多糖提取方法研究进展

㈠ 植物多糖的最佳提取方法是什么

植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO<2>超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.最常用的还是水提醇沉法.
举例: 蒽酮比色法，具体步骤
一、仪器、试剂和材料

1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等

2.试剂：

(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL

(2)浓硫酸

(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中。当日配制使用。

3.材料：甜高粱，甘草

二.操作步骤

1.葡萄糖标准曲线的制作

取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：

管号
1
2
3
4
5
6
7

葡萄糖标准液（mL）
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.6
0.8

蒸馏水（mL）
1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.4
0.2

葡萄糖含量（µg）
0
10
20
30
40
60
80

在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。

3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。

4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。

三、结果处理：

C × V总 × D

样品含糖量（%）= ————————————— × 100%

W × V测 × 106

其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），

V总——提取液总体积（mL），

V测——测定时取用体积（mL），

D——稀释倍数，

W——样品重量（g），

106——样品重量单位由g换算成µg的倍数

㈡ 玉米须多糖提取理论与应用价+值、经济与社+会效益

摘要 过GC和GC-MS鉴定出玉米须易挥发物质中含有36种化

㈢ 多糖类的提取方法

一、提取与纯化动植物中存在的多糖或微生物胞内多糖，因其细胞或组织外大多有脂质包围，要使多糖释放出来，第一步就是去除表面脂质，常用醇或醚回流脱脂。第二步将脱脂后的残渣以水为主体的溶液提取取多糖 （即冷水，热水，热或冷的0.1-1.0mol/L NaOH，热或冷的1%醋酸或1%苯酚等），这样提取得到的多糖提取液含有许多杂质，主要是无机盐，低分子量的有机物质及高分子量的蛋白质、木质素等。第三步则要除去这些杂质，对于无机盐及低分子量的有机物质可用透析法、离子交换树脂或凝胶过滤法除去；对于大分子杂质可用酶消化 （如蛋白酶．木质素酶） ，乙醇或丙酮等溶剂沉淀法或金属络合物法。多糖提取液中除去蛋白质是一个很重要的步骤，常用的方法有Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法，后者较为剧烈，对于含呋喃糖残基的多糖由于连接键不稳定，所以不宜使用。但该法效率较高，操作简便，植物来源的多糖常采用该法。上述三种方法均不适合于糖肽，因为糖肽也会像蛋白质那样沉淀出来。除去蛋白质后，应再透析一次，选用不同规格的超滤膜和透析袋进行超滤和透析，可以将不同分子大小的多糖进行分离和纯化，该法在除去小分子物质十分实用，同时能满足大生产的需要。具有广阔的应用前景。至此，得到的提取液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物。一般来讲，通过上述方法所得到的是多糖的混合物，如果要得到单一的多糖，还必须对该混合物进行纯化。柱层析在多糖的纯化较为常用，常分为两类：一是只有分子筛作用的凝胶柱层析， 它根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的，常用的凝胶有葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶，以及性能更佳的Sephacryl等。洗脱剂为各种浓度的盐溶液及缓冲液，其离子强度不应低于0.02mol/L。二是离子交换层析，它不仅根据分子量的不同，同时也具有分子筛的作用，常用的交换剂有DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖和 DEAE-琼脂糖等，此法适合于分离各种酸性，中性多糖和粘多糖。多糖的纯化还可用其他方法，如制备性高效液相层析、制备性区带电泳，亲和层析等，这些方法有时对制备一些小量纯品供分析用是很有用处的。

㈣ 金针菇多糖的提取方法

金针菇[Flammulina velutip (Fr)Sing-],
担子菌目金钱菌属,又名冬菇,朴菰,金菇等,其子
实体含蛋白31.2 ,脂肪5.8 及维生素B ,B.,
C,PP(生物素),含1O余种氨基酸,已广泛的应用
到食品,调味品行业中,其提取物(主要成分为多
糖,糖蛋白,蛋白聚糖,朴菰素等)对小白鼠肉瘤
180的抑制率达81.1 "-100 ,对艾氏腹水癌的
抑制率达80 [1],具有很好的药用价值L2 ].多糖
的提取,目前主要有水提醇析法,膜分离法,微波
法等" ],而超声法提取报道甚少.笔者对金针菇
多糖的提取工艺及条件进行了研究,并利用超声
波对金针菇多糖的提取进行了探讨.
1材料与方法
1.1实验材料
市售质优金针菇鲜品.
1.2试剂和仪器
试剂:CHCl3, 一C'H90H,C2H50H,HC1,
H2SO.,NaOH,C H50H等纯度均为A.R.
仪器:722一光栅分光光度计,上海第三分析仪
器厂生产;TDL一40B离心机,上海安亭科学仪器
厂生产;PHS一2c型精密酸度计,上海精科雷磁生
产;HS一250D超声波仪(27 kHz,250 w),宁波仪
器三厂生产;,DT一100单盘分析天平,北京光学
仪器厂生产.
1.3 多糖总量测定
采用苯酚一硫酸法 ,以葡萄糖为标准品.
制作标准曲线:准确称取25 mg葡萄糖于
250 mL容量瓶中加水至刻度线,摇匀,然后分别
吸取0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL于6支干燥
试管中,各以水补至2.0 mL然后缓慢地加入6
的苯酚液1.0 mL及5.0 mL浓H2SO.,静置1O
min,摇匀,室温放置20 rain,于490 nm测其吸收
值,以2.0 mL蒸馏水为空白液,实验测定结果列
入表1.
表1葡萄糖标准曲线的测定
以浓度对吸收度回归得方程:
A=0.008 395+7.144 7C;
此式r=0.999 2.其中A为吸光度,C为浓度.
1.4流程工艺
原料一烘干一称重一匀浆一调配一热水抽提
一离心分离一滤液醇析一复溶一去除杂蛋白一真
空浓缩一干燥一产品.
2结果与讨论
2.1金针菇多糖提取条件的确定
影响金针菇多糖提取得率的因素很多,如料
液比,时间,次数,酸度,温度等,针对这些因素,确
定浸提时间,采用四因子三水平正交法确立多糖
提取最佳条件,因素位级见表2. '
表2因素位级表
根据因素位级表分9组实验,每组取30 g金
针菇子实体干品进行正交实验,浸提时间为每次
90 rain,结果见表3.
从极差结果来看,初步得出影响多糖提取得
率因素大小分别是A>B>C>D.5号样提取条
件最好,即A:B.C:D.多糖得率为0.833%,且提
取次数对多糖得率影响不大,故在工业化实际生
产中,拟推荐方案为A:B.C:D.,这样既缩短生产
周期,又减少能耗,降低生产成本.
2.2多糖粗品的制取及纯化
取一定量的浸提液加无水乙醇至乙醇浓度分
别为55 ,65 ,75 ,85 ,放置一段时间后,离
心分离,收集沉淀,并烘干,即得多糖粗品.结果表
明,乙醇浓度为75 时,醇析效果最好.将多糖粗
品按样品与氯仿一正丁醇之比为1:0.25,氯仿与
正丁醇之比为1;0.2复溶,用Sevage法 ]反复
除去其中的蛋白质,然后真空干燥,即可制得纯的
多糖产品. 表3金针菇多糖提取正交结果
实验号 A B C D 多糖得率/
2.3超声波法提取金针菇多糖的研究
由2.1得知的A:B.C:D.方案为最佳方案,
因此采用在A:B.C:条件下将调配好的样品放在
超声仪中浸提,在不同时间确立超声波法提取多
糖的最佳条件,结果见表4.
表4金针菇多糖提取结果
由实验结果及分析可以看出,加水量为2O
倍,温度为9O℃,pH值为8的调配液放在超声仪
中提取20 rain时,多糖提取率可达1.250 .

㈤ 求实验室胡萝卜多糖提取方案，要具体的条件步骤

植物多糖的分离纯化
一、植物多糖的提取
1 溶剂提取法
1．1 水提法
水对植物组织的穿透力强，提取效率高，在生产上使用安全、经济。用水作溶剂来提取多糖时，可以用热水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，沉淀提纯多糖；但

由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，它也可以用于样品中不同多糖组分的分级分离；还可按多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离；其中，以乙醇沉淀最为普遍。但以根茎为主的植物体,细胞壁多糖含量高,热水直接提取率不高。此时为破坏细胞壁,增加多糖的溶出，有两种处理方法:一为酶解,二为弱碱溶解。
1．2酸碱提法
有些多糖适合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有优势，目前报道的并不多。而且即使有优势，在操作上还应严格控制酸度，因为酸性条件下可能引起多糖中糖苷键的断裂。有些多糖在碱液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀碱多位为0．1mol／L氢氧化钠、氢氧化钾，为防止多糖降解，常通以氮气或加入硼氢化钠或硼氢化钾。同样，碱提优势也是因多糖类的不同而异。与酸提类似，碱提中碱的浓度也应得到有效控制，因为有些多糖在碱性较强时会水解。另外，稀酸、稀碱提取液应迅速中和或迅速透析，浓缩与醇析而获得多糖沉淀。
1．4 生物酶提取法
酶技术是近年来广泛应用到有效成份提取中的一项生物技术，在多糖的提取过程中，使用酶可降低提取条件，在比较温和的条件中分解植物组织，加速多糖的释放或提取。此外，使用酶还可分解提取液中淀粉、果胶、蛋白质等的产物，常用的酶有蛋白酶，纤维素酶，果胶酶等。
1．5 超声提取法
超声波是一种高频率的机械波，其主要原理是利用超声波产生的“空化作用”对细胞膜的破坏，有利用植物有效成分的释放，而且超声波能形成强大的冲击波或高速射流，有效地减小、消除与水相之间的阻滞层，加大了传质效率，有助于溶质的扩散。另外，超声波的热效应使水温基

本在57℃，对原料有水浴作用。超声波提取与传统的提取方法相比，有提取效率高、时间短、耗能低等优点。超声提取的影响因素有：超声时间、超声频率（一般低频中提取效率高，但也有例外）、料液比和温度等。
1．6 微波提取
微波是频率介于300MHz和300GHz之间的非电离电磁波，微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部，由于溶剂及细胞液吸收微波能 细胞内部温度升高，压力增大，当压力超过细胞壁的承受能力时，细胞壁破裂，位于细胞内部的有效成份从细胞中释放出来，传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。影响微波浸提的主要因素为浸提时间、样品和提取溶剂的含水量，溶剂的介电常数和电导率（介电常数和电导率的溶剂对微波的吸收较好）、微波功率等。

但是由于微波泄漏对操作者影响很大，因而对设备的要求较高，这对微波的研究及应用带来了一定的困难。
二、植物多糖的分离纯化
在多糖提取物中，常会有无机盐、蛋白质、色素及小分子物质等杂质，必须分别除去．一般是先脱除非多糖组分，再对多糖组分进行分级．

2．1 除蛋白
除蛋白质时一般选择能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。Sevage法（氯仿：戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有较好效果但要达到除尽游离蛋白质的目的仍需反复处理。

如能加入蛋白质水解酶，使蛋白质大分子进行一定程度的降解，再用Sevage法处理，一般效果更好。为了避免使用有机溶剂也可采用反复冻融的方法除蛋白，将多糖液浓缩后，一20℃室温反复冻融7～8次，离心除去蛋白质。另外，蛋白质在等电点时溶解度最小，用氢氧化钙饱和液调pH10～pH11可除去偏碱性的蛋白质，然后再用硫酸调pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白质。冻融和等电点沉淀除蛋白质操作简单，但多糖液里往往有低浓度的蛋白质残留，应与其它方法结合使用。
2．2 脱色
植物多糖提取物中含有酚类化合物而使其颜色较深，可用吸附剂(纤维素、硅藻土、活性炭等)、离子交换柱(DEAE一纤维素)、氧化剂(H2O2)等脱除。活性炭比表面积大，吸附能力强，在进行当归多糖的提取时只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸后滤过即完成了

脱色操作。此法成本低廉，适合工业化生产。
2．3 除小分子杂质
小分子杂质如低聚寡糖的残留往往影响多糖的生物活性，需要进一步脱除，提高纯度。传统的方法是透析法，该法操作简单、技术成熟，但周期长，往往需要2一3天，常温下操作有可能造成多糖的霉变，必要时需加入少量防腐剂或需在低温条件下进行。随着膜分离技术的发展，纤维滤器透析法已经发展起来了，它利用不同孔径的膜使大小不同的分子分级，这种方式可缩短生产周期，而且条件温和，无疑是多糖脱除杂质的一条新途径。
2．4 多糖的分级纯化
采用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分级的方法可达到纯化的目的．可按溶解性不同进行分级、按分子大小和形状分级(如分级沉淀、超滤、分子筛、层析等)，也可按分子所带基团的性质分级．
2．4．1按溶解性不同分离
2.4.1.1分步沉淀法
分步沉淀法是根据不同多糖在不同浓度低级醇、酮中具有不同溶解度的性质，从小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮进行分步沉淀．
2.4.1.2 盐析法
盐析法是根据不同多糖在不同盐浓度中溶解度不同而将其分离的一种方法。常用的盐析剂有氯化钠、氯化钾、硫酸铵等，其中以硫酸铵最佳。
2.4.2 按电离性质不同分离
2.4.2.1季胺盐沉淀法
季胺氢氧化物是一类乳化剂，能与酸性多糖形成不溶性化合物季铵络合物，此络合物在低离子强度的水溶液中不溶解而产生沉淀。若提高多糖

液pH值或加入硼砂缓冲液，也可使中性多糖沉淀分离。常用季铵盐有十六烷基三甲基季铵盐的溴化物及其氢氧化物和十六烷基吡啶。
2．4．3 柱层析法
2.4.3.1凝胶柱层析法
凝胶柱层析法常用的凝胶有葡聚糖凝胶(Sephadex)和琼脂糖凝胶(Sepharose)，以不同浓度的盐溶液和缓冲溶液作为洗脱剂，从而使不同大小的多糖分子得到分离纯化，但不适宜粘多糖的分离。
2.4.3.2纤维素阴离子交换剂柱层析法
纤维素阴离子交换剂柱层析法常用的交换剂为DEAE一纤维素和ECTEOLA一纤维素，分类硼砂型和碱型两种，洗脱剂可用不同浓度碱溶液、硼砂溶液、盐溶液，其优点可吸附杂质、纯化多糖，并适用于分离各种酸性、中性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙参多糖、太子参多糖等。
2.4.3.3 活性炭柱层析法
活性炭吸附量大、效率高，是分离水溶性物质的常用吸附剂。柱层析时活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀释剂，以增加溶液的流速。糖溶液上柱后先用水洗脱无机盐、单糖等再依次增加乙醇浓度进行洗脱。
2.4.3.4 离子交换柱层析和普通凝胶柱层析联用法
有些植物的多糖成分复杂， 除中性多糖外，还含有糖醛酸等，因此往往两种不同性质的色谱柱联用才能得到单一多糖组分。
2.4.3.5 三种层析柱联用
采用离子交换葡聚糖凝胶柱、丙烯葡聚糖凝胶柱和葡聚糖凝胶柱三者联用，即先进行DEAE—SephadexA柱层析，用蒸馏水洗脱。水洗组分进一步

用SephacrylS柱层析，得到主要组分再用SephadexG一100柱层析，有时会有较高的得率。
三、多糖的纯度鉴定
经过分级纯化的多糖在测定结构前须进行纯度鉴定．而且多糖的纯度不能用通常化合物的纯度标准来衡量，因为即便是多糖纯品，其微观也并不均一，仅代表相似链长的多糖分子的平均分布，通常所谓的多糖纯品也只是一定相对分子质量范围的多糖的均一组分．目前常用于多糖纯度

的鉴定方法有：高效液相、 凝胶层析法、电泳法、色谱法、旋光度法等．
四、常见问题
多糖制备过程中蛋白质的脱除是目前分离纯化多糖的难点。Sevag法需要消耗大量的有机溶剂，且操作烦琐；三氟三氯乙烷的沸点较低(bp56℃

，)易挥发，不宜大量应用；三氯乙酸可引起多糖的降解，从而影响其生理活性；酶价格昂贵，不适合工业化生产。可以借鉴其它蛋白质脱除的方法，例如用天然澄清剂能简化提取工艺，提高多糖纯度。 脱色也是多糖提取纯化过程中面临的一个难题。活性炭会吸附多糖而造成多糖的损失。

㈥ 实验室多糖的提取方法请问有几种和具体步骤

提取率要看你具体的提取条件了，即使都是用水提法，不同的条件、不同的原料，得到的提取率也不一样，找篇文章给你参考吧。

枸杞多糖水提工艺的优选
植飞 郑卫平 陈平 何梅仙
(1．武汉工业学院制药教研室，武汉430023；2．中国药科大学，南京210000)
摘要：目的：确定枸杞多糖最佳提取条件。方法：分别以多糖得率及多糖含量为考察指标，以正交实验法确定枸杞多糖的最佳提取工艺。结果：枸杞多糖的最佳提取工艺为：取枸杞药材，第一次加水l0倍，以后每次加水8倍量，共冷浸3次；每次冷浸1 h；每小时搅拌10 min。结论：本法为枸杞多糖水提工艺的确定提供实验依据。

㈦ 超声波法提取多糖的实验步骤

摘要：对超声波辅助热水提取法从麦冬中提取多糖的工艺进行了研究，旨在更大层次上提取麦冬超声波法提取多糖的实验步骤中多糖，首先通过单因素实验分析了几个主要因素：液料比,提取时间,提取温度，超声波时间对提取率的影响。在单因素的基础上，通过正交实验对复合法提取麦冬多糖的工艺研究条件进行了优化，实验表明，最佳提取工艺条件为：料液比1:20，提取时间15min，提取温度80，超声波时间15min，对于麦冬多糖的降血糖的研究表明，麦冬多糖对正常的小鼠有降低血糖的作用。
关键词：麦冬多糖
提取率
单因素
正交实验
蒽酮-硫酸比色法
降血糖

㈧ 粗多糖提纯的方法有哪些

西安市天园生物制剂厂
大豆粗多糖：是从大豆籽粒中提取出的可溶性寡糖的总称，大豆中的寡糖属于а-半乳糖苷类，包括棉籽糖、水苏糖和Vabascose.

（1）、促进双歧杆菌的增殖：人体虽然不能直接利用粗多糖，但是粗多糖可被肠内细菌利用，并且能促进双歧杆菌的增殖。双歧杆菌是一种厌氧革兰氏阳性细菌，是维护和保持肠道菌群平衡的一个极为重要的因素，也是判断肠内外环境是否正常的一个可靠依据。
（2）、抑制病原菌：大豆粗多糖能促进双歧杆菌的增殖，从而抑制有害细菌如产生梭状芽孢杆菌的生长。双歧杆菌能发酵粗多糖产生短链脂肪酸和一些抗菌素物质，从而可抑制外源致病菌和肠内固有腐败细菌的生长繁殖。
（3）、防止便秘、腹胀，促进消化，调节胃肠功能：肠道内的双歧杆菌发酵粗多糖产生大量的短链脂肪酸（主要是醋酸和乳酸），能刺激肠道蠕动，从而促进消化，防止便秘的产生。
（4）、增强免疫功能：如果人较长期的食用无细菌食物，肠道就会因为缺少刺激而使其产生抗体的能力下降，从而容易诱发疾病。食用粗多糖，促进双歧杆菌的增殖，将对肠道免疫细胞产生刺激，提高其产生抗体的能力从而起到防治疾病的效果。

㈨ 多糖的提取有哪些方法

植物活性多糖的提取方法有多种,在水提醇沉的基础上,常采用酶解、微波、超声波,膜处理和CO超临界萃取等方法进行辅助提取或精制.最常用的还是水提醇沉法.