血涂片常用染色方法的比较分析

1. 瑞氏染色步骤

操作步骤：
1.滴加瑞氏吉姆萨A液(约0.5ml-0.8ml)涂片上，并让染液覆盖整个标本染色1min；
2.
再将瑞氏吉姆萨B液加于A液上面（滴加量为A液的2-3倍），以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色3-10min。（染血片时间可略短，染骨髓片时间应视细胞量多少而异）
3.水洗（冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲去，以防有沉渣沉淀在标本上），干燥、镜检。
注意事项：
1.
染色时间须视何种标本，涂片厚度，有核细胞多少，何种细胞及室温等而定；通常染血液涂片时滴加B液后染2-4分钟，染骨髓片则应不少于8分钟；气温较低时，可适当延长染色时间。染色结果如出现嗜酸性粒细胞变碱，则考虑是否染色时间太长所致。
2.做骨髓涂片时，因为骨髓纤维蛋白含量较高，凝固较快，所以涂片过程要快。骨髓不可用草酸盐抗凝，否则会使血细胞核变形，核染色质致密，胞浆空泡形成，出现草酸盐结晶。
3.染液量需充足，勿使染液蒸发干燥，以防染料沉着于涂片上。
4.做细胞染色时，当天气寒冷或湿度较大时，应于37℃温箱中保温促干，以免细胞变形缩小或在染色时脱片。
5.染料放置时间越长，染色效果越好。
6.
本试剂应由专业人员使用。
拓展资料
Wrfeht和Giemsa都于1902年报告了各自的新的血液学染色剂，其主要特点是在制备多色性亚甲蓝（主要指天青B）方面做了改进，使血细胞和疟原虫着色较好，操作简便。
上述染色法均是含伊红和亚甲基蓝衍生物的复合染料。在临床检验工作中，瑞氏染色法常用于血液、其他体液、分泌物和排泄物涂片中各种细胞的染色，有利于在显微镜下观察细胞形态及对细胞进行分类检查。
【染色原理】
瑞氏染色分两相进行，第一相是酸性染料伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白、嗜酸性颗粒等结合；碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质（chro－matin）、特异中性颗粒、血小板及富含核蛋白的胞质结合。第二相是天青B和伊红在适宜条件下形成紫色的天青B一伊红复合物（azure
B－eosin
complex），这种复合物是形成Romanowsky－Giemsa效应的基础。
Romanowsky－Giemsa效应包括：①白细胞核染色质染成紫色，疟原虫的染色质染成红色；②中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区染成紫色；③产生本效应必须有两种染料参与，一种是天青B，另一种是伊红。
Wittekind（1985）指出，天青B与DNA分子中的磷酸基结合，而伊红既与DNA分子中的阳离子部位结合，又与天青B结合，与天青B的结合力来源于电子供一受体的电子转移力，天青B的甲氨基（－NHCHs）与伊红分子中的叛基（－COOH）间形成氢键。因此，天青B是噻嗪类染料中能与伊红形成复合物的最佳选择，因为拥有四个甲基侧链的亚甲蓝不能以氢键与伊红结合。
甲醇除作为染料的溶剂，能将瑞氏染料解离成带正电荷的天青B和带负电荷伊红外，因其具有脱水力，还可将细胞固定为一定形态，并使蛋白沉淀为颗粒状、网状结构，增加细胞与染料的接触表面，增强染色效果。
细胞中的各种有机物质（特别是蛋白质）、染料等对环境的州值非常敏感。如环境偏酸，氢离子增多，降低对碱性染料的亲和力；增强伊红着色，出现异常红染；相反，则可出现异常蓝染。最佳环境应维持在PH值6
4～6、8.因此，必须使用缓冲溶液。
参考资料：
搜狗网络_瑞氏染色
瑞氏染色原理及方法_医学教育网

2. 制作血涂片常用的染色方法有哪些

瑞特和 吉姆萨

3. 厚薄血膜染色法优缺点

摘要 薄血涂片中疟原虫形态典型，易辨认，但诊断时发现疟原虫较难，费时间。厚血膜上发现疟原虫容易，省时间，但疟原虫形态不典型，不易辨认

4. 常用的染色方法 瑞士染色的药品 方法 过程

瑞士染液由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝溶解于甲醇而成.不同的细胞由于所含化学成分不一样,对各种染料的亲和力也不一样,因此,①细胞中的碱性物质,如红细胞中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色,这种碱性物质物质又称为嗜酸性物质.②细胞中的酸性物质,如淋巴细胞及嗜碱性粒细胞的碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色,这些酸性物质成为嗜碱性物质.③中性粒细胞的中性颗粒呈等点状态与伊红和美蓝均可结合,染成淡紫红色,成为嗜中性物质.
瑞士染色步骤：1）标记血涂片2）加瑞士染液：待血涂片干透后,用蜡笔在两端画线,以防染色时染液外溢.然后将血涂片平放于染色架上,滴加染液3~5滴.3）加缓冲液：约1min后,滴加等量或稍多的缓冲液,轻轻摇动血涂片或用洗耳球对准血涂片加液处轻吹,使染液充分混合.4）冲洗染液：染色5~10min后,用流动的蒸馏水从血涂片一端冲去染液,约30s以上.染片背面用纱布擦净后,待干.5）判断染色结果：在正常情况下,良好的染色结果血膜外观为淡紫红色；低倍镜下,细胞分布均匀；红细胞呈粉红色,少见染色颗粒,血细胞无人为形态如空泡.白细胞胞质能显示各类细胞的特有色彩,白细胞核染成紫红色,染色质和副染色质清晰,粗细松紧可辨.
注意事项：1）血涂片先要做好标记.2）必须待血涂片干透后才加染液.3）要注意染液与缓冲液的比例.4）加缓冲液后,要使其与染液充分混匀.5）染色时,血涂片正反要分清楚.6）冲洗时要用流动的水从玻片一端冲.7）染色过程中要把握好时间.8)染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血片上难冲洗干净.9) 染色时应注意保护血膜尾部细胞,不能划掉.因为体积较大细胞常在此处出现.
瑞士染色主要适用于观察细胞形态的血涂片的染色.

5. 血涂片如何制备怎样才算是一张合格的血涂片 瑞特染色法的原理是怎样的如何制作

血涂片制备方法很多，目前临床实验室普遍采用的是手工推片法，即用楔形技术制备血涂片方法，在玻片近一端1/3处，加1滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张边缘光滑的推片，以30°~45°角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至载玻片另一端。血涂片应呈舌状，头、体、尾三部分清晰可分。瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和作用，又有物理吸附作用。各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的亲和力也不一样，因此，染色后各种细胞呈现出各自的染色特点。以血涂片染色为例，1、采血后推制厚薄适宜的血涂片。2、用蜡笔在血膜两头画线，然后将血涂片平放在染色架上。3、加瑞氏染液数滴，以覆盖整个血膜为宜，染色约1分钟。4、滴加约等量的缓冲液与染液混合，室温下染色5~10分钟。5、用流水冲去染液，待干燥后镜检。

6. 瑞氏染色血涂片的步骤

静脉采血后使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血，左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈30~45°角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片。

染色用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染液滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染1分钟。加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液混合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉，用吸水纸吸干，自然干燥后即可观察。

(6)血涂片常用染色方法的比较分析扩展阅读：

注意事项：

1、血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。

2、冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。

3、染色过淡可以复染，复染时应先加缓冲液，然后加染液。染色过深可用流水冲洗或浸泡，也可用甲醇脱色。

4、瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇（AR级以上）和甘油组成，Ⅱ液为磷酸盐缓冲液（pH6.4～pH6.8）。

7. 如何分析血涂片染色结果偏酸、偏碱的原因

血涂片一般使用瑞氏染液进行染色并观察，瑞氏染液对PH值的要求非常高，如果PH值偏离允许范围，那么就会引起染色结果的巨大偏差，从而给显微镜观察造成比较大的困难。
一般来说，瑞氏染液是通过缓冲液来维持PH值的，其范围在6.4-6.8，因此主要考虑缓冲液是否有问题，配置用的蒸馏水是否有问题，测一下PH值并做一下调整。

8. wright染色法是什么

瑞特（Wright）染色法：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。目前常用瑞特染色法。

瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝。

注意事项

1、血膜要干燥，否则易脱落。

2、室温高，染色时间短，室温低，染色时间长。

3、骨髓片染色时间要长一点，冲洗前可先用低倍镜观察有核细胞是否染色清楚，核质是否分明，然后再冲洗。

以上内容参考：网络-瑞氏染色法

9. 血涂片常用的染色是什麽，为什麽

瑞-姬氏染色，能将细胞核和细胞器等细胞结构染色成不同的颜色，有利于细胞形态的鉴别。

10. 血涂片染色检查原虫的方法和步骤

方法和步骤如下：
一、玻片清洁
玻片清洁。清洁的玻片无油脂，无划痕，无灰尘，玻片
上有油迹，使厚血膜容易脱落，薄血膜涂布不均匀。在用手
指持玻片时，只能夹持玻片的两侧边缘，不要接触玻片的表
面以避免手指上的油污染污玻片。
1.新的载玻片先用热肥皂水洗涤，再用清水冲洗，然后
用软而洁净的毛巾擦干待用。
2.使用过的载玻片的清洁方法有两种：
①5%的肥皂水煮沸法
将洗衣肥皂削成小片，加水配成约5%的肥皂 水，煮沸
后将玻片一张一张地平放进肥皂水内，微火煮约一刻钟，然
后灭火待肥皂水稍冷后，用清洁干毛巾擦净后待用。
②清洁液浸泡法清洁液配制如下
重铬酸钾 80g
浓硫酸 100ml
水(清净水)1000ml
配制时须先将重铬酸钾研细放入水中，慢慢加温到全部
溶解为止，然后缓缓加入浓硫酸，待溶液冷却后倒入有盖的
大口玻璃缸内。清洁玻片时，将待洗的玻片逐张放入清洁中
浸泡一两天后，取出清水冲洗至完全没有黄色为止。浸泡前
最好用二甲笨除去镜油，清洁液颜色变为墨绿色后即失去清
洁作用，不能再用。
二、制片
1.薄血膜涂制
(1)先用75%酒精棉球将耳垂消毒，待酒精干后用采血针
迅速刺入耳垂近下端边缘处。
(2)用左手的拇指与食指以及右手的中指向相对的方向
将耳垂轻轻挤压出血。
(3)取一张洁净的载玻片，将它的左1/3的表面接触耳垂
上的血滴不要将玻片接触耳垂上的皮肤，使一小滴血在
玻片上。血量1-1.5mm
3
.1/4.火柴头大小。
(4)将推片臵于血溶之前与血液相接触，待血液沿推片边
缘展开后，将推片与载玻片保持30角度，用力均匀迅速将
推片由右向左推出而制成薄血膜。涂制得较好的薄血膜只有
一层血球，血球的分布排列比较均匀，血膜的末端突出如舌
状。
若取的血滴太大，则涂制的血膜太宽太厚，若推时用力
不均匀，则易成梯田状
若用力太大，则血膜两端过厚，若涂片上有油污，则血
膜成多孔状。
2.厚血膜涂制，薄血膜涂好后，再轻挤耳垂挤出约火柴
头大一血滴，将这一滴血滴在玻片的中心1/3处然后用推片
的一角由血滴中央向周围旋转涂成直径约一厘米的圆形血
膜，旋转涂制时间不宜过短，以免形成纤维蛋白束，遮盖了
疟原虫。
厚血薄涂好后，应平放待干，防苍蝇舔食血膜或灰尘落
在上面。受检者的编号可用铅笔或钢笔写在薄血膜的边缘
上，也可用蜡笔写在厚血膜一端。
三、染色
常用的染色方法有姬姆萨氏和瑞氏两种
(一)吉氏染色法，吉氏染剂是最可靠的血膜染剂其优
点是易于掌握很少染色过度，染好后的血膜褪色较慢
1.吉氏染剂的配制
吉氏染剂粉 0.5g
甘油，中性，25ml
甲醇，纯，分析纯，25ml
将吉氏染剂粉0.5臵于乳钵中，加少许甘油充分研磨
再加甘油研磨，直至25甘油加完为止。将充分研磨的吉氏
甘油液倒入无水，干净的棕色玻塞瓶中，然后分次加甲醇于
乳钵洗出染剂倒入瓶中，直至25甲醇将乳钵洗净并全部倒
入瓶中，塞紧，充分摇匀，放臵室内一星期，每天摇动数次
以后即可使用.
2.缓冲液的配制;
为了保证染色良好，使疟原虫的核和胞浆红兰分明，感
染的红血球上的薛氏小点清楚，在稀释染剂厚液时所用的
蒸馏水必须加缓冲液，缓冲蒸馏水。新鲜蒸馏水可能接近
中性，但贮存在一个时期后，由于吸收了空气中的 而变为
酸性，因此蒸馏水中必须加缓冲液，使其达到我们需要的效
果。
缓冲液配制
磷酸氢二钠，无水 9.5g
蒸馏水 1000ml
磷酸二氢钾 9.07g
蒸馏水 1000ml
将上二液分别贮存于紧塞的玻瓶中。
稀释染剂所用的蒸馏水的ph以7.0-7.2为最适宜现
用现配可按下表配制缓冲蒸馏水的配制（ml）
ph 磷酸二氢钠液 磷酸二氢钾液 蒸馏水
6.6 37 63 900
6.8 49 51 900
7.0 63 37 900
7.2 73 27 900