‘壹’ 常见的色谱分离方法有哪些
常用的蛋白质纯化方法有离子交换色谱、亲和色谱、电泳、疏水色谱等等 离子交换色谱:蛋白质和氨基酸一样会两性解离,所带电荷决定于溶液pH。pH小于pI时蛋白质带正电,pH大于pI时蛋白质带负电。不同蛋白质等电点的蛋白质在同一个溶液中,表面电荷情况不同。离子交换就是利用不同蛋白质在同一溶液中表面电荷的差异来实现分离的。 亲和色谱:生物大分子有一个特性,某些分子或基因对它们有特异性很强的吸附作用。如镍柱中Ni可以与His标签的蛋白结合,这种只针对一种或一类物质的吸附就是亲和色谱的原理。 电泳:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS能断裂分子内和分子间氢键,破坏蛋白质的二级和三级结构,强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂,蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中, 与SDS分子按比例结合,形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物,这种复合物由于结合大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块,从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异,由于SDS与蛋白质的结合是按重量成比例的,因此在进行电泳时,蛋白质分子的迁移速度取决于分子大小。 疏水色谱:疏水色谱基于蛋白质表面的疏水区与介质疏水配体间的相互作用...
‘贰’ 什么是色谱分析法色谱分离的原理是什么
色谱分析法
chromatography
基于 混合 物 各组 分在体系中 两相 的物 理化学性能差异(如吸附、分配差异等)而进行分离和分析的方法。国际公认俄国M.C.茨维特为色谱法的创始人。
色谱法体系中的两相作相对运动时,通常其中一个相是固定不动的 ,称为固定相 ;另一相是移动的 , 称为流动相。在色谱分析过程中,物质的迁移速度取决于它们与固定相和流动相的相对作用力。溶质和两相的吸引力是分子间的作用力,包括色散力、诱导效应、场间效应、氢键力和路易斯酸碱相互作用。对于离子,还有离子间的静电吸引力。被较强吸引在固定相上的溶质相对滞后于较强地吸引在流动相中的溶质,随着移动的反复进行与多次分配,使混合物中的各组分得到分离。
色谱分析法的分类比较复杂。根据流动相和固定相的不同,色谱法分为气相色谱法和液相色谱法。①气相色谱法的流动相是气体 ,又可分为 : 气固色谱法 ,其流动相是气体,固定相为固体;气液色谱法,其流动相是气体,固定相是涂在惰性固体上的液体。②液相色谱法的流动相是液体,又可分为?液固色谱法,其流动相是液体,固定相是固体;②液液色谱法,其流动相和固定相均是液体。按吸附剂及其使用形式可分为柱色谱、纸色谱和薄层色谱。按吸附力可分为吸附色谱、离子交换色谱、分配色谱和凝胶渗透色谱。按色谱操作终止的方法可分为展开色谱和洗脱色谱。按进样方法可分为区带色谱、迎头色谱和顶替色谱。
经色谱分离出的各组分,与已知标准样品对照进行定性分析。现代化的色谱-质谱联用或色谱-光谱联用仪器,配备有丰富的谱图库和微处理机。色谱柱流出的组分直接送入质谱和光谱仪进行定性鉴定和数据的定量处理。开发智能化色谱分析是发展的主要方向。
色谱法的特点是?①分离效率高。可分离性质十分相近的物质,可将含有上百种组分的复杂混合物进行分离。②分离速度快。几分钟到几十分钟就能完成一次复杂物质的分离操作。③灵敏度高。能检测含量在10-12克以下的物质。④可进行大规模的纯物质制备。
色谱法在化工、石油、生物化学、医药卫生、环境保护、食品检验、法医检验、农业等各个领域都有广泛的应用。在各种色谱法中,以气液色谱法和液固色谱法应用最广。气相色谱法分离中、小分子化合物比较理想。中等大小的分子可用液液色谱和液固色谱分离。离子交换色谱一般用于有离子基团的物质。分子尺寸再大时,用凝胶渗透色谱分离。薄层色谱和纸色谱法的分析速度快、方便、成本低,柱色谱比薄层色谱和纸色谱具有更高的分辨能力。
‘叁’ 11种化学物质分离方法
没有11种分离方法,大多数都是在萃取、膜分离、过滤、层析、盐析等分离方法的分支。
1、萃取
萃取,又称溶剂萃取或液液萃取,亦称抽提,是利用系统中组分在溶剂中有不同的溶解度来分离混合物的单元操作。即,是利用物质在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使溶质物质从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中的方法。
萃取是有机化学实验室中用来提纯和纯化化合物的手段之一。通过萃取,能从固体或液体混合物中提取出所需要的物质。
2、膜分离方法
一种利用薄膜的半渗透性而分离溶液混合物的化学分离方法,能从气态或液态混合物中分离出某些组分。
所用的膜既可以是具有一定规格的微孔,有如分子筛,让小分子通过微孔,而大分子则截流,从而使混合物得以分离;也可以是无微孔的高分子膜,混合物中的一些组分首先溶解在膜表面,然后扩散通过膜层,最后在另一侧蒸发,从而达到分离的目的。
3、过滤
在推动力或者其他外力作用下悬浮液(或含固体颗粒发热气体)中的液体(或气体)透过介质,固体颗粒及其他物质被过滤介质截留,从而使固体及其他物质与液体(或气体)分离的操作。
4、层析
利用各组分物理性质的不同,将多组分混合物进行分离及测定的方法。有吸附层析、分配层析两种。一般用于有机化合物、金属离子、氨基酸等的分析。层析利用物质在固定相与流动相之间不同的分配比例,达到分离目的的技术。
层析对生物大分子如蛋白质和核酸等复杂的有机物的混合物的分离分析有极高的分辨力。
5、盐析
向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后,可以降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析,是物理变化,可复原。
向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐,可以使蛋白质性质发生改变而凝聚,进而从溶液中析出,这种作用叫作变性,性质改变,是化学反应,无法复原。
利用高浓度中性盐使蛋白质发生沉淀;蛋白质的溶解度(S)不同,用于沉淀的盐浓度不同。
‘肆’ 分离分析化学 用一种或一种以上的分离分析方法设计一种样品的分离分析方案
固相萃取法分离:采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、净化,是一种包括液相和固相的物理萃取过程;也可以将其近似地看作一种简单的色谱过程。
液液萃取法分离:根据相似相溶原理,将被测物从另一个液相中提取出来,比如用正己烷从水相中提取挥发性有机物。
‘伍’ 分析化学中常用的分离和富集方法有哪些
通常分离和富集方法在分析化学中是共生的,如果要分开的话,就会有重复。
常用的经典分离方法有:沉淀分离、溶剂萃取分离、离子交换分离、层析分离、挥发分离、蒸馏分离等,新型分离方法有固相萃取分离、膜分离等。
常见的富集方法有:沉淀富集、液液萃取富集、交换富集、浓缩蒸发富集等,新型的富集方法有固相萃取富集、固相微萃取富集、分散萃取富集等。
‘陆’ 分析化学中常用的分离方法,除仪器分离法外,还有哪些这些方法本质都是%
萃取是根据液体不同的溶剂中溶解度不同,纸层析法(虹吸)也是根据物质在同一溶剂中溶剂度不同,流动的快慢分离,还有就是倾析法,适用于大块物质不溶于某溶剂.
‘柒’ 什么是体内药物分析中多组分混合物最重要的分离分析方法
什么是体内药物分析中多组分混合物最重要的分离分析方法
体内药物分析是由药物分析学派生出来的一门学科。它是通过分析人或动物体液及各组织器官中药物及其代谢物浓度,了解药物在体内数量和质量的变化,获得药物代谢动力学的各种参数和转变,以及代谢的方式、途径等信息,从而有助于药物的研究、临床合理应用等。
‘捌’ 基因的分离定律的分析方法
通常采用“棋盘法”。例如让基因型都为Dd的两颗豌豆植株亲本杂交,那么这两个亲本产生的后代出现的基因型的概率分布如下图所示:
‘玖’ 氨基酸的分离分析方法常有有哪些
如果是两个氨基酸的保留时间距离太近,那么只能调整液相条件了。
比如调整流动相比例,或者是梯度比例,把两个氨基酸拉开。
也可以适当调整衍生程序。
虽然衍生程序不会对氨基酸的保留时间有影响,不过会对它的信号产生影响。
如果这两种氨基酸的峰高有所下降,或许分离度也可以达到要求。
还有就是注意峰型。
衍生化程序很容易损坏色谱柱,超高效色谱的压力又高,色谱柱很容易损毁。
如果峰型不好,建议用纯乙腈低流速反冲色谱柱。
或者是更换新色谱柱。
‘拾’ 化学中分析和分离两个概念的区别与联系
分离是利用混合物中各组分在物理性质或化学性质上的差异,通过适当的装置或方法,使各组分分配至不同的空间区域或在不同的时间依次分配至同一空间区域的过程。分析化学是开发分析物质成分、结构的方法,使化学成分得以定性和定量,化学结构得以确定。
区别:
1、目的不同
化学分析是确定物质的结构,分离是从物质中分离相关物质。
2、特点不同
化学分析是确定成分的含量,分离是将成分分离,不用确定含量。
3、方法不同
分析法常使用如电泳、色谱法、场流分级等方法。分离:盐析、萃取分离法(包括溶剂萃取、胶团萃取、双水相萃取。