的固定相，使柱效提高。

② 如何提高液相的分离度

这个需要试一下。
首先，如果两个物质在液相上的保留时间非常接近，可以调整有机相比例。如果减少有机相，两个峰可能会被拉开。也可以考虑设置梯度方法，会让峰型跑得比较好，然后让两个物质分开。
然后，也可以考虑调整水相溶液的pH值，这个要看物质的酸碱度。如果两个都是中性物质，那么调整pH值意义就不打了。

如果都不行，只能考虑更换色谱柱。比如反相色谱柱，C18可以更换成C8柱，苯基柱，然后看看情况。

③ 在液相色谱中，为了提高分离效率，缩短分析时间，应采用什么装置

柱温箱，我这几天温度提高，保留时间提前了5分钟左右
还有可以加大流速，也可以缩短分离时间

④ 第二十章：高效液相色谱法

与经典色谱比较优点：

与气相色谱比较：

按固定相聚集状态：液液色谱法、液固色谱法

按分离机制：分配、吸附、离子交换、分子排阻四类基本机制

其他分离机制：亲和色谱法、手性色谱法、胶束色谱法、电色谱法、生物色谱法

目前最常用固定相是化学键和相，称为化学键和色谱法

键合相：通过化学反应将有机基团键合在载体表面构成的固定相

正相NP、反相RP

采用氰基、氨基等作为固定相，非极性或弱极性溶剂为流动相。

分离极性至中等极性分子行化合物

分离机制一般认为是分配，也有认为是吸附如形成氢键的

一般规律：剂型强的组分容量因子k大，后出。流动相极性增强洗脱能力增强

十八烷基硅烷、辛烷基硅烷等，有时也用弱极性或中等极性

流动相以水作为基础溶剂再加一定量极性调整剂

分离机制有争论，多种理论模型

影响组分保留行为的主要因素：

分离非极性至中等极性组分

离子对色谱法（IPC）分正相和反相，正相已经少用。

反相离子对色谱法（RP-IPC）是把离子对试剂加入到含水流动相中，使被分析组分离子在流动相中与离子对试剂的反离子生成不带电荷的中性离子，使组分k增加，用于分离可离子化或离子型化合物

用于生物碱类、儿茶酚胺类、有机酸类、维生素类、抗生素类药物分析

离子色谱法：将离子交换色谱与电导检测器相结合分析各种离子的方法

可以分析无机和有机阴阳离子，氨基酸、糖类、DNA和RNA的降解产物

分为抑制型（双柱型）、非抑制型（单柱型）

对于X ^- 离子：

双柱型使用两根离子交换柱，一根为分离柱，填有低交换容量的阴离子交换剂，另一根为抑制住，填有高交换容量的阳离子交换剂，两者串联。进入分离柱的组分X ^- 按正常离子交换色谱分离，在进入抑制柱，除去组分中的OH ^- 从而使本底电导率降低，利于较大电导率HX的检测。

非抑制型可使用更低交换容量的固定相，浓度很低、电导率很低的流动相，这样本底电导率低，试样离子被洗脱后可直接被电导检测器检测

利用手性固定相（CSP）、手性流动相添加剂（CMPA）分离分析手性化合物的对映异构体的色谱方法。还有间接法（加入手性试剂使一对对映体转变为非对映体用常规方法分离）。

环糊精（CD）也是一种手性选择剂，分离机制主要是由于分子内熟睡空腔的动销和多手性中心的作用，如果对映体能被空腔紧密包络，而且与CD分子外沿的仲醇基作用，则被固定相保留，两对映体与CD作用程度不同从而分离。

亲和色谱法（AC）利用或模拟生物分子之间的专一性作用，从复杂试样中分离和分析能产生转移性亲和作用的物质的一种色谱方法。选择性最高。

要求：颗粒细且均匀、传质快、机械强度高、耐高压，化学稳定性好

液固：全多空硅胶、高庚子多空微球

应用最多的是化学键和相

要求：化学稳定性好；适宜溶解度；与检测器相适应；纯度高；粘度低

使用前经微孔滤膜过滤，除去固体颗粒，还要脱气处理

分离方程式：

选择合适的溶剂强度使组分k在最佳范围内，选择合适种类的溶剂改善选择性使α增大获得良好分离度R>1.5

在化学键和色谱中溶剂洗脱能力即溶剂强度直接与它的极性相关。

溶剂极性用溶剂极性参数表示 ，用以表示正相色谱中洗脱能力

反相键合相色谱溶剂强度用另一强度因子S表示

混合溶剂可以用P或S的加权平均表示

HPLC速率理论方程：

尽可能减小柱外死体积

（349页图）

高效液相色谱仪一般由高压输液系统、进样系统、色谱柱分离系统、检测系统和数据处理系统组成

分类：

要求：灵敏度高、噪声低、线性范围宽、重复性好、适用范围广

紫外检测器UVD：不破坏样品，只能检测有紫外吸收物质、对流动相有限制

荧光检测器FD：灵敏度更高，只适用于产生荧光物质，体内药物分析常用

电化学检测器ECD：极谱、库仑、安培、电导。电导用于离子检测，安培应用广泛，灵敏度高适用于痕量组分分析，凡是具有氧化还原活性的都能进行检测

蒸发光散射检测器ELSD：适用于挥发性低于流动相的组分，用于糖类、高级脂肪酸、磷脂、维生素、氨基酸、三酰甘油及甾体；对各种物质几乎有相同响应；但是灵敏度低，流动相必须是挥发性不能含有缓冲盐。

仪器自动化：

采集和分析色谱数据：

中心计算机控制系统：

超高效液相色谱法UPLC：借助于HPLC理论及原理，利用小颗粒固定相，非常低的系统体积及快速检测手段等技术，使分离度、分析速度、检测灵敏度及色谱峰容量大大提高，从而全面提升了液相色谱的分离分析效能。

操作条件比较（355表）

优点：分析速度快；分离效能高；灵敏度高——小颗粒技术和整体化仪器设计

van Deemter方程，可以发现固定相粒度越小，分离度越大。同时粒度越小，最佳流动相线速度越大，并有更宽优化范围，因此降低粒度可以提高分析速度。但是会增加系统柱压差，受到固定相机械强度和色谱仪系统耐压性限制

常用外标和内标，少用归一化。对药品中杂质含量测定常用主成分自身对照法

主成分对照法分为不加校正因子和加校正因子两种：

注意进行色谱系统适用性试验：理论塔板数、分离度、拖尾因子和重复性

⑤ 如何提高液相色谱分离度

液相色谱法中分离度的提高的几种方法:
1.改变有机改性剂的种类和比例
2.改变流动相的pH值
3.减小流速
4.降低柱温
5.减少进样量
6选择粒径小的色谱柱
7.选择较长的色谱柱.

⑥ 提高液相色谱中柱效的有效途径有哪些

提高液相色谱中柱效的有效途径有：减小填料粒径，增加色谱柱长，使用尽量大小均一、外型规则的填料，使用合适的流速，使用合适的流动相组成，使用合适的固定相。

高效液相色谱的工作方式：

在柱层析中，溶剂在重力作用下滴入装有吸附剂的色谱柱中。高效液相色谱是一种改进的柱色谱。在高达400个大气压的高压下，泵输送溶剂通过色谱柱。柱吸附剂或固定相通常是由固体颗粒（如二氧化硅或聚合物）制成的颗粒材料。

与柱色谱相比，利用泵输送，不仅可以快速分析，而且可以使用更小的颗粒作为柱填料。粒子越小，其表面积更大，通过固定相与流动相及样品组分之间的相互作用，可以更好地实现混合物中各组分分离。流动相通常是溶剂（如水、乙腈、甲醇）的混合物。

混合物的组分由于与吸收剂颗粒的相互作用的程度不同而彼此分离，在此过程中不同组分的洗脱速率不同，从而导致组分流出色谱柱时分离。与柱色谱相比，高效液相色谱自动化程度高，灵敏度高。

(6)液相色谱提高分析速度的方法扩展阅读：

液相色谱系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数；

在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。

⑦ 在液相色谱中，提高柱效的途径有哪些其中最有效的途径是什么

(1)降低移动相的流速，但会使分析时间延长。

(2)减少固定相的量，但色谱柱中样品的负载量也随之减小。

(3)减小固定相的颗粒度，但不能过分，过分后色谱柱的渗透率也会减小。

(4)选用低粘度的移动相，以利于快速传质，但却不利于多组份分析。

(5)适当提高柱温，可降低移动相的粘度，但柱效和分离度也随之降低。

(6)尽量减小停滞移动相的体积，但却加快了移动相的流速。

式中tR为色谱峰的保留时间;σ2是以时间为单位测量色谱峰的偏差;a是和峰高(从测峰宽的基线量起)有关的常数,ωb是峰宽,表示由色谱峰顶点与色谱峰两侧拐点处做切线与峰底基线相交两点间的距离。

⑧ 在液相色谱中,提高柱效能的途径有哪些

转载：《分析测试网络网》
提高液相色谱中柱效的有效途径有哪些?
问题
1.能否根据理论塔板数来判断分离的可能性?为什么?
2.色谱定量分析中为什么要用校正因子?在什么情况下可以不用?
3.什么叫梯度洗脱?它与气相色谱中程序升温有何异同?
4.提高液相色谱中柱效的有效途径有哪些?
5.应用原子吸收光谱法进行定量分析的依据是什么?进行定量分析有哪些方法?
答：
相同点：都是通过逐渐改变分析条件,在保证物质分离度的前提下,让难流出的物质加速流出,以提高分析效率的方法；不同点,程序升温只能从低柱温逐步升高,只能改变升温的速率,而梯度洗脱可以使用多种溶剂,采用复杂的比例变化来达到满意的分离效果,更灵活 4,应该是：减小填料粒径,增加色谱柱长,使用尽量大小均一、外型规则的填料,使用合适的流速,使用合适的流动相组成,使用合适的固定相.1,不能依靠理论塔板数来判断分离的可能,理论塔板数描述的是液相色谱柱柱效,塔板数越高,说明色谱柱的分离性能越好（一个宽泛的概念）,但具体到某些物质能否互相分离,应该用分离度来描述,两个物质的分离度大于1.5,说明能互相分离,否则就不能,这个跟理论塔板数毫无关系
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⑨ 高效液相色谱中怎样改善条件达到分离度要求

（1）选择合适的流动相，使其流经色谱柱时，受到的阻力减小，从而能迅速通过色谱柱，且必须对载液加高压。

（2）可选择合适的固定相和流动相以达到最佳分离效果。高效液相色的分离效果比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

（3）定时清洗柱子。高效液相色谱的柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物。但是要定时清洗柱子从而分离度。

(9)液相色谱提高分析速度的方法扩展阅读

高效液相色谱法的特点：

高效液相色谱法有“四高一广”的特点：

（1）高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

（2）高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

（3）高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

（4）高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。

（5）应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

（6）柱子可反复使用：用一根柱子可分离不同化合物

（7）样品量少、容易回收：样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。

参考资料来源

网络-高效液相色谱

网络-分离度

⑩ 在液相色谱分析中，优化分离度最方便有效的手段是什么

要改善的条件很多，介绍几种供参考 1、色谱柱，色谱柱使用时间长了，柱效会降低，会影响到分离度的，改善方法是更换新的色谱柱。如果已经是新的色谱柱了，分离度还不好，那可以采用更长一些的色谱柱，也会增加分离度。