讨论固定组织的研究方法

㈠ 组织固定的常用方法有哪些

灌流固定法
此法是经血管途径，将固定液灌注到欲固定的器官内，使生活的细胞在原位及时迅速固定，取下组织之后再浸入相同的固定液内继续固定。

㈡ 如何从固定组织中提取基因组DNA

动植物样品的采集及DNA 样品的提取
1 动物样品的采集及处理方法
遗传学数据在野生动物和圈养动物的保护和管理中变得日益重要。在本文中，我们总结了
一些能简便而有效地获得样品及数据的方法。
我们在采集样品之前，最好对将要进行的遗传学分析有所了解。然而，采集者并非都是研
究者，当采集地与实验室有相当距离时，采集者常常要保存好样品直到有合适的接受者或存放
地，这就要求采集者应具备一定的经验。
首先，所有样品均应以个体序号进行标注，并且应写上种名、性别、采样者姓名以及采集
日期，越详尽越好，以便同一个体的不同类数据可以相互引用，另外，地理来源的标注也很重
要，需要注明。对于野外捕获的动物，有条件者最好在地图上标明捕获地及其经纬度。对圈养
动物的每个野外捕获种源都要有同样的记录和详尽的谱系图，因为谱系图可用于计算近交系数。
总之，背景资料越详细越好，即使不能得到这里所列的全部信息，也要尽可能详尽。
l．1 样品的测量方法
在一定数量的分类群中采用的标准测量方法可用于以下四个方面：
（1）分类学上：一套理想的测量方法应能大致上重建机体每个主要硬件部分的形状和大小。
（2）不对称性分析：机体各部分的起伏不对称，也许表明进化过程在一定程度上正在变得
不稳定，这可能是环境压力或近交的结果。测量不对称时机体左右两部分均应考虑在内。
（3）遗传变异：在科级水平上，如果对同一年龄的个体采用同样的测量方法，就有可能对
所选特征中的遗传成分变异进行粗略的估计。虽然并非总是能做到这样，但能使遗传学家对所
选特征（如生殖特征方面遗传变异的任何丢失）进行监视。
（4）生理检测或记录：采用标准测量方法得到的记录，也许会有助于与用其他手段得到的
数据联系起来分析。例如，如果有了精子形态的记录，或是特殊寄生物的感染记录，遗传学家
就能因此寻找在不同群体中这些因素与变异水平的相关性。
1．2 组织样品的采集和保存
表7-1 列出了常用的组织在遗传学研究中的用途。下面详细给出针对不同研究目的的适当
方法。当然，每个实验室都有各自习惯的组织处理方法，因此，本文仅给出快速保存的有关
要求，但对每种组织的可用性都有所评述，以便在用途有冲突时，能对潜在数据的可能
62 遗传多样性研究的原理与方法
用作出迅速判断。
表7-l 各种组织材料在遗传学研究中的用途
注：表中数字代表正文中叙述的方法。数字“1”即代表正文7．1．2．1 中的方法，数字“2”即代表正文7．1．2．2
中的方法。其余依此类推。
使用肿瘤、毛发及精子样品，保存时应特别注意。使用细胞培养样品可减少对活体或新杀动
物的依赖，如果培养物来源于肿瘤组织细胞，则可大量减少对同种动物组织的进一步需求。组织
材料必须在数小时内送到有关实验室或用于其他的细胞培养。如果已经知道DNA 序列的一小部分，
就可利用PCR 技术从很少一部分组织中扩增DNA，从而使极其稀少的样品（如一根毛发或单个精
子）具有更高的利用价值和更大的可信度。
组织必须取自活体动物或死后1～2 分钟内的动物，并且要快速保存起来，除非出现下述情
况：在野外条件或是匆忙安排的活体取样，因此没有时间同实验室联系。此时要有目的地扩大采
集和储存量。如果已经详细知道样品的确切用途，则有时条件可以放宽。例如，对血液样品来说，
有些酶是不要求立即冻存的。
每一种组织的制备和保存方法均列在表7-1 中，表中同时列出了每种样品的用途。
快速冻存时样品可放人液氮、干冰中或直接放入－70℃冰箱。冻存样品可在—70℃液氮、冰
箱、干冰或－20℃冰箱中保存和运输。样品冻存及运输均以放入液氮中效果较好。非冻结冰箱是
不能用的。
1．2．l 用于染色体研究的软组织的处理
室温下将全部或部分样品浸入0．9％的生理盐水中，在数分钟内将样品送至实验室，最迟也
要在1～2 小时之内送到。
研究染色体能看到有丝分裂和减数分裂，从而了解有关染色体倒位等现象。染色体倒位会影
响到受精和遗传重组，可能的同性个体应从染色体方面进行检查，但对哺乳动物来说，通常不需
要研究同性别的染色体。
1．2．2 用于成纤维细胞培养的组织的处理
通常来源于幼体动物的组织用于细胞培养较好。在一个个体中，癌组织和肺组织是最好的，
但其他软组织也可以用。
细胞培养常用的是新鲜组织，但捕杀几天后的动物组织仍能用来培养。总之，样品越快到实
验室，成功的可能性就越大。
如果取样时需切开活体动物的皮肤，则应当在无菌的条件下进行。对细胞培养来说，无
第7 章 动植物样品的采集及DNA 样品的提取 63
菌条件下进行进一步的处理也是很有必要的，而在野外这是难以做到的。因此，一个不透
风的封闭空间以及面具、手套是很有用的，至少操作人员应离开工作台面远一些。所有的
台面、试剂瓶、手套、仪器等使用前要用70％的酒精消毒。所用的试剂应是新鲜的，

㈢ 组织行为学研究的具体方法有哪几种

1、观察法

科学的观察具有目的性和计划性、系统性和可重复性。常见的观察方法有：核对清单法；级别量表法；记叙性描述。观察一般利用眼睛、耳朵等感觉器官去感知观察对象。由于人的感觉器官具有一定的局限性，观察者往往要借助各种现代化的仪器和手段，如照相机、录音机、显微录像机等来辅助观察。

2、调查法

调查法是科学探究常用的方法之一，调查时要明确调查目的和调查对象，制定合理的调查方案，如实记录，对结果进行整理和分析，有时还要用数学方法进行统计。常用的调查方法有普查法和抽样法等。

调查法的主要特点是，以问题的方式要求被调查者针对问题进行陈述的方法。根据研究的需要，可以向被调查者本人作调查，也可以向熟悉被调查者的人作调查。调查法可以分为书面调查和口头调查两种。

调查法能够同时收集到大量的资料，使用方便，并且效率高。

3、实验法

实验法是一种按照某种因果假设设计的，在高度控制的条件下，通过人为操纵某些因素，以检定两现象之间是否存在着一定因果联系的研究方法。作为一种特定的研究方式，实验法涉及三对基本要素：自变量与因变量；前测与后测；实验组与控制组。

4、测验法

通过心理和教育测验，对被测的心理现象或心理品质定量分析，推测人的心理特点。

例如常用的心理测验有：能力测验、品格测验、智力测验、个体测验、团体测验等。在管理心理学中的研究中，心理测验常常被作为人员考核、员工选拔、人事安置的一种工具。

5、各案研究法

研究者选择一个或几个场景为对象，系统地收集数据和资料，进行深入地研究，用以探讨某一现象在实际生活环境下的状况。适合当现象与实际环境边界不清而且不容易区分，或者研究者无法设计准确、直接又具系统性控制的变量的时候，回答“如何改变”、“为什么变成这样”及“结果如何”等研究问题。

同时包含了特有的设计逻辑、特定的资料搜集和独特的资料分析方法。可采用实地观察行为，也可通过研究文件来获取资料。研究更多偏向定性，在资料搜集和资料分析上具有特色，包括依赖多重证据来源,不同资料证据必须能在三角检验的方式下收敛，并得到相同结论；

通常有事先发展的理论命题或问题界定，以指引资料搜集的方向与资料分析的焦点，着重当时事件的检视，不介入事件的操控，可以保留生活事件的整体性，发现有意义的特征。

相对于其他研究方法，能够对案例进行厚实的描述和系统的理解，对动态的相互作用过程与所处的情境脉络加以掌握，可以获得一个较全面与整体的观点。

(3)讨论固定组织的研究方法扩展阅读

组织行为学是一门多学科、多层次相交叉的边缘性学科，又是具有两重性和应用性的学科。

边缘性表现为多学科相交叉性和多层次相交切性；两重性表现为组织行为学既具有自然属性，又具有社会属性；应用性表现为组织行为学研究的直接目的在于联系组织管理者工作实际，提高其工作能力，提高组织的工作绩效。

表现：组织行为学既有组织中人的心理与行为的一般规律性这种自然属性，又具有特殊规律性这种社会属性。这种两重性主要由多学科性、人本身的两重性和管理的两重性决定的。

是多学科性决定的。是由作为研究对象的人本身的两重性所决定的。是由管理的两重性所决定。

应用性表现：组织行为学与心理学、社会学和人类学等理论性科学不同，它属于应用性科学。它在应用理论科学原理的基础上，探索和揭示组织中人的心理与行为规律性，在掌握这些规律性后还要进一步研究评价和分析人的心理与行为的方法。

掌握保持积极行为，改变消极行为的具体技术和措施，它的直接目的是紧密联系组织管理者的工作实际，提高其工作能力，提高组织的工作绩效。

㈣ 组织和细胞的固定的方法有哪些

组织和细胞的固定的方法，浸润法
浸润法是组织化学和免疫
组织化学常用的固定方法，一次要处理许多组织样品时也多用此法。
预先需估计固定剂的用量，并在取材前配好固定液，分装于小容器内，在容器上标记组别和取材时间。容器内放人记录组织类型的纸条，以便包埋时辨认。固定液的用量应是样品的40倍，以保证组织充分固定。固定时间可根据所选固定液和组织类型而定。
若进行酶组织化学染色，应在4℃短时间固定，固定时间长会导致酶活性减弱，甚至消失。
可以到生物帮详细的了解下，干细胞专用培养基
http://doc.bio1000.com/show-3439.html

㈤ 组织固定的意义是什么

组织经一系列的处理后，就必须进行固定，当然有的组织是先固定，再进行处理，然后再固定。固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是，保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构，而从免疫组化技术的角度。

固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质。

以保持组织的固有形态和结构；更重要的是保持组织或细胞的抗原性，不但要使抗原不导致失活，而且不使抗原发生弥散的现象，才能在免疫组化染色时，不产生过深的背景，影响对阳性物的判断。

目的

能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。细菌无处不存在，它们随时都可污染腐蚀未经处理的组织。固定液可以固定任何蛋白质。

凡有生命的东西，都由蛋白质组成，蛋白质被固定，生命就停止，细菌也就失去了活力。另者，在日常生活中，人们常可碰到这样的问题，一块肉不经处理放了几天后就会变质，除了细菌参与外，其本身也是很重要的。

㈥ 研究活细胞或组织最好的方法是

1(常用光镜标本制备技术

切片标本的制备。这是最常用的方法。应用光学显微镜观察机体各部的微细结构时，首先应把所有要观察的材料制成薄片，最基本的就是切片方法，其中石蜡切片更为常用。其制备程序大致如下:

(1)取材与固定。将所要观察的人体或动物的新鲜材料切成适当的小块，立即浸入固定液(如甲醛溶液等)中进行固定，防止离体后结构发生变化，使其尽可能保持活体时的结构状态。

(2)脱水与包埋。为了使石蜡能浸入组织内，把固定好的材料用乙醇等脱水，经二甲苯透明后，再浸入加温溶化的石蜡中浸透包埋使组织块变硬。

(3)切片与染色。将包埋的组织蜡块，用切片机切成5-10μm左右的薄片，贴在载玻片上，脱蜡后进行染色。最常用的染色法是苏木精和伊红染色，简称HE染色。

(4)封固。在切片上滴加中性树胶，用盖玻片进行封固，保存备用。

在制作较硬组织(如骨组织等)或较大组织器官(如眼球)等切片，可用火棉胶代替石蜡进行浸透包埋，再进行染色。为了较好地保存细胞内酶的活性 ，可选用冰冻切片，将组织在低温条件下快速冻结，直接切片，进行染色。

2(涂片、铺片、磨片标本的制备

血液等液体材料，可直接在玻片上涂片，干燥后再进行固定和染色。疏松结缔组织和肠系膜等薄层组织，可在玻片撕开展平，制成铺片，待干燥后进行固定和染色。骨和牙等坚硬组织除用酸(稀硝酸等)脱钙后再按常规制成切片外，还可直接研磨成薄的磨片进行染色观察。

3(组织化学和免疫组织化学方法

组织化学与细胞化学是应用物理、化学和免疫学方法，对组织、细胞内某些化学成分的定性、定位和定量进行研究，从而探讨与其相关的机能活动。

(1)组织化学。其原理是在组织切片上或被取材料上，加某种试剂，使它与组织或细胞内某些物质起化学反应，形成最终反应产物。光镜组织化学要求其最终产物是有色的沉着物;电镜细胞化学要求其最终产物是重金属沉着物。观察其沉着物的颜色、深浅或电子密度，可对某种物质进行定性、定位和定量。

(2)免疫细胞化学。是将免疫学基本理论与细胞化学技术相结合而建立起来的新技术。主要是应用抗原与抗体特异性结合的特点，检测细胞内某些肽类和蛋白质等大分子物质的分布。肽类和蛋白质种类繁多，均具抗原性。提取动物的某些肽类和蛋白质，作为抗原注入另一种动物体内，则产生与抗原相应的特异性抗体(免疫球蛋白)，从血清中制备该抗体。如使抗体与荧光素结合，则形成荧光标记抗体。常用的荧光素为异硫氰酸荧光素(FITC)，当用该荧光素标记抗体处理组织切片时，则与组织内相应抗原发生特异结合，在荧光显微镜下呈黄绿色荧光部分，即为抗原抗体复合物，称此为荧光标记抗体法。如抗体与辣根过氧化物酶(HRP)等酶标记，与抗原结合后呈棕红色，可在光镜或电镜下观察，此即酶标抗体法。

4(组织培养

组织培养或细胞培养是在体外研究活组织或活细胞的形态结构和生理功能动态变化的一种很有价值的研究手段，已广泛应用于生物医学的各个领域。组织培养是在无菌条件下进行，从机体取得的活组织或活细胞，或者长期传代培养的细胞株，放入盛有营养液的培养基