肝免疫分析方法

㈠ 免疫分析方法有哪些

（1）放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA）。RIA技术是使用以放射性同位素（如125I、32P、3H等）作标记的抗原或抗体，用γ－射线探测仪或液体闪烁计数器测定γ－射线或β－射线的放射性强度，来测定抗体或抗原量的技术。它包括以标记抗原为特点的放射免疫分析和以标记抗体为特点的免疫放射分析（immunoradiometricassay，IRMA）。前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。

RIA在早期建立的农药免疫分析方法中占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2，4－D和2，4，5－T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫分析法。尽管该方法灵敏度非常敏锐（RIA通常为10-9g、10-12g，甚至10-15g），应用范围广，但进行RIA需使用昂贵的计数器，也存在放射线辐射和污染等问题，因此在农药残留检测领域的应用和发展受到了一定的限制，并逐步为其他免疫分析方法所取代。

（2）酶免疫分析法（enzymeimmunoassay，EIA）。EIA是继RIA之后发展起来的一项免疫分析技术。其检测原理与放射免疫法类似，但所用的标记物为酶，它将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用做标记物的酶有辣根过氧化物酶（horseradishperoxidase，HRP）和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase，AKP）、葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase，GO）、脲酶（urease）等。酶标记反应的固相支持物有聚苯乙烯塑料管、膜等。目前大多数采用96孔酶标板（MTP）作为固相支持物。这种板的检测容量大，样本数量多，只需有台简单的酶标仪就可得出准确的检测数据。也有学者采用磁珠作为固相材料进行EIA研究，其原理是将高分子材料（聚苯乙烯、聚氯乙烯等）包裹到金属小颗粒（Fe2O3，Fe3O4）外面，再通过化学方法键合上氨基（－NH2）、羧基（－COOH）、羟基（－OH）等活性基团，再与抗体或抗原耦联，制成免疫性微珠。该方法的优点是微珠比表面积大，吸附能力强，能悬浮在液相中快速均匀的捕获样品中的待测物，通过外加磁场后能够实现微珠与样品液的快速分离，从而减少检测时间、提高检测灵敏度。

由于酶标试剂制备容易、稳定、价廉，酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，故近年来EIA技术发展很快，已开发了多种EIA方法。其中酶联免疫法（，ELISA）是目前农药残留检测中应用最广泛的酶免疫分析技术。

（3）荧光免疫分析法（fluorescenceimmunoassay，FIA）。FIA检测的基本原理是将抗原抗体的高度特异性与荧光的敏感可测性有机地结合，以荧光物质作为示踪剂标记抗体、抗原或半抗原分子，制备高质量的特异性荧光试剂。当抗原抗体结合物中的荧光物质受到紫外光或蓝光照射时，能够吸收光能进入激发态。当其从激发态回复基态时，能以电磁辐射形式放射出所吸收的光能，产生荧光。绘制农药浓度－荧光强度曲线，可以定性、定量检测样品中的农药残留量。

适用于抗体、抗原或半抗原分子标记的荧光素须符合要求：①应具有能与蛋白质分子形成稳定共价键的化学基团，或易转变成这类反应形式而不破坏其荧光结构；②标记后，荧光素与抗体或抗原各自的化学结构和性质均不发生改变；③荧光效率高，与蛋白质结合的需要量很少；④荧光素与蛋白质结合的过程简单、快速，游离的荧光素及其降解产物容易除去；⑤结合物在一般储存条件下性能稳定，可保存使用较长时间。

（4）化学发光免疫分析法（luminescentimmunoassay，LCIA）。LCIA又可分为化学发光免疫测定（chemiluminescentimmunoassay，CLCIA）和生物发光免疫测定（bio-luminescentImmunoassay，BLCIA）。

1976年，Shroeder首先用生物素（B）－亲和素（A）系统建立了均相化学发光免疫测定技术，尔后Halman和Velan又将其引伸到非均相体系，现已渗入到生物学研究的各个领域。其原理是以发光指示抗原与抗体的结合，当发光标记物与相应的抗体或抗原结合后，底物与酶作用，或与发光剂产生氧化还原反应，或使荧光物质（例如红荧烯等）激发，释放光能。最后用光度计测定其发光强度，进行定量分析。常用发光标记物有辣根过氧化物酶（HRP）、鲁米诺（luminol）、异鲁米诺（isoluminol）、咯粉碱（lophine）、光泽精（lucigen）、双（2、4、6－三氯苯）草酸酯、联苯三酚和6[N-（4－二氨基丁基）－N－乙基]－氨基-2，3－二氢吩嗪-1，4－二酮（ABEI）等。用上述发光标记物标记的抗体（或抗原）在一定的pH缓冲溶液中与相应的抗原（或抗体）结合时，在协同因子（例如H2O2等）的作用下发光，其发光强度与被测物的浓度成正比，故可以用于定量分析。

发光免疫测定具有特异性强、灵敏度高（检测限量达10-15mol/L）、快速（1～3h）、发光材料易得等优点。但其发光过程和强度常受到发光物质本身的化学结构、介质的pH、协同发光物质和金属离子杂质等影响。

（5）金免疫层析分析法（goldimmuno-chromatographyassay，GICA）。GICA检测原理是将配体（抗体或抗原）以线状包被固化于硝酸纤维素膜等微孔薄膜上，胶体金标记另以配体或其他物质并以干态固定在吸水材料上，通过毛细作用，使样品溶液在层析条上泳动，当泳动至胶体金标记物处时，如样品中含有待检受体，则发生第一步高度特异性的免疫反应，形成的免疫复合物继续泳动至线状包被区时，发生第二步高度特异性的免疫反应，形成的免疫复合物被截留在包被的线状区，通过标记的胶体金而显红色条带（检测带），而游离的标记物则越过检测带，与结合的标记物自动分离。通过检测带上颜色的有无或色泽深浅来实现定性或定量测定2。

2金标试纸条检测

GICA法具有快速（5～20min）、廉价、结果明确、无需复杂操作技巧和特殊设备、携带方便等优点。但相对于其他免疫分析方法，该方法检测灵敏度稍低，主要适合现场快速定性或半定量测定。目前该方法已被应用于医学和生物学等众多研究领域，尤其在发达国家已经得到了广泛的应用。

（6）免疫分析与仪器分析技术的联用技术。使用单一的IA技术进行农药残留分析获得的信息量少，而理化分析方法的选择性又比较差。Kramer等人将免疫分析法和液相色谱法（LC）联合起来使用，从而简化了分析方法，提高了检测效率。LC-IA的联用，将LC的高分离能力和IA的高灵敏性和高特异性融为一体。该分析法尤其适合多组分残留分析和微量分析。免疫分析与气相色谱/质谱（GC/MS）的联用可减少结构相似的农药或代谢产物分析中的交叉反应，以降低假阳性。

㈡ 免疫组化结果有几种分析方法

有阳性细胞区域直接测试方法。

免疫组化，是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。
免疫组织化学技术按照标记物的种类可分为免疫荧光法、免疫酶法、免疫铁蛋白法、免疫金法及放射免疫自显影法等。
这些常用免疫组织化学方法的原理如下：
1. 免疫荧光细胞化学技术
将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察.当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后会发出一定波长的荧光,从而可以确定组织中的抗原定位或定量.
2. 免疫酶细胞化学技术
是目前免疫组织化学研究中最常用的技术．基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒，通过光镜或电镜，对细胞或组织内的相应抗原进行定位或定性研究．
3. 免疫胶体金技术
就是用胶体金标记一抗，二抗或其他的能特异性的结合免疫球蛋白的分子（如葡萄球菌A蛋白）等作为探针对组织或细胞内的抗原进行定性，定位或定量研究．由于胶体金的电子密度高，多用于免疫电镜的单标记或多标记的定位研究．

㈢ 想检查一下肝有没有问题，那么都应该做什么检查呢

验血是一个很宽泛的检查，具体到肝脏，主要是看肝功能的变化。具体到疾病，可以针对肝炎和肝癌来验血。肝功能的检验项目主要看谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素。谷丙转氨酶、谷草转氨酶升高提示肝脏功能的损害。

总胆红素、直接胆红素的升高主要与肝内外胆管的堵塞、溶血、肝细胞的损害等有关。肝癌的血液学检查主要是肿瘤标志物中的甲胎蛋白（AFP）。并不是说一查出AFP高就可以诊断肝癌了，一般需要数值大于400，还要结合B超等影像学检查确诊。

研究发现，酒精，是导致疾病和过早死亡的主要风险因素之一。相关数据显示，一年内，即使每天仅饮用一杯酒，也会使罹患23种与酒精相关疾病的风险，增加0.5%！

而过度饮酒，最伤的就是肝脏。这是因为，酒精摄入体内产生乙醛，乙醛对肝细胞有毒性作用，可以加速肝细胞死亡，影响肝细胞的自我修复。

它的根作用影响最大的，就是保肝，清肝毒，预防肝损伤。跟乳蓟的功能不相上下，都是最常用在需要去肝毒的病患身上。其对慢性肝炎以及服药或其他原因造成的肝损伤有不错的修复效果，能通过对肝脏的修复来恢复正常肝功能。

㈣ 肝功能检测方法(专业)

什么是乙肝
乙型病毒性肝炎简称乙型肝炎，是由乙型肝炎病毒（HBV）引起，通过血液与体液传播，具有慢性携带状态的传染病，临床表现多样化，包括急性、慢性、淤胆型和重症型肝炎，容易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病例可转变为原发性肝细胞癌。本病在我国广泛流行，人群感染率达60%，HBsAg阳性率约为10-15%。是当前危害人民健康最严重的传染病。
乙肝的传播途径
1.血源性传播：接受被乙肝病毒污染的血液或血制品。
2.母婴传播：乙肝病毒能通过胎盘传播（宫内传播），或在孕妇分娩时从产道传播（围产期传播）。
3.医源性传播： 如医疗器械被乙肝病毒污染而未经消毒或处理不当可造成传播。
4.性接触传播： 性乱交、同性恋性接触及夫妻之间性生活未采取防护措施。
5.密切接触传播：乙肝患者或携带者的血液、精液、阴道分泌物、乳汁都可能含有乙肝病毒，可污染器具、物品而具有传染性。
乙肝二对半检查
乙型肝炎病毒免疫学标记一共3对，即表面抗原(HBsAg)和表面抗体(抗HBs或HBsAb)、e抗原(HBeAg)和e抗体(抗HBe或HBeAb)、核心抗原(HBcAg)和核心抗体(抗HBc或HBcAb)。由于核心抗原在血中不易测到，目前试剂盒也不过关，所以还剩二对半抗原抗体，这就是人们常说的乙肝“二对半”检查，或称“乙肝五项”检查。乙肝五项临床意义如下：
1.乙肝表面抗原：是乙肝病毒的外壳蛋白，本身不具有传染性，但它的出现常伴随乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的标志。在感染乙肝病毒2个月～6个月、丙氨酸氨基转移酶升高前2周～8周时，可在血清中测到阳性结果。它的出现表明是急性乙肝、慢性乙肝患者或病原携带者，急性乙肝患者大部分可在病程早期转阴，慢性乙肝患者或病毒携带者表面抗原可持续阳性。
2.乙肝表面抗体：是对乙肝病毒免疫和保护性抗体。它的阳性表明既往感染过乙肝病毒，但已经排除病毒，或者接种过乙肝疫苗，产生了保护性抗体。血清中乙肝表面抗体滴度越高，保护力越强。但也有少数人乙肝表面抗体阳性而又发生了乙型肝炎，可能为不同亚型感染或是乙肝病毒发生了变异。
3.e抗原：急性或慢性乙肝患者体内可查出e抗原，它的阳性说明乙肝病毒在体内复制活跃，传染性强。
4.e抗体：它的阳性表明患者的传染性降低，病毒复制降低或缓解。也有个别人e抗体阳性，病情迁延不愈，多为感染了变异的乙肝病毒所致。
5.核心抗体：它的滴度高，表明乙肝病毒正在复制，有传染性，可持续存在数年至数十年。低滴度的核心抗体表明既往感染过乙肝病毒。
如何看化验单（乙肝三系检查、肝功能检查）
（一）乙肝三系检查（代表体内病毒情况）
1.HBsAg(表面抗原)
2.HBsAb(表面抗体)
3.HBeAg(E抗原)
4.HBeAb(E抗体)
5.HBcAB(核心抗体)
A 1、3、5项阳性说明感染的是大三阳，病毒复制快，有传染性。
B 1、4、5阳性说明感染的是小三阳，病毒复制相对较慢，传染性相对较小。
C 单独2项阳性说明原来感染过乙肝，或者注射过乙肝疫苗。
D 1、5或者4、5阳性说明正在感染其间，或者正在康复之中。具体分析看病情而定。
E 1、3阳性说明正在感染之中，应该及时治疗。
（二）肝功能检查（代表肝脏本身的变化）
项目 单位 参考范围
总蛋白： G/L 60-83
白蛋白 G/L 35-53
球蛋白： G/L 25-33
谷丙转氨酶 U/L 0-40
谷草转氨酶 U/L 0-50
总胆红素 umo/l 0-20
直接胆红素 umo/l 0.0-6.0
肝功各项化验指标的临床意义:
通常医院所做的肝功能化验指标包括谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),γ-谷酰转肽酶(GGT),白蛋白/球蛋白(A/G),总胆红素(T-Bil),直接胆红素(D-Bil)。 ALT与AST主要分布在肝脏的肝细胞内，如果肝细胞坏死, ALT和AST就会升高，但这两种酶在肝细胞内的分布是不同的，ALT分布在肝细胞浆,AST分布在肝细胞浆和线粒体中。急性肝炎和轻症的慢性肝炎, 主要表现为ALT的升高，因此,AST/ALT<1;慢性肝炎的后期,肝硬化和肝癌患者,肝细胞的破坏程度是严重的,线粒体也受到了严重的破坏,因此,AST升高明显, AST/ALT>1甚至>2。 ALP和GGT在淤胆型肝炎和肝外梗阻时明显升高, 酒精性肝炎患者的GGT明显升高。白蛋白是在肝脏制造的, 当肝功能受损时, 白蛋白产生减少, 球蛋白是机体免疫器官制造的, 当体内存在"敌人"时, 球蛋白产生增加, 因而慢性肝炎病人由于肝功能减退,白蛋白产生减少,又由于体内存在肝炎病毒这个"敌人",球蛋白产生增加, 而造成A/G比值倒置。 肝细胞受损时, 胆红素的代谢及泄均发生障碍, 因此T-Bil和D -Bil均升高。
何谓"大三阳"，何谓"小三阳"
肝功化验1、3、5阳性，属于“大三阳”，即表面抗原（HBsAg)、e抗原（HBeAg)和核心抗体（HBcAb)同时出现阳性。这些患者由于HBeAg(+),因此提示乙型肝炎病毒在体内复制(繁殖)活跃,且传染性较强。这些患者还分为两种情况: 一种是肝功正常的患者,说明这些患者虽然病毒在体内较活跃,但并没有引起严重的肝损害。这些患者可以正常工作和学习。又因其病毒复制活跃,还应经常检查肝功能,一旦发现异常及时治疗，同时可在医生的指导下进行免疫治疗和抗病毒治疗。另一种是肝功异常的患者,这些患者不但传染性强,而且已有了较明显的肝脏损害。对这样的患者首先要积极治疗肝功能异常,可在保肝功物的基础上加用免疫调节治疗,而且要注意休息。如果没有很好的治疗,患者则容易发展为肝硬化。其次,在肝功能稳定的情况下,由医生决定是否应用抗病毒药物。还有,由于其传染性强,密切接触的亲属、配偶、子女也应注射乙肝疫苗。
肝功化验1、4、5阳性，属于“小三阳”，即表面抗原（HBsAg)、e抗体（HBeAb)和核心抗体（HBcAb)同时出现阳性。相对于大三阳患者来说，小三阳患者体内的病毒复制已经由活跃转为静止，血中的带病毒量也明显减少，传染性相对降低，病情开始好转。对于“小三阳”患者还应区分两种情况，一种是肝功能长期正常（每3个月复查肝功一次，持续2～3年），称之为“稳定的小三阳”，这是乙肝表面抗原携带者或急性乙肝患者较好的转归，可看成是一个健康者，一般不会发展为慢性乙肝病人，也不具有传染性。第二种情况是肝功检查经常异常，时好时坏，称之为“不稳定的小三阳”；这主要是由于乙肝病毒发生变异所致，当肝功能异常时要按肝炎进行治疗，也具有较强的传染性。

乙型肝炎的发病机理
乙型肝炎的发病机理是一个复杂的问题,迄今尚未完全阐明。国内外学者对此进行了大量研究，结果表明, 乙型肝炎病人的肝脏受损,并不是乙型肝炎病毒在肝细胞内繁殖的直接结果, 而是机体的免疫反应造成的。乙型肝炎病毒感染人体后,可激发机体产生对乙型肝炎病毒的各种细胞免疫反应和体液免疫反应,并激发自身免疫反应引起免疫调节功能紊乱。机体的这些免疫反应, 可清除已感染病毒的肝细胞, 又可引起肝细胞的损伤, 造成不同类型的病理变化及临床转归。
幼儿时感染HBV,常常因免疫功能不健全,而缺乏上述的免疫反应,造成乙型肝炎病毒携带状态或慢性肝炎。成年感染乙型肝炎病毒的多数患者病毒是可以通过上述免疫反应,引起急性肝炎的症状,同时清除肝炎病毒的。
什么是“澳抗”
“澳抗”的全称是澳大利亚抗原，它是乙型肝炎(简称乙肝)病毒免疫指标之一，亦叫做乙肝表面抗原(HBsAg),由于首先在澳大利亚发现，故称之为“澳抗”。
乙型肝炎表面抗原携带者应注意的问题
携带者除不能献血外，可照常工作和学习，一般不必治疗，但必须注意下列几点：
（1）定期（3-6月）复查，包括肝功能、B超、AFP（甲胎蛋白）及白细胞、血小板。一旦发现异常，就需根据不同情况进行治疗。虽然肝功能检查正常，但肝、脾肿大或白细胞、血小板减少也应引起重视。进行必要的治疗；
（2）忌酒；
（3）生活规律，勿过累；
（4）注意个人卫生和月经卫生，防止唾液、血液污染周围环境，感染他人，所用食具、刮刀修面用具、牙刷、盥洗用品应与别人分开；
（5）如HBeAg阳性或HBVDNA阳性，则不宜从事接触直接入口食品、食具和婴幼儿工作。 要知道无症状HBsAg携带者中有一部分人的肝脏可能有炎症，实际上为慢性肝炎；也有一部分携带者在某一时期可能会发病，母婴传染的携带者常常在青春期前后发病。一般认为30岁以上携带者发病的可能性明显减少。
对乙型肝炎表面抗原携带者有哪些限制
由于人们对乙型肝炎表面抗原携带者的认识不够全面，以至一些乙型肝炎表面抗原携带者中的青年在升学、就业、结婚甚至出国等都发生了各式各样的问题。其实有些问题并非那么严重。乙型肝炎表面抗原携带者约占我国总人口的10%，他们中不乏有科学家、名演员和为国争光的优秀运动员。除了某些学业，如幼儿师范、护士、饮食服务行业等外，对升学、就业，甚至出国不应有太多的限制。这是因为乙肝的传染主要通过血液，偶尔通过唾液、精液传染，日常生活中一般接触是不太可能传染给别的人。至于结婚，只要对方抗HBs阳性，或HBsAg阳性，就不存在相互传染的问题。如果对方乙肝标志全部阴性，建议注射乙肝疫苗后再结婚。
"小三阳"患者为什么有的转氨酶正常,有的不正常
小三阳患者是指HBsAg(+), 抗HBc(+)和抗HBe(+)的患者。一般认为病毒复制不活跃, 传染性也不强。但乙型肝炎的肝损害,不取决于病毒是否活跃,而取决于患者本身的免疫系统如何对待乙型肝炎病毒。如果与病毒"和平共处", 就不会引起肝损伤, 肝功能就正常, 如果与病毒"作战", 就会在"作战"的同时,破坏肝细胞, 引起肝功能异常。如果在"作战"时,有效地清除了病毒,就会全愈。而在"作战"时,只破坏肝细胞,而对病毒的"杀伤"不利,就发展成为慢性肝炎,造成长期的肝功能异常。
e抗体阳性是不是一定好
e抗原阳性转变为e抗体阳性，可能有二种情况。一种是随着e抗原转阴,HBVDNA也转为阴性，继而肝功能也正常，一般认为这是一种预后良好，传染性没有的表现；另一种情况是e抗原转阴，e抗体转阳，但HBVDNA仍阳性，或者血中HBVDNA阴性但肝组织中的HBVDNA仍阳性，虽然病毒复制降低，但仍在复制，仍有传染性，肝脏仍在受损，病情仍在发展。因此，e抗体转阳并非都是好事。此外，还有一种变异的乙肝病毒，始终不出现e抗原阳性，但HBVDNA 持续阳性，说明病毒从未减少过，这种类型的乙型肝炎对人的危害更大。
乙型肝炎病毒携带者入学、就业时应注意的问题
乙型肝炎的传染性较弱, 一般接触不易被感染。因此乙型肝炎患者只要身体状况允许,是可以正常入学并参加工作的。但在选择职业时,要注意不宜从事餐饮,保育员等工作,其他职业均可参加。学校和单位也不应因为HBsAg(+)而拒绝接受这些人员入学或工作。
乙型肝炎病毒携带者与慢性乙型肝炎如何区别
乙型肝炎病毒携带者与慢性肝炎的主要区别在于前者没有或很少引起肝细胞的损伤,后者引起肝细胞的损伤并表现出肝功能异常及相应的临床症状。
亲吻和性交是否能传播乙型肝炎病毒
由于亲吻和性交都接触了病人的体液,因此是可以传播乙型肝炎病毒的。目前婚前检查要求检查HBsAg, 如一方HBsAg(+), 另一方则应进行乙型肝炎的预防接种。
怎样预防乙型肝炎发展成为肝硬化
乙型肝炎发展成为肝硬化的原因是,肝细胞不断的坏死。肝细胞坏死后,正常的肝组织发生"塌陷",机体的再生功能就会再生出一些纤维,来充填"塌陷"的部位。这是机体对坏死的组织的一种正常代偿功能,代表坏死部位的愈合,是好事。但是,如果肝细胞不断地坏死,肝脏内不断地再生纤维,这些纤维取代了大部分的肝组织,而它们又没有正常肝细胞的功能,肝脏变得又硬又小,这就形成了肝硬化。因此, 预防乙型肝炎患者发展为肝硬化的关键在于阻断肝细胞的坏死。这就是说要保证肝功能的正常。肝功能异常就是肝细胞坏死的标志。因此,乙型肝炎患者一定要定期检查肝功能,一旦肝功能异常就要及时治疗。另外,中药中的一些活血化瘀药(丹参等)滋补药(冬虫夏草、鳖甲等)均有软化肝脏,减少肝内纤维生成的作用。
乙肝病人能结婚生育吗
(1)急性乙肝恢复期、慢性迁延期肝炎、慢性活动性肝炎、以及活动性肝硬化在肝功能恢复正常后连续化验肝功能六个月及一、二年内均正常、乙肝病毒复制指标阴转，可以结婚。
(2)肝功能一贯正常，仅乙肝“两对半”呈“大三阳”的乙肝患者也暂不宜结婚或过性生活，若婚后才发生一方呈“大三阳”时，而对方“两对半”全阴性，待全阴性者产生足够的保护性抗体时，才有可能不被对方乙肝病毒感染。但只能保持3－5年。在一方病情复制指标未转阴前，应采取避孕措施（若患者为男方，应使用避孕套）。并积极采取抗病毒治疗。

(3)单项HBsAg阳性者，原则上可以结婚。但也非绝无传染性，应产生足够保护性抗体时再结婚。

(4)慢性表抗原HBsAg携带者若仅伴抗－HBe一项阳性者可以结婚。

(5)“两对半”中呈1.4.5或1.5阳性者，若抗－HBe滴度高，可能有传染性。等抗－HBe滴度明显下降后才结婚。

(6)即使只有HBsAg或抗－HBe单项阳性的患者，或者2.4.5或2.5阳性的患者，虽可结婚，但性生活应有节制。

(7)父母或家庭中如有明显肝硬化、肝癌遗传倾向的乙肝患者，婚后最好不要生育。

父亲为乙肝病毒携带者,对胎儿及子女的影响
父亲为乙肝病毒携带者,对胎儿及子女的影响有两种。一种是造成乙型肝炎病毒的传播。除母婴传播外,父亲也有垂直传播的可能,但机率远比母婴传播小。其传播途径主要是产后密切接触传播。另一种是把乙肝病毒的易感基因遗传给下一代,使其子女容易感染乙肝病毒。因此,父亲为乙肝病毒携带者,孩子也应注射乙肝疫苗。
http://..com/question/5674063.html

㈤ 免疫测定方法是怎样的

农药残留免疫分析方法（Immunoassay，IA）是以抗原与抗体的特异性、可逆性结合反应为基础，把抗体作为生物化学检测器对化合物、酶或蛋白质等物质进行定性和定量分析的一门技术。免疫反应涉及抗原与抗体分子间的立体化学、电荷、氢键和偶极间的综合应用，具有常规理化分析技术无可比拟的选择性和高灵敏度，常适宜于复杂基质中痕量组分的分析。自20世纪80年代初，Hammock等（1980）首先将免疫分析应用于农药残留分析以来，该法得到不断改进和发展，并涌现出诸多各具特色的免疫分析方法。如放射免疫分析法（RIA）、酶免疫分析法（EIA）、荧光免疫分析法（FIA）、化学发光免疫分析法（CLIA）、免疫金沉析法等。由于免疫化学分析技术具有简单、快速、灵敏及价廉的特点，能在野外和实验室内进行大批量的筛选试验等优点，已经成为农药残留分析领域中最有发展和应用潜力的痕量分析技术之一。

1．半抗原的设计与合成

农药相对分子质量一般小于1000，不具备刺激机体产生针对农药抗原决定簇的特异性，需与大分子物质连接后才能刺激机体产生抗体。在对某一农药进行免疫分析前，一般要对农药分子进行结构修饰或重新设计、合成出相应的半抗原。半抗原的结构对方法的检出限和选择性至关重要。Jung等认为半抗原的设计与合成一般要符合几个原则1：

1免疫竞争性反应的总体原则

（1）半抗原结构中应具备适当末端活性基团。如－NH2、－COOH、－OH、－SH等，可直接与载体（一般为蛋白质）耦联。

（2）理想的半抗原。与载体连接后应保证该特征结构能最大程度地为免疫活性细胞识别和结合，以制备出具有预期选择性和亲和性的抗体。因此，活性基团与载体之间应具备一定长度的间隔臂，一般为4～6个碳链长度（0.5～0.8nm），太短则载体的空间位阻影响免疫系统对半抗原的识别，过长则可能因氢键（某些极性间隔臂）或疏水交互作用（非极性间隔臂）使半抗原发生“折叠”。同时，间隔臂一般为非极性，且除供耦联的活性基团外，不应有其他高免疫活性的结构，如苯环、杂环等，以降低抗体对间隔臂的识别和间隔臂对待测物结构特征的影响；间隔臂还应远离待测物的特征结构部分和官能团，有利高选择性和高亲和性抗体的产生。

（3）半抗原应能最大限度模拟待测分子结构，特别是立体结构：半抗原设计还应考虑结构中尽量保留芳香环。据统计，半抗原结构中有芳香环形成的抗原具有较强的免疫原性，可使机体产生较强的免疫应答，平均成功率大约为1/3，而未含芳香环的半抗原成功率仅占1/11。

（4）半抗原的设计应考虑到有毒理学意义的代谢产物，以及待测物是单一品种或者某一类农药。设计时需相应地突出特定农药的结构或者一类农药中共有的结构特征。对应的抗体称为单一特异性抗体或者簇特异性抗体，而簇特异性抗体可用于多残留分析。

㈥ 黄曲霉产生的什么物质会对人体致癌

1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(who)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素b1最为多见,其毒性和致癌性也最强.
1,发现:上世纪60年代,在英国发生的十万只火鸡突发性死亡事件被确认与从巴西进口的花生粕有关.进一步的调研证明,这些花生粕被一种来自真菌的有毒物质污染,这些研究工作最终使人们发现了黄曲霉(aspergillus.flavus)产生的有毒代谢物质,黄曲霉毒素(aflatoxins).是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少.产生的黄曲霉毒素主要有b1,b2 ,g1 ,g2 以及另外两种代谢产物m1 ,m2.其中m1 和m2是从牛奶中分离出来的.b1,b2 ,g1 ,g2 ,m1 和m2的在分子结构上十分接近.
2,化学结构:黄曲霉毒素(aflatoxins),是一组化学结构类似的化合物,目前已分离鉴定出12种,包括b1,b2,g1,g2,m1,m2,p1,q,h1,gm,b2a和毒醇.黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素,b1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物.即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素).前者为基本毒性结构,后者与致癌有关.m1是黄曲霉毒素b1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物.黄曲霉毒素的主要分子型式含 b1,b2,g1,g2 ,m1,m2等.其中m1和m2 主要存在于牛奶中.b1为毒性及致癌性最强的物质.
《黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,m1,m2化学结构式》
黄曲霉毒素b1
黄曲霉毒素b2
黄曲霉毒素g1
黄曲霉毒素 g2
黄曲霉毒素m1
黄曲霉毒素m2
3,理化特性:在紫外线下,黄曲霉毒素b1,b2发蓝色荧光,黄曲霉毒素g1,g2发绿色荧光.黄曲霉毒素的相对分子量为312-346.难溶于,易溶于油,甲醇,丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定,但在强酸性溶液中稍有分解,在ph9-10的强酸溶液中分解迅速.其纯品为无色结晶,耐高温,黄曲霉毒素b1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.
二, 分布
黄曲霉毒素存在于土壤,动植物,各种坚果,特别是花生和核桃中.在大豆,稻谷,玉米,通心粉,调味品,牛奶,奶制品,食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素.一般在热带和亚热带地区,食品中黄曲霉毒素的检出率比较高,在我国,产生黄曲霉毒素的产毒菌种主要为黄曲霉,1980年测定了从17个省粮食中分离的黄曲霉1660株,广西地区的产毒黄曲霉最多,检出率为58%.总的分布情况为:华中,华南,华北产毒株多,产毒量也大,东北,西北地区较少.
三, 黄曲霉毒素中毒及其对人畜的危害
黄曲霉毒素对人和动物健康的危害均与黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成有关.黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构,是产生毒性的重要结构.研究表明,黄曲霉毒素的细胞毒作用,是干扰信息rna和dna的合成,进而干扰细胞蛋白质的合成,导致动物全身性损害(nibbelink,1988).黄光琪等(1993)研究指出,黄曲霉毒素b1能与trna结合形成加成物,黄曲霉毒素-trna加成物能抑制trna与某些氨基酸结合的活性,对蛋白质生物合成中的必需氨基酸,如赖氨酸,亮氨酸,精氨酸和甘氨酸与trna的结合,均有不同的抑制作用,从而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成,影响细胞代谢..
1,黄曲霉毒素与动物疾病
黄曲霉毒素中毒(aflatoxicosis)主要对动物肝脏的伤害,受伤害的个体因动物种类,年龄,性别和营养状态而异.研究结果表明,黄曲霉毒素可导致肝功能下降,降低牛奶产量和产蛋率.并使动物的免疫力降低,易受有害微生物的感染.此外,长期食用含低浓度黄曲霉毒素的饲料也可导致胚胎内中毒.通常年幼的动物对黄曲霉毒素更敏感.黄曲霉毒素的临床表现为消化系统功能紊乱,降低生育能力.降低饲料利用率,贫血等.黄曲霉毒素不仅能够使奶牛的产奶量下降,而且还使牛奶中含有转型的黄曲霉毒素m1和m2.据美国农业经济学家统计,由于食用黄曲霉毒素污染的饲料,每年至少要使美国畜牧业遭受10%的经济损失.在我国,由此而带来的畜牧业损失可能会更大.
2,黄曲霉毒素与人类的健康
人类健康受黄曲霉毒素的危害主要是由于人们食用被黄曲霉毒素污染的食物.对于这一污染的预防是非常困难的,其原因是由于真菌在食物或食品原料中的存在是很普遍的.国家卫生部门禁止企业使用被严重污染的粮食进行食品加工生产,并制定相关的标准监督企业执行.但对于含黄曲霉毒素浓度较低的粮食和食品无法进行控制.在发展中国家,食用被黄曲霉毒素污染的食物与癌症的发病率呈正相关性.亚洲和非洲的疾病研究机构的研究工作表明,食物中黄曲霉毒素与肝细胞癌变 (liver cell cancer,lcc) 呈正相关性.长时间食用含低浓度黄曲霉毒素的食物被认为是导致肝癌,胃癌,肠癌等疾病的主要原因.1988年国际肿瘤研究机构(international agency for research on cancer,iarc) 将黄曲霉毒素b1列为人类致癌物.除此以外,黄曲霉毒素与其它致病因素(如肝炎病毒)等对人类疾病的诱发具有叠加效应.
黄曲霉毒素bl的半数致死量为0.36毫克/公斤体重,属特剧毒的毒物范围(动物半数致死量<10毫克/公斤=它的毒性比氰化钾大10倍,比砒霜大68倍).它引起人的中毒主要是损害肝脏,发生肝炎,肝硬化, 肝坏死等.临床表现有胃部不适,食欲减退,恶心,呕吐,腹胀及肝区触痛等;严重者出现水肿,昏迷,以至抽搐而死.黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质.其致癌力是奶油黄的900倍,比二甲基亚硝胺诱发肝癌的能力大75倍,比3,4苯并芘大4000倍.它主要诱使动物发生肝癌,也能诱发胃癌,肾癌,直肠癌及乳腺,卵巢,小肠等部位的癌症.
四,检验检疫:
(一)部分国家检验检疫要求:
● 1995年,世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15ug/kg.
● 我国政府对各种食物中黄曲霉毒素的最高允许量见表2.
表2 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量
食 物 名 称
最高允许含量/(ug/kg)
玉米,花生,花生油,坚果和干果(核桃,杏仁)
玉米,花生仁制品(按原料折算)
大米,其他食用油(香油,菜籽油,大豆油,葵花油,胡麻油,茶油,麻油,玉米胚芽油,米糠油,棉籽油)
其他粮食(麦类,面粉,薯干),发酵食品(酱油,食用醋,豆豉,腐乳制品),淀粉类制品(糕点,饼干,面包,裱花蛋糕)
牛乳及其制品(消毒牛奶,新鲜生牛乳,全脂牛奶粉,淡炼乳,甜炼乳,奶油),黄油,新鲜猪组织(肝,肾,血,瘦肉)
20(黄曲霉毒素b1)
20(黄曲霉毒素b1)
10(黄曲霉毒素b1)
5黄曲霉毒素b1)
0.5(黄曲霉毒素m1)
● 美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量(指b1+b2+g1+g2的总量)不能超过15ug/kg.人类消费的牛奶中的含量不能超过0.5ug/kg,其他动物饲料中的含量不能300ug/kg.
● 而欧盟国家规定更加严格,要求人类生活消费品中的黄曲霉毒素b1的含量不能超过0.05ug/kg.
(二)检验检疫方法:
1,薄层层析法
薄层层析(thin-layer chromatography,tlc)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年,它被列为aoac (association of official agricultural chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能.
2,液相色谱法
液相色谱(liquid chromatography,lc)与薄层层析在许多方面具有相似性,二者互相补充.通常用tlc进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后,再用lc进行黄曲霉毒素的定量测定.
3,免疫化学分析方法
利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法,也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法(radioimmunoassay,ria),酶联免疫法(enzyme-linked of immunosorbent assay,elisa)和免疫层析法(immunoaflinity column assay,ica).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定.
(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-hplc法
免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果,但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素b1)含量,而且易出现假阳性结果,难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和hplc法)却能达到既定量准确又快速简便的要求.
免疫亲和柱的使用可以避免传统tlc和hplc的缺点,同时免疫亲和柱与tlc和hplc法结合可以大大提高工作效率,提高灵敏度和准确度.
黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的快速分析方法.它克服了tlc和hplc法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂,毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带,自动化程度高 ,操作简单,直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 (b1b2g1g2) 的测定,检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg.
黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的hplc法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高.
分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量.也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入hplc中,对黄曲霉毒素b1,b2,g1,b2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg.
(2) 酶联免疫吸附法:
1996年,nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便,敏感,特异,可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期,该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素b1.
原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.
(3) 微柱筛选法 可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2的总量.
原理 样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后,在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素b1,b2,g1,g2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量.
(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法
一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5—10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.
五,检测方法分析
薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法,由于其检测周期长,程序复杂,所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求.随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学,生物化学,分子生物学的不断发展,人们已创建了不少快速,简便,特异,敏感,低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法.而且以金标试纸为代表的这些方法已经被先进国家所广泛使用,引进和消化这些先进的方法是我们检测领域的当务之急.免疫亲和柱法优点很多,但由于检测费用过高,而无法普及.而一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法似乎更适用于我国,值得推广.

㈦ 免疫学的检测方法

免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫。

㈧ 乙肝免疫分析

乙肝表面抗体,乙肝E抗体,乙肝核心抗体阳性

属于既往感染,但已经被自身免疫系统清除,并产生乙肝抗体.