残留分析确证方法的特异性

Ⅰ 农药残留分析技术进展概况

农药残留分析技术进展概述

摘要:综述了目前农药残留分析的前处理技术和检测的几种方法。样品前处理中,固相萃取、超临
界流体萃取、基质固相分散萃取得到了迅速发展和广泛应用。超临界流体色谱、液相色谱—质谱联
用技术、免疫分析技术、直接光谱技术和生物传感器等检测方法具有广泛的应用前景。
关键词:农药残留;分析;前处理
中图分类号: S 481.8 文献标识码: A 文章编号: 1002-2767(2005)03-0027-03
Development Outline in Analytical Technique of Pesticide Resies
FENG Shi-de, WANG Bo, QU Hong-jie
(Heilongjiang August First Lond Reclamation University Daqing 163319)
Abstract:This article described the methods of sample pre-treatment and determination of pesti-
cide resies at present. Solid-phase extraction, supercritical fluid extraction, and matrix solid
-phase dispersion extraction were developed quickly and applied widely in sample pre-treat-
ment. The potentiality in the use of supercritical fluid chromatography, liquid chromatography-
mass spectrum , immunoassay, direct spectros technique and biosensor was great.
Key words:Pesticide resie; analysis; pre-treatment

农药的使用无疑大大提高了农作物的产量,但由此而产生的环境污染问题,已引起人们的高度重视。世界上许多国家都规定了食品、粮食中各种农药残留的限定量。加强对农药残留的监测和环境毒理研究,对于合理开发和正确使用农药,保护生态环境,保障人类健康,避免和减少不必要的农业损失等,具有重要的理论和实践意义[1]。近年来随着超高效农药的开发应用和待检样品的增加,对农药残留分析技术的灵敏度、特异性和快速性提出了更苛刻的要求。因此出现了一些新型的、先进的农药残留分析技术。本文综述了农药残留分析和检测的一些方法。
1 样品前处理技术
现代农药残留分析方法通常包括样品前处理和测定两部分,农药残留测定之前要有适合于各种样品的理化性质的萃取、净化、浓缩等预处理步骤,这些预处理过程往往在分析中起着主要作用。目前常用的提取、净化方法有漂洗、匀浆、索氏提取、超声波提取、液-液分配、柱层析、薄层层析等方法。90年代以来,一些新的样品前处理技术不断被引入农药残留分析中,这些新技术的共同特点是:节省时间,减轻劳动强度,节省溶剂,减少样品用量,提高提取或净化效率和提高自动化水平。目前,已报道或已取得广泛应用的新技术主要有:固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、超临界流体提取(SFE)、分子印迹合成受体技术(MISR)等。
1.1 固相萃取技术(SPE)
固相萃取法是一种基于液相色谱分离机制的样品制备方法,已广泛应用于农药残留检测工作。它根据液相分离、解析、浓缩等原理,使样品溶液混合物通过柱子后,样品中某一组份保留在柱中,通过再选择合适的溶剂把保留在柱中的组分洗脱下来,从而达到分离、净化的目的。SPE克服了液-液萃取技术(LLE)及一般柱层析的缺点,具有高效、简便、快速、安全、重复性好、便于前处理自动化等特点。根据柱中填料大体可分为吸附型(如硅胶、大孔吸附树脂等)、分配型(C8、C18、苯基柱等)和离子交换型。据待测农药性质、样品种类等选用合适的微型柱和淋洗剂及其它优化条件后,可使萃取、富集、净化一步完成[2]。
1.2 超临界流体提取(SFE)
超临界流体提取(SFE)是近几年发展起来的一种特殊分离技术[3]。SFE主要是以超临界流体代替各种溶剂来萃取样品中待测组分的萃取方法。目前最常用的超临界流体为CO2,它兼有气体的渗透能力和液态的分配作用,流出液中的CO2在常压下挥发,待测物用溶剂溶解后进行分析。超临界CO2无毒,分子极性比较小,可用于提取非极性或弱极性农药残留。也可以加入适量极性调节剂,如甲醇等来调节其极性,据此可最大限度地提取不同极性的农药残留而最低限度地减少杂质的提取。其特点是避免了使用大量的有机溶剂、提高萃取的选择性、减少了分析时间、实现操作自动化。SFE技术是当前发展最快的分析技术之一。
1.3 基质固相分散萃取技术(MSPDE)
基质固相分散萃取是1989年美国Louisiana州立大学的Barke教授首次提出并给予理论解释的一种崭新的萃取技术。其基本操作是将试样直接与适量反相填料(C1 4或C1 8)研磨、混匀得到半干状态的混合物并将其作为填料装柱,然后用不同的溶剂淋洗柱子,将各种待测物洗脱下来。MSPDE浓缩了传统的样品前处理中所需的样品均化、组织细胞裂解、提取、净化等过程,是简单高效的提取净化方法[3],适用于各种分子结构和极性农药残留的提取净化,在蔬菜、水果的残留农药检测中得到了广泛应用。
1.4 分子印迹合成受体技术(MISR)
分子印迹合成受体技术(MISR)原理是:首先使拟被印迹的分子或聚合物单体键合,然后将聚合物单体交联体再将印迹分子从聚合物中提取出来,聚合物内部就留下了被印迹分子的印迹。由于需要合成被印迹分子衍生物,使该项技术受到限制,因为有些化合物的分子无法进行衍生化。分子印迹技术可以用于药物、激素、蛋白质、农药、氨基酸、多肽、碳水化合物、辅酶、核酸碱基、甾醇、涂料、金属离子等各种化合物的分离工作。
2 检测方法
2.1 气相色谱法(GC)
气相色谱法是一种经典的分析方法。利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同,当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时,组份就在其中的两相间进行反复多次分配,经过一定的柱长后,便彼此分离,按顺序离开色谱柱进入检测器,产生的离子流讯号经放大后,在记录器上描绘出各组份的色谱峰。由于其具有操作简便、分析速度快、分离效能高、灵敏度高以及应用范围广等特点,目前农药残留物检测70%采用气相色谱法来进行。使用气相色谱法,多种农药可一次进样,得到完全的分离、定性和定量,再配置高性能的检测器,使分析速度更快,结果更可靠。目前气相色谱法多采用填充毛细管。
2.2 高效液相色谱法(HPLC)
高效液相色谱法也是一种传统的检测方法。它可以分离检测极性强、分子量大的离子型农药,尤其适用于对不易气化或受热易分解农药的检测。近年来,采用高效色谱柱、高压泵和高灵敏度的检测器、柱前或柱后衍生化技术以及计算机联用等,大大提高了液相色谱的检测效率、灵敏度、速度和操作自动化程度,现已成为农药残留检测不可缺少的重要方法。
2.3 超临界流体色谱(SFC)技术
超临界流体色谱(SFC)是以超临界流体作为色谱流动相的分离检测技术[1]。可以使用各种类型的较长色谱柱,可以在较低温度下分析分子量较大、对热不稳定的化合物和极性较强的化合物,它综合利用了气象色谱和高效液相色谱的优点,克服了各自的缺点,可以与大部分GC和HPLC的检测器相连接,如FID、FPD、NPD以及MS等连用[4]。这样就极大地拓宽了其应用范围,许多在GC或HPLC上需经过衍生化才能分析的农药,都可以用SFC直接测定。
2.4 直接光谱分析技术
近红外衰减全反射光谱(NearIS-ATR)和表面增强拉曼光谱(SERS)使光谱分析的灵敏度提高102~107倍。这些快速直接的光谱技术,只需要极少量的样品,具有很大的应用潜力。一系列激光光谱技术,如激光拉曼光谱等使光谱分析的灵敏度几乎达到极限-一个分子或原子的水平。这将为开发高灵敏度的检测器提供可能的技术基础。目前,这些灵敏度极高的光谱技术还需要进一步研究开发才能进入广泛应用阶段。
2.5 毛细管电泳(CE)
毛细管电泳技术是在电泳技术的基础上发展的一种分离技术。其工作原理是使毛细管内的不同带电粒子(离子、分子或衍生物)在高压场作用下以不同的速度在背景缓冲液中定向迁移,从而进行分离。根据样品组分的背景缓冲液中所受作用的不同,CE又被分为毛细管区带电泳(CZE)、毛细管凝胶电泳(CGE)、等电聚焦(IEF)、胶束电动色谱(MEKC)、等速电泳(ITP)等几大类。自80年代Jorgenson把E应用于分析化学以来,这一技术已发展成为分离科学中最活跃的领域之一。它具有灵敏度高、耗资少、样品消耗量很小(每次进样只是纳升级)、分离柱效高、使用方便等优点,非常适用于那些难以用传统的液相色谱法分离的离子化样品的分离与分析,其分离效率可达数百万理论塔板数。目前,毛细管电泳尚缺乏灵敏度很高的检测器。因此,只有研究开发灵敏度更高的检测系统,该技术的优势才能充分发挥出来。
2.6 液相色谱-质谱联用技术(LC/MS)
液—质联用技术(LC-MS)是将液相色谱与质谱串联成为一个整机使用的检测技术。用来分析低浓度、难挥发、热不稳定和强极性农药。LC/MS先后产生四种接口技术:热喷雾(TSP)、粒子束(PB)、电喷雾电离(ESI)、大气压化学电离(APCI)。现在,一种内喷射式和粒子流式接口技术将液相色谱与质谱联接起来,已成功地用于分析对热不稳定,分子量较大,难以用气相色谱分析的化合物。具有检测灵敏度高、选择性好、定性定量同时进行、结果可靠等优点。LC-MS对简单样品可进行分析前净化并具有几乎通用的多残留分析能力,用于对初级监测呈阳性反应的样品进行在线确证,其优势明显。尽管LC/MS仪器价格昂贵,液相色谱和质谱的接口技术尚不十分成熟,但它仍是一种很有利用价值的高效率、高可靠性分析技术。
2.7 免疫分析法(IA)
免疫分析法是基于抗原抗体的特异性识别和结合反应为基础的分析方法[5]。分子量大的农药可以直接作为抗原进入脊椎动物的体内产生免疫应答,从而得到可以和该农药分子特异性结合的抗体;分子量小的农药(分子量<2500)一般不具备免疫抗性,不能刺激动物产生免疫反应。将农药小分子以半抗原的形式通过一定碳链长度的分子量大的载体蛋白质(通常使用牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、钥孔血蓝蛋白、卵清蛋白)用共价键偶联制成人工抗原,使动物产生免疫反应,产生识别该农药并与之特异性相结合的抗体。通过对半抗原或抗体进行标记,利用标记物的生物、物理、化学放大作用,对样品中特定的农药残留物进行定性、定量检测。免疫分析法被列为90年代优先研究、开发和利用的农药残留分析技术,美国化学会将免疫分析与气象色谱、液相色谱共同列为农药残留分析的支柱技术[6]。免疫分析法具有快速、简单、灵敏和选择性高等优点,目前已广泛应用于粮食、水果、蔬菜、肉、奶、水和土壤中农药残留的检测。根据采用的检测手段不同,可分为放射免疫法、荧光免疫法、酶免疫法、流动注射免疫分析法等,其中以酶免疫法应用最为广泛[7]。
2.8 生物传感器(Biosensorand)
生物传感器(Biosensorand)是由一种生物敏感膜和电化学转换器两部分紧密配合,对特定种类的化学物质或生物活性物质具有选择性和可逆响应的分析装置。它由识别元件、信号转移和信号传递电路组成,其特点是集生物化学、生物工程、电化学、材料科学和微型制造技术于一体,是一个典型的多学科交叉产物。按其生物功能,可分为酶传感器(En-zyme Biosensor,包括电位型和电流型)、免疫传感器(Immunosensors)、微生物传感器(Microbial sen-sor)[8]。具有微型化、响应速度快、样品用量少并可以插入生物组织或细胞内的特点,可实现超微量在线快速跟踪分析,在农药残留分析上得到了广泛的应用。
2.9 实验室机器人
实验室机器人现已商品化,但在农药残留量分析和环境监测方面的应用还处于起步阶段,主要是因为机器人工作程序的变更缺乏灵活性和实验室检测方法缺乏标准化所造成,另外机器人系统动作缓慢,一般要求宽阔的空间。当实验室机器人变得更方便、灵活,实验方法也更加标准化时,它的使用将会增加。
3 结语
农药残留分析是一门综合性强、涉及面广的分析科学。检测方法应具备简便、快捷、灵敏度高的特点,根据检测目的、待测农药性质和样本的种类等采用符合要求的方法。新的分析技术将要求有细胞化学、发酵化学、免疫化学和多肽排列结构等方面学科知识的支持。随着科学技术的不断发展,残留分析技术也正在不断更新、完善和迅速发展

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Ⅱ 根据检测原理不同,食品中抗生素残留的检测方法可分为哪几种

分为四种：酶抑制率法 分光光度法 胶体金法 滴定分析法

酶抑制率法

在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。

分光光度法

不同的物质由于其分子结构不同，对不同波长光的吸收能力也不同，因此具有其特有的吸收光谱。即使是相同的物质由于其含量不同，对光的吸收程度也不同。标准曲线法就是利用这一特性来测定物质含量，先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测定出它们的A值，以A值为横坐标，浓度为纵坐标，作标准曲线。在测定待测溶液时，操作条件应与制作标准曲线时相同，以待测液的A值从标准曲线上查出该样品的相应浓度。

胶体金法

将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，产生显色反应。当光源照射到检测带，反射光被收集并转化为电信号，根据信号的强弱即可判断被测物质的阴阳性。

滴定分析法

滴定分析法是将一种已知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质的溶液中，直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反应为止，根据试剂溶液的浓度和消耗的体积，计算被测物质的含量。

Ⅲ 农药残留的检测方法有几种

农药残留检测方法，总的来说可以分为常规检测方法和速测方法。常规的检测方法有气象色谱、凝胶色谱及薄层色谱法。这些方法都是利用农药在不同载体中的分配系数不同而得到分离，从而定性和定量来检测农药的种类及含量。速测方法主要有速测卡法和酶抑制率法两种。无论是速测卡法还是酶抑制率法，其都是利用酶活性被抑制原理。

使用农药残留检测仪器：生化分析受温度影响极大，要求在恒温下进行预反应，农药残留速测仪从功能上来看，它不但具有测试功能，而且还有恒温水浴，定时等功能。保证预反应条件、提高精确度;另外，使用仪器很方便，不用调整波长，只需按键就能选择自己所需的测试波长。

Ⅳ 农药残留有危害吗怎么检验农药残留

农药残留有危害吗？怎么检验农药残留？？
目前，农药残留快速检测方法种类繁多，究其原理来说主要分为两大类：生化测定法和色谱检测法。其中生化测定法中的酶抑制率法由于具有快速、灵敏、操作简便、成本低廉等特点，被列为国家推荐标准方法，已成为对果蔬中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留进行现场快速定性初筛检测的主流技术之一，得到了越来越广泛的应用。衍生物、代谢物、降解物和杂质的总称。造成蔬菜农药残留量超标的主要是一些国家禁止在蔬菜生产中使用的有机磷农药和氨基甲酸酯类农药，如甲胺磷、氧化乐果、甲拌磷、对硫磷、甲基对硫磷等。农药残留的检测方法，食用含有大量高毒、剧毒农药残留引起的食物会导致人、畜急性中毒事故。长期食用农药残留超标的农副产品，虽然不会导致急性中毒，但可能引起人和动物的慢性中毒，导致疾病的发生，诱发癌症，甚至影响到下一代。
农药残留的检测方法，化学速测法，主要根据氧化还原反应，水解产物与检测液作用变色，用于有机磷农药的快速检测，但是灵敏度低，使用局限性，且易受还原性物质干扰。农药残留的检测方法，免疫分析法，主要有放射免疫分析和酶免疫分析，最常用的是酶联免疫分析（ELISA），基于抗原和抗体的特异性识别和结合反应，对于小分子量农药需要制备人工抗原，才能进行免疫分析。农药残留的检测方法，酶抑制法，是研究最成熟、应用最广泛的快速农残检测技术，主要根据有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酶的特异性抑制反应。农药残留的检测方法，活体检测法，主要利用活体生物对农药残留的敏感反应，例如给家蝇喂食样品，观察死亡率来判定农残量。该方法操作简单，但定性粗糙、准确度低，对农药的适用范围窄。

Ⅳ 农药残留物的分析方法

国外医学卫生学分册
1998年 第25卷 第3期
食物中农药残留分析方法的研究进展
中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所 (北京 100050)
赵云峰综述 陈建民1 王绪卿审校
摘要 本文综述了近年来农药残留分析的前处理技术和测定方法的研究进展,着重介绍固相萃取法、凝胶渗透色谱法和超临界流体萃取法等前处理技术及气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法、超临界流体色谱法等色谱测定方法以及毛细管电泳和生物技术在农药残留分析中的应用。
关键词 食物 农药残留 多残留分析方法

食品的农药残留分析是在复杂的基质中对目标化合物进行鉴别和定量。由于食品中农药残留水平一般在mg/kg～μg/kg之间,因此要求分析方法灵敏度高、特异性强。对于未知农药施用史的食物样品,经常采用多组分残留分析的方法。由于各类食物样品组成成分复杂,而且不同农药品种的理化性质存在差异,因而没有一种多组分残留分析方法能够覆盖所有的农药品种。
近年来,农药残留分析方法趋向于选择性强、分辨率高和检测限低以及操作简便。主要表现在由单一种类农药多残留分析向多品种农药多残留分析发展,而且对农药的代谢物、降解物以及轭合物的残留分析给予了更多的关注[1]。本文简要综述近几年来农药残留分析技术及方法学的进展。
1 食物中农药残留的特点及样品前处理技术食物样品组成复杂,基质成分与目标物含量相差悬殊,且存在农药的同系物、异构体、降解产物、代谢产物以及轭合物的影响。由于环境的迁移作用,环境中残留的各种化学污染物也可能在农作物组织中蓄积,从而增加了食品农药残留分析的难度。农药残留测定之前要有适合于各种食品和目标物理化性质的萃取、净化、浓缩等预处理步骤,这些预处理过程往往在分析中起着主要作用。食物样品中农药提取、净化等前处理方法有其特殊性,对于不同性质样品中的不同目标物需要采用不同的前处理技术。
食品农药残留分析中,食物样品的净化要尽可能的除去与目标物同时存在的杂质,以减少色谱图中的干扰峰,同时避免杂质对色谱柱和检测器的污染。食物样品的净化,尤其是含脂质较多的食物样品净化,一直是分析工作者研究的重点,除采用常规的吸附柱分离、液-液分配、共沸蒸馏等净化措施外,更多的采用现代分离分析技术。
在农药残留分析技术发展的历程中,对气相色谱(gc)和液相色谱(lc)等各种仪器的分析速度、分辨能力和自动化程度进行了大量的研究,相比之下,对样品的制备技术关注不够。在很长的时间内,一直沿用经典的索氏提取、液-液分配、florisil、硅胶、硅藻土及氧化铝柱色谱、共沸蒸馏等技术,尽管这些技术不需要昂贵的设备和特殊仪器,但却是整个分析过程中最费时费力、最容易引起误差的环节,且大量有机溶剂的使用,造成了对环境的污染。进入90年代后,样品萃取净化技术有了较快的发展,最受普遍重视的如固相萃取法(spe)、凝胶渗透色谱法(gpc)及超临界流体萃取法(sfe),得到不断改进和应用。为此,样品前处理技术的研究成为分析化学领域中最为活跃的前沿课题之一[2]。
1.1 固相萃取法自美国waters公司的sep-pak投放市场后,固相萃取法(spe)技术取得很大进步,各种c8、c18、腈基、氨基和其它特殊填料的微柱相继得到应用。schenck[4]用florisil微柱净化,测定食物中有机氯农药(ocs)残留;wan[5]简化了植物油中ocs残留分析时硅胶柱的净化方法,减少了有机溶剂的使用;armishaw[6]比较了动物脂肪ocs残留测定时,gpc、吹扫共馏、florisil柱色谱的净化;bentabol[7]用半制备c18柱分离食用油中的ocs和有机磷农药(ops)。gillespie[8]用多柱spe净化植物油和牛脂中的ocs及ops,油或脂质样品用己烷溶解后,首先经diatoma-ceousearth(extrelutqe)柱和c18键合硅胶(ods)微柱处理,洗脱液分为两部分,一份浓缩后,丙酮溶解,用gc-火焰光度检测器(fpd)测定ops,另一份经氧化铝微柱处理,进一步除去脂质,用gc-电子捕获检测器(ecd)测定ocs。
1.2 凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法(gpc)是一种快速的净化技术,应用于农药残留分析中脂类提取物与农药的分离,是含脂类食物样品农药残留分析的主要净化手段。stienwandter[9]总结了凝胶色谱在农药残留分析中的应用;李洪波[10]用交联聚苯乙烯凝胶(ngx-01)净化食物样品中ops;李怡[11]用bio-beadss-x3净化乳品中氨基甲酸酯类农药(nmcs)。chamberlain[12]采用10%乙酸乙酯和石油醚洗脱,以bio-beadss-x3解决了脂肪和油样的分离。hong[13]用溶剂提取,bio-beadss-x3净化,gc-ecd-氮磷检测器(npd)测定大豆和大米样品25种农药,并用gc-ms-选择离子监测(sim)确证。florisil、氧化铝及硅胶柱主要用于非脂质食品净化处理,采用常规的净化方法,不能保证极性农药ops在脂质性食品中的定量回收。sannino[14]用bio-beadss-x3的gpc净化方法,分析了7个脂质性食品中39种ops及其代谢产物,并进一步进行gc-ms-sim确证和定量。hop-per[15]用gpc净化,gc测定了谷物中ops、ocs及拟除虫菊酯;holstege[16]采用凝胶渗透色谱法净化,进行了43种ops、17种ocs及11种nmcs多残留分析。
1.3 超临界流体萃取法继超临界流体色谱(sfc)之后,90年代出现了超临界流体萃取技术(sfe)。常规分析时,需要用有机溶剂提取样品,提取的样品量为50～100g,在进行溶剂浓缩的过程中,可能使易挥发的农药损失或使某些农药降解。sfe的样品用量少,样品提取在低温下进行,避免了农药的损失及降解,大大提高了分析方法的可靠性,并使得分析时间缩短,排除了有机溶剂的污染。lehotay[17]建立了食品中农药多残留分析的sfe方法;snyder[18]在ocs和ops测定中,比较了用3%甲醇为改性剂的co2净化与索氏提取法的效率。对于含水量高的样品,sfe的使用受到限制,为了提高sfe的使用效率,采用冻干样品和混合样品,以吸收水分。valverde-garcia[19]用硫酸镁为干燥剂吸收样品中的水分,以sfe提取甲胺磷;用无水硫酸镁制备蔬菜样品(硫酸镁∶样品=5∶7),用sfe提取辣椒和西红柿中非极性和中极性农药。sfe是食品农药多残留分析中具有发展前景的新技术,可以替代溶剂提取方法,但在常规分析中还未得到广泛应用。
2 测定方法色谱法仍是农药残留分析的常用方法。对于挥发性农药常用gc测定;对于挥发性差、极性和热不稳定性的农药则采用lc测定。目前,在农药残留分析中使用的方法有gc、高效液相色谱法(hplc)、气相色谱-质谱法(gc-ms)、液相色谱-质谱法(lc-ms)、sfc及毛细管电泳法(ce)和酶联免疫吸附测定法(elisa)等。fodor-csorba[20]综述了食物中农药分析的色谱方法,概括了薄层色谱法(tlc)、gc、sfc及hplc在食物样品分析中的应用;leim[21]总结了脂类食物中有机农药的分析方法;sharp[22]总结了谷物中ops、拟除虫菊酯和nmcs的提取、净化及测定方法;torres[23]总结了水果、蔬菜中农药残留的测定方法;宫田晶弘[24]用gc、gc-ms-电子轰击源(ei)及gc-离子阱质谱(itms)-化学电离源(ci)测定苹果、香蕉、小麦及大米中的41种ops、23种nmcs,并对三种方法进行了比较。色谱法在农药残留分析中发挥了重要的作用。
2.1 gc法和gc-ms法以非极性或弱极性为固定相的毛细管柱gc得到广泛使用,取代了传统的填充柱gc。gc-ms和gc-ms-ms联用技术日臻成熟,质谱法已成为农药残留分析的常用方法。由于串联质谱(ms-ms)可以减少干扰物的影响,提高仪器的灵敏度,所以ms-ms是化合物结构分析及确证的有效手段。由于gc-离子阱的串联质谱用于农药残留分析时,可得到fg水平的灵敏度,所以离子阱技术将是农药残留分析发展的趋势。lehotay[25]用sfe提取,gc-itms分析了水果、蔬菜中ocs、ops、氨基甲酸酯类农药(mcs)、拟除虫菊酯及其它农药,共46个品种。py-lypiw[26]用gc-单离子检测(msd)分析了18种ocs,最低检出量为10μg/kg;valaerd-garcia[27]用gc-msd检测了蔬菜中噻嗪酮的残留;fillion[28]用乙腈提取水果、蔬菜样品,盐析分层,活性炭柱净化,用gc-msd分析了189种农药残留,并用hplc的荧光检测法测定了10种氨基甲酸酯农药残留。hogendoorn[29]用改良方法分析了2000个水果、蔬菜样品中125种农药。miyahara[30]用sfe净化,gc-itms测定了蔬菜中五氯硝基苯(pcnb)及代谢物的残留;采用sfe与gc-itms联用检测蔬菜中六氯苯(hcb)的残留。但是,gc-itms用于常规的定量测定还有待进一步发展。
2.2 hplc法及lc-ms法对于受热易分解或失去活性的物质,不能直接或不适合用gc分析。正是由于许多有机化合物的强极性、热不稳定性、高分子量和低挥发性等原因,从而推动了液相色谱技术的进步。
农药残留分析中,通常使用c8及c18反相高效液相色谱法,而以硅胶、腈基、氨基为极性键合相的色谱柱则用于特定的分析;短柱或小口径柱可提高分析速度。除采用固定波长或可变波长的紫外检测器外,二极管矩列紫外检测器和质谱检测器可用于结构鉴定。
hplc与sfe联用可以提高分析方法的选择性,并使净化与分析过程结合,减少中间步骤造成被分析组分的丢失。hplc与ms联用研究起步于70年代,与gc-ms相比,lc-ms的衔接更为复杂,目前lc-ms联用已出现多种接口方式,如电喷雾接口(es)、热喷雾接口(ts)、离子喷雾接口(is)、大气压化学电离接口(apci)以及粒子束接口(pb)。lc与快原子轰击质谱(fab-ms)以及傅立叶变换红外光谱联用技术(ftir)在农药残留分析中也得到应用。
hplc和lc-ms广泛应用于不易挥发及热不稳定化合物的分析,是农药残留定性、定量分析的有效手段,尤其是氨基甲酸酯农药(mcs)的检测。yang[31]总结了nmcs残留分析的进展;krause[32]建立了氨基甲酸酯的荧光测定法,食物样品用甲醇提取,乙腈-二氯甲烷液液分配,活性炭-celite柱净化,反相lc分离,邻苯二醛衍生,检测限为5～50μg/kg,结果用ms确证。seiber[33]采用perfluorracyl衍生,分析了谷物中的氨基甲酸酯;lau[34]用trifluoroacetyl衍生分析了谷物中的混杀威;bakowski[35]用heptafluo-robutyryl衍生,用gc-eims测定了肝组织中10种苯基-n-甲基氨基甲酸酯;ali[36]对牛肉、猪肉和家禽组织的氨基甲酸酯进行分析。liu[37]等用lc-ms对水果、蔬菜中的涕灭威、增效砜等19种农药进行检测,检测限为0.025～1mg/kg。newsome[38]比较了lc-apci-ms和lc-柱后衍生荧光法测定食品中nmcs,在10～100μg/kg范围内,两种检测器的检测结果良好,但由于两种均为非特异性检测器,都存在基质干扰,为了准确测定含量,应使用高分辨的ms进行确证。
2.3 sfc方法sfc是以超临界流体为流动相的色谱方法。超临界流体既具有液体的强溶解性能,适合于分离挥发性差和热不稳定的物质;又具有气体的低粘度和高扩散性能,传质速度快,使得分析速度提高;同时,sfc可以使用gc或hplc的检测器以及与ms、傅立叶变换红外光谱仪(ftir)联用。毛细管超临界流体色谱(csfc)的进展,促进了sfc技术的进步。csfc-ms是近年来发展的联用技术,由于csfc克服了gc和lc的不足且具有二者的优点,所以csfc-ms联用较gc-ms和lc-ms联用有更多的优越性。csfc-ms主要用于大分子量、热不稳定的复杂混合物分析,尤其对热不稳定的物质,不能用gc直接分析,而lc的选择性和灵敏度又不够,如采用csfc-ms,可较方便地分离检测。农药中含有s、p等杂原子时,极性较强,用gc和lc难于分析,痕量分析尤为困难。采用cs-fc结合选择性强的检测器,如fpd、npd、ecd等,是农药痕量分析的理想方法。在co2中添加1%甲醇作为改性剂,使极性农药得到很好地分离,消除了色谱峰的拖尾。但是农药残留分析中,sfc主要用于非极性或弱极性的物质,如何分析极性物质,将是今后的研究方向[39]。
2.4 tlc方法tlc无需特殊设备,简便易行,可同时分析多个样品,多用于复杂混合物的分离和筛选。tlc除用特殊的显色剂观察斑点颜色和用rf值定性外,与其它技术的联用不仅可以定性,而且可对样品中被分离的一种或多种成分进行定量分析。80年代发展起来的高效薄层色谱法(hptlc)与扫描技术结合,是一种易于建立和掌握的半定量技术。欧盟国家采用自动化多通道展开技术,用hptlc定量筛选了饮水中256种农药残留。
2.5 ce方法由于ce具有分离效率高、快速、样品用量少等特点,近年来得到了迅速发展,各种分离模式相继建立,高性能的商品仪器不断推向市场。对于无电荷的分子,开发了胶束电动色谱法(mekc),拓宽了ce的应用范围。毛细管电泳与质谱联用(ce-ms)可用于谷物和其它基质中带电荷基团的农药及其代谢物残留检测。ce可与原子分光光度法联用[2],如与原子吸收分光光度计(aas)、电感耦合等离子体-原子发射光谱仪(icp-aes)和icp-ms联用。cancalon[40]综述了ce和ce-ms在农药残留分析中的应用。
2.6 生物技术生物技术在农药残留分析中的应用不断增加,尤其是乳制品工业[41]。生物技术包括免疫测定法、生物测定法和生物传感器技术及免疫亲和色谱法。免疫测定法取决于抗体与底物的相互作用,目标物与抗体结合后,酶促反应产生颜色变化,用比色法测定目标物浓度。kramer[42]总结了生物传感器和免疫传感器的构件、技术特点及其应用。
抗体与抗原的特异结合为农药残留分析提供了技术保证,许多市售试剂盒的应用,使免疫测定成为各类农药残留检测的有效手段,使农药残留分析时间缩短,操作人员劳动负荷量减少。免疫方法常与其它技术联用[43],如elisa与传统的提取和净化方法、sfe、hplc及gc-ms联用;免疫亲和色谱法与ms联用以及在机器人辅助下自动的免疫化学方法都有应用报道。有报道[41]用sfe-elisa分析了大麦中杀螟硫磷、甲基毒死蜱及甲基嘧啶磷;用hplc-elisa测定水果、蔬菜中噻菌灵。由于免疫分析成本低、快速、可靠,且传感器灵敏度高,并有自动化装置,因而广泛用于农药残留的监测及人与环境接触等研究。
3 结 语
随着各种新技术的应用,农药残留分析方法日趋系统化、规范化,并向小型化、自动化方向发展。同时,由于在线联用技术可避免样品转移的损失,减少各种人为的偶然误差,因此将是农药残留分析方法研究的重点。

Ⅵ 兽药残留检测方法

（1）按照分离或者检测原理分类①理化分析方法，包括波谱法、色谱法及其联用技术，如高效液相色谱（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）、气相色谱-质谱法（CC-MS）、薄层色谱法（TLC）、毛细管电泳（CE）等。

②免疫分析法，如放射免疫测定法（RIA）、酶免疫测定法（EIA、ELISA）、荧光免疫测定法（FIA）等。

③生物测定法，如微生物学测定法（microbiologyassays）、放射受体测定法（radioreceptorassays）等。

（2）按照被测组分数量分类单组分残留分析法（singleresieanalysis）、多组分残留分析法（multi-resieanalysis）。

（3）按分析目的分类①筛选分析方法（screeningmethods）：一般提供被测组分是否存在或者浓度是否超过最高残留限量的初步信息。对筛选分析方法只要求具备半定量和一定的定性能力，但必须灵敏度高、过程简单、分析速度快。

②常规分析方法（routinemethods）：要求具有准确的定量分析能力，但不一定具有准确的定性能力。

③确证分析方法（confirmatorymethods）：不仅要求高的灵敏度，而且特别要求具有准确的定性分析（给出被测组分的结构信息）和定量分析能力。残留组分绝对量极小的测定只能用色-质联用确证方法。

Ⅶ 磺胺类的检测方法

是将2种或2种以上的分析方法联合使用，以达到高灵敏度、高精确度的要求。用于动物性食品中磺胺类药物残留检测的联用方法主要有气相色谱、串联质谱(GC MS)和高效液相色谱 串联质谱(HPLC MS)。GC/MS法是残留分析常用的确证方法，不但能提供结构信息,而且灵敏度高。检测猪肉中的磺胺类药物快速、准确，方法的最低检出限为0.1-0.5g/kg。由此可见此法是一种灵敏度高、选择性好、特异性强、快速的分析确证磺胺类药物残留的方法。但是其仪器设备的购置和运行费用较高成为常规分析方法尚有待进一步研究。

Ⅷ 农药有效成份分析方法的线性相关性测定

1．范围
准则
主要适用于制剂的分析方法，也可用于原药中有效成份的分析，部分可用于物理方法“见3、（2）②节”，但不适用于残留或微量分析。
本准则推荐的方法，如专用于要提交给PSD研究时，应达到欧共体统一原则草案中对制剂分析确认的主要技术要求。
2．定义
（1）误差：本准则中确认的误差类型有： ①偶然误差：此类误差通常微小，由偶然误差导致的结果，多数接近于平均值范围，换句话说，由它们决定方法的重复性或再现性。 ②系统误差：此类误差使所得结果偏离，其平均值高于或低于实际值（如方法中某些误差可导致不正确结果）。
（2）精密度：精密度是偶然误差的基度，可用重复性和再现性表示，此类术语在ISO5725－1986E中均有说明。 ①重复性指采用相同方法，在同一实验室用同一试验物质，同一操作者使用同一设备，在短时间间隔内，在相互独立试验中所获得结果的一致性。 ②再现性指采用相同方法，在不同实验室用同一试验物质，由不同操作者使用不同设备所得试验结果的一致性。
3）准确度：方法的准确度指所得结果与分析样品中真值的符合程度。
4）统性：试验方法的线性指在一定范围内所得试验结果与分析样品浓度（剂量）成比例的性能。
5）特异性：方法特异性定义为对所分析的特定样品产生的特定信号。
3．方法确认
可以认为大多数农药制造商具有确认分析方法的措施，但制造商责任在于保证这些措施能遵守本准则的技术要求。 应提出以下几方面资料对方法进行确认：
在方法中被分析物质（和内标物，如适宜）响应的线性。 分析方法精密度的评价。 分析方法准确度的证明。 赋形剂中无干扰物的证明。 被测定物质种类的确定。 某方法被广泛使用时，虽然其再现性很重要，但不必将其评价收入准则，如需要可通过全面的CIPAC或AOAC协作研究作最好评价。1）线性：分析物质响应的线性范围，至少应大于分析物标明浓度的±
20％。至少测定3个浓度，每个浓度测定两次，应附上此线性图、斜率、截距和相关系数等数据。测得的斜率可证明响应与分析物浓度之间有明显的相关性。在标明值±20％范围内，其结果不应与线性有显着偏离，即相关系数（y）应＞0.99，否则提交方法必须同时提供如何保持本方法有效性的说明，如故意使用不成线性响应的方法，也必须提出解释。（2）精密度： ①化学分析：在此类准则中要求对重复性简单评价即可。至少作5次重复样品的测定，同时简单评价其结果，包括相对标准偏差RSD％。如认为合适，对测定中偏离数据可用Dixons或Crubbs试验检验，但要舍去某些结果时，必须明确指出，并应设法解释为何产生偏离的数据。数据结果的合格性应以修改的Horwitz公式为依据： RSDy＜2（1－0．51ogc） X 0.67
式中C一样品中分析物浓度，以小数计。 Horwitz公司的推导和使用实例列于（附件1）中。
②物理化学性能测定：当进行物理或物理化学性能测定时，使用官方方法（如 CIPAC或oECD）即不需要再予确认。本原则亦适用于对此类方法略有改动的情况，如使用其他方法时，必须测定其重复性，但无须遵守Horwitz公式。（3）准确度：评价方法的准确度，至少需要4个已知被分析含量实验室制备的“合成的”制剂进行测定，其结果可用students t统计或附件Ⅱ中其他适用方法检验。（4）非分析物质的干扰：在评价准确度时，通常包含非分析物质的干扰，因赋形剂中的任何干扰物均会导致分析方法出现系统误差。然而分析时应同时测定不带赋形剂的空白样品，或证明其无干扰，如有干扰时可测定数量，样品色谱图和其他结果均应附上。当原药有效成份中有特定杂质时，必须证明在相同分析条件下此类杂质的响应值不应大于被分析物或内标总峰高的3％。如有此类偏离，必须在提交报告中说明其数据是否已经校正。（5）特异性：方法特异性应以被分析物质的特点来确定，通常对此类化合物进行质谱测定，如使用GC／MS，LC／MS的Th极管陈列检测器或峰收集后使用质谱测定。在使用色谱法测定时，通常以此作为鉴别有效成份或确认分析标准品的方法。当制剂分析是根据其中一种方法时，不需要重复此项工作。 对金属创新的色谱法，必须确定其特异性，如使用质谱法，则可由谱带来推断。实际被测定物质的种类应在提交仲裁时阐明，如果不可能，必须解释其理由，供讨论时考虑。 答案补充 4．注意事项
（1）检测系统响应的线性范围通常由所用仪器决定，方法使用不同系统时，应重新验证线性范围。
（2）如提交方法的性能指标低于准则中规定的最小数值，则必须提出充分理由，解释为何使用此方法。
（3）对方法确证有用的其他数据亦应提出，如再现性的评价（由协作研究获得）或为使方法完善而有微小变动的报告。
（4）对多种制剂适用性的确认数据：确认数据一般为针对某一特定的制剂，但制造商可能生产许多类似的制剂，并可能使用同一分析方法，其交互使用规则为： ①制剂中应含有相同（或很类似）助剂，改变助剂性质时，应检验可能的干扰。 ②制剂在物理化学性能上不应有显着区别（如P”值）。 ③在测定溶液中，有效成份浓度必须保持在标明的线性范围内。 ④有关助剂浓度的任何变化，不应产生明显干扰。 提交进行交互使用的方法，应考虑以上几点。（5）提出确认的任何方法，只能使用经过认证过的参比物质（或来源于参比物质）作为标准品， 答案补充 本要求不适用于内标物。 5．参考和使用文献（略） ［附件1”重复性可行性的Horwitz公式 本公式由Horwitz等人根据AOAC多年来多次协作研究结果，认为可行而确定。适用于本文件的下述实例浓度范围是0．25％～100％。 公式％RSDR＝ 2（1－0.51og.c） 式中％ RSDR是实验室间的变异系数（CV），
C是样品中被分析物的浓度，以小数计。因此100％的纯样品，则C＝1，logC＝0，
故％RSDR＝2（1－（0.5 X 0））＝21－2；
答案补充 50％的样品（如500克／千克可湿性粉剂），则C＝0.5，logC＝-0.3010，故％RSDR＝2（1一0.5 X（一0.3010））＝21.1505＝2．22； 其他数值为：
20％，％RSDR＝2．55；10％，％RSDR＝2．83；5％，％RSDR＝3．14；2％，％RSDR＝3．60；l％，％RSDR＝4．00；0．25％，％RSDR＝4．93。
Horwitz注意到RSD，（重复性变异系数）通常为RSDR的1／2和2／3之间，为此重复性的变异系数即X 0．67。 根据以上数值，可能得出如下结果：被分析物％ Horwitz RSDR 建议的 RSDY 100
2 1.34 50 2.22 1.49 20 2.55 1.71 10 2.83 1.90 5 3.14
2.10 2 3.60 2.41 1 4.0 2.68 0.25 4.93 3.30
未经修改的Howrwitz上式是CIPAC协作研究试验方法可行性的依据。 ［附件Ⅱ”准确度评价
答案补充 下列步骤阐明评价方法准确度的各种途径： (1）一种方法的准确度，可以从测定已知分析物含量的大量“样品”的结果获得。这些样品由实验室制备，加入已知量的分析物（其数量根据方法要求）并带有助剂的混合物。加入的被分析物必须是已知有效成份含量的原药。在分析样品过程中应消除取样误差，并严格按照提出的方法，至少测定4个回收率，测得的数据可用下列办法处理： ①计算回收率平均值和回收率的相对标准偏差。 ②对这些结果和评价重复性的结果进行F检验，以确定回收率结果的RSD与评价精密度结果之间无显着差异。 ③如能达到②项对回收率结果可用Student
t检验，其目的是为证明获得回收率（平均值）与加入浓度之间差异仅仅是由于偶然误差（无明显的系统误差）。 |T|＝|（ω－μ）n／S|
X＝样品平均值，μ＝真值，n＝样品数量，S＝标准偏差。t在不同自由度（n－1）的临界值在一般的统计表中列出。如果算得的t值未超过临界值。证明在给定的置信区间（95％即可）没有显着系统误差。 答案补充 （2）上述表达式可再整理为平均数的置信区间，可定为一个范围，样品的真值是在此范围内（在给定的置信度）
μ＝X±t（∫s/n）自配的制剂平均回收率的计算如下： 平均回收率（％）＝测定含量的平均值％X
100／理论含量％ 平均回收率应在以下的范围内： 有效成份标明值％ 平均回收率％ ＞10 980～102．0
1～10 97．0～103．0 ＜1 95．0～105．0 （3）对上述两种情况，本消除取样误差必须分析一种完全自配制剂。相同步骤也可用于已知成份混合物的子样品分析，但必须注意，在取样时如制剂样品不均匀，则将使平均数的置信区间数值人为增大。 （4）当分析样品很难获得重复结果的制剂（如九粒或块状饵料），可通过添加标准品的方法来计算准确度。在这种情况下，必须提交如何添加标准品的细节报告。

Ⅸ 谷物中的农药残留，有时可以采用什么方法

楼主，您好。 食品的农药残留分析是在复杂的基质中对目标化合物进行鉴别和定量。由于食品中农药残留水平一般在mg/kg～μg/kg之间，因此要求分析方法灵敏度高、特异性强。对于未知农药施用史的食物样品，经常采用多组分残留分析的方法。由于各类食物样品组成成分复杂，而且不同农药品种的理化性质存在差异，因而没有一种多组分残留分析方法能够覆盖所有的农药品种。近年来，农药残留分析方法趋向于选择性强、分辨率高和检测限低以及操作简便。主要表现在由单一种类农药多残留分析向多品种农药多残留分析发展，而且对农药的代谢物、降解物以及轭合物的残留分析给予了更多的关注。本文简要综述近几年来农药残留分析技术及方法学的进展。1、食物中农药残留的特点及样品前处理技术食物样品组成复杂，基质成分与目标物含量相差悬殊，且存在农药的同系物、异构体、降解产物、代谢产物以及轭合物的影响。由于环境的迁移作用，环境中残留的各种化学污染物也可能在农作物组织中蓄积，从而增加了食品农药残留分析的难度。农药残留测定之前要有适合于各种食品和目标物理化性质的萃取、净化、浓缩等预处理步骤，这些预处理过程往往在分析中起着主要作用。食物样品中农药提取、净化等前处理方法有其特殊性，对于不同性质样品中的不同目标物需要采用不同的前处理技术。食品农药残留分析中，食物样品的净化要尽可能的除去与目标物同时存在的杂质，以减少色谱图中的干扰峰，同时避免杂质对色谱柱和检测器的污染。食物样品的净化，尤其是含脂质较多的食物样品净化，一直是分析工作者研究的重点，除采用常规的吸附柱分离、液-液分配、共沸蒸馏等净化措施外，更多的采用现代分离分析技术。在农药残留分析技术发展的历程中，对气相色谱(GC)和液相色谱(LC)等各种仪器的分析速度、分辨能力和自动化程度进行了大量的研究，相比之下，对样品的制备技术关注不够。在很长的时间内，一直沿用经典的索氏提取、液-液分配、Florisil、硅胶、硅藻土及氧化铝柱色谱、共沸蒸馏等技术，尽管这些技术不需要昂贵的设备和特殊仪器，但却是整个分析过程中最费时费力、最容易引起误差的环节，且大量有机溶剂的使用，造成了对环境的污染。进入90年代后，样品萃取净化技术有了较快的发展，最受普遍重视的如固相萃取法(SPE)、凝胶渗透色谱法(GPC)及超临界流体萃取法(SFE)，得到不断改进和应用。为此，样品前处理技术的研究成为分析化学领域中最为活跃的前沿课题之一。1.1 固相萃取法自美国Waters公司的Sep-pak投放市场后，固相萃取法(SPE)技术取得很大进步，各种C8、C18、腈基、氨基和其它特殊填料的微柱相继得到应用。Schenck用Florisil微柱净化，测定食物中有机氯农药(OCs)残留；Wan简化了植物油中OCs残留分析时硅胶柱的净化方法，减少了有机溶剂的使用；Armishaw比较了动物脂肪OCs残留测定时，GPC、吹扫共馏、Florisil柱色谱的净化；Bentabol用半制备C18柱分离食用油中的OCs和有机磷农药(OPs)。Gillespie用多柱SPE净化植物油和牛脂中的OCs及OPs，油或脂质样品用己烷溶解后，首先经Diatoma-ceousearth(extrelutQE)柱和C18键合硅胶(ODS)微柱处理，洗脱液分为两部分，一份浓缩后，丙酮溶解，用GC-火焰光度检测器(FPD)测定OPs，另一份经氧化铝微柱处理，进一步除去脂质，用GC-电子捕获检测器(ECD)测定OCs。1.2 凝胶渗透色谱法凝胶渗透色谱法(GPC)是一种快速的净化技术，应用于农药残留分析中脂类提取物与农药的分离，是含脂类食物样品农药残留分析的主要净化手段。Stienwandter总结了凝胶色谱在农药残留分析中的应用；李洪波[用交联聚苯乙烯凝胶(NGX-01)净化食物样品中OPs；李怡用Bio-BeadsS-X3净化乳品中氨基甲酸酯类农药(NMCs)。Chamberlain采用10%乙酸乙酯和石油醚洗脱，以Bio-BeadsS-X3解决了脂肪和油样的分离。Hong用溶剂提取，Bio-BeadsS-X3净化，GC-ECD-氮磷检测器(NPD)测定大豆和大米样品25种农药，并用GC-MS-选择离子监测(SIM)确证。Florisil、氧化铝及硅胶柱主要用于非脂质食品净化处理，采用常规的净化方法，不能保证极性农药OPs在脂质性食品中的定量回收。Sannino用Bio-BeadsS-X3的GPC净化方法，分析了7个脂质性食品中39种OPs及其代谢产物，并进一步进行GC-MS-SIM确证和定量。Hop-per用GPC净化，GC测定了谷物中OPs、OCs及拟除虫菊酯；Holstege采用凝胶渗透色谱法净化，进行了43种OPs、17种OCs及11种NMCs多残留分析。1.3 超临界流体萃取法继超临界流体色谱(SFC)之后，90年代出现了超临界流体萃取技术(SFE)。常规分析时，需要用有机溶剂提取样品，提取的样品量为50～100g，在进行溶剂浓缩的过程中，可能使易挥发的农药损失或使某些农药降解。SFE的样品用量少，样品提取在低温下进行，避免了农药的损失及降解，大大提高了分析方法的可靠性，并使得分析时间缩短，排除了有机溶剂的污染。Lehotay建立了食品中农药多残留分析的SFE方法；Snyder在OCs和OPs测定中，比较了用3%甲醇为改性剂的CO2净化与索氏提取法的效率。对于含水量高的样品，SFE的使用受到限制，为了提高SFE的使用效率，采用冻干样品和混合样品，以吸收水分。Valverde-Garcia用硫酸镁为干燥剂吸收样品中的水分，以SFE提取甲胺磷；用无水硫酸镁制备蔬菜样品(硫酸镁∶样品=5∶7)，用SFE提取辣椒和西红柿中非极性和中极性农药。SFE是食品农药多残留分析中具有发展前景的新技术，可以替代溶剂提取方法，但在常规分析中还未得到广泛应用。2、测定方法色谱法仍是农药残留分析的常用方法。对于挥发性农药常用GC测定；对于挥发性差、极性和热不稳定性的农药则采用LC测定。目前，在农药残留分析中使用的方法有GC、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、SFC及毛细管电泳法(CE)和酶联免疫吸附测定法(ELISA)等。Fodor-Csorba综述了食物中农药分析的色谱方法，概括了薄层色谱法(TLC)、GC、SFC及HPLC在食物样品分析中的应用；Leim总结了脂类食物中有机农药的分析方法；Sharp总结了谷物中OPs、拟除虫菊酯和NMCs的提取、净化及测定方法；Torres总结了水果、蔬菜中农药残留的测定方法；宫田晶弘用GC、GC-MS-电子轰击源(EI)及GC-离子阱质谱(ITMS)-化学电离源(CI)测定苹果、香蕉、小麦及大米中的41种OPs、23种NMCs，并对三种方法进行了比较。色谱法在农药残留分析中发挥了重要的作用。2.1 GC法和GC-MS法以非极性或弱极性为固定相的毛细管柱GC得到广泛使用，取代了传统的填充柱GC。GC-MS和GC-MS-MS联用技术日臻成熟，质谱法已成为农药残留分析的常用方法。由于串联质谱(MS-MS)可以减少干扰物的影响，提高仪器的灵敏度，所以MS-MS是化合物结构分析及确证的有效手段。由于GC-离子阱的串联质谱用于农药残留分析时，可得到fg水平的灵敏度，所以离子阱技术将是农药残留分析发展的趋势。Lehotay用SFE提取，GC-ITMS分析了水果、蔬菜中OCs、OPs、氨基甲酸酯类农药(MCs)、拟除虫菊酯及其它农药，共46个品种。Py-lypiw用GC-单离子检测(MSD)分析了18种OCs，最低检出量为10μg/kg；Valaerd-Garcia用GC-MSD检测了蔬菜中噻嗪酮的残留；Fillion用乙腈提取水果、蔬菜样品，盐析分层，活性炭柱净化，用GC-MSD分析了189种农药残留，并用HPLC的荧光检测法测定了10种氨基甲酸酯农药残留。Hogendoorn用改良方法分析了2000个水果、蔬菜样品中125种农药。Miyahara用SFE净化，GC-ITMS测定了蔬菜中五氯硝基苯(PCNB)及代谢物的残留；采用SFE与GC-ITMS联用检测蔬菜中六氯苯(HCB)的残留。但是，GC-ITMS用于常规的定量测定还有待进一步发展。2.2 HPLC法及LC-MS法对于受热易分解或失去活性的物质，不能直接或不适合用GC分析。正是由于许多有机化合物的强极性、热不稳定性、高分子量和低挥发性等原因，从而推动了液相色谱技术的进步。农药残留分析中，通常使用C8及C18反相高效液相色谱法，而以硅胶、腈基、氨基为极性键合相的色谱柱则用于特定的分析；短柱或小口径柱可提高分析速度。除采用固定波长或可变波长的紫外检测器外，二极管矩列紫外检测器和质谱检测器可用于结构鉴定。HPLC与SFE联用可以提高分析方法的选择性，并使净化与分析过程结合，减少中间步骤造成被分析组分的丢失。HPLC与MS联用研究起步于70年代，与GC-MS相比，LC-MS的衔接更为复杂，目前LC-MS联用已出现多种接口方式，如电喷雾接口(ES)、热喷雾接口(TS)、离子喷雾接口(IS)、大气压化学电离接口(APCI)以及粒子束接口(PB)。LC与快原子轰击质谱(FAB-MS)以及傅立叶变换红外光谱联用技术(FTIR)在农药残留分析中也得到应用。HPLC和LC-MS广泛应用于不易挥发及热不稳定化合物的分析，是农药残留定性、定量分析的有效手段，尤其是氨基甲酸酯农药(MCs)的检测。Yang[31]总结了NMCs残留分析的进展；Krause建立了氨基甲酸酯的荧光测定法，食物样品用甲醇提取，乙腈-二氯甲烷液液分配，活性炭-celite柱净化，反相LC分离，邻苯二醛衍生，检测限为5～50μg/kg，结果用MS确证。Seiber采用perfluorracyl衍生，分析了谷物中的氨基甲酸酯；Lau用trifluoroacetyl衍生分析了谷物中的混杀威；Bakowski用heptafluo-robutyryl衍生，用GC-EIMS测定了肝组织中10种苯基-N-甲基氨基甲酸酯；Ali对牛肉、猪肉和家禽组织的氨基甲酸酯进行分析。Liu等用LC-MS对水果、蔬菜中的涕灭威、增效砜等19种农药进行检测，检测限为0.025～1mg/kg。Newsome[38]比较了LC-APCI-MS和LC-柱后衍生荧光法测定食品中NMCs，在10～100μg/kg范围内，两种检测器的检测结果良好，但由于两种均为非特异性检测器，都存在基质干扰，为了准确测定含量，应使用高分辨的MS进行确证。2.3 SFC方法SFC是以超临界流体为流动相的色谱方法。超临界流体既具有液体的强溶解性能，适合于分离挥发性差和热不稳定的物质；又具有气体的低粘度和高扩散性能，传质速度快，使得分析速度提高；同时，SFC可以使用GC或HPLC的检测器以及与MS、傅立叶变换红外光谱仪(FTIR)联用。毛细管超临界流体色谱(CSFC)的进展，促进了SFC技术的进步。CSFC-MS是近年来发展的联用技术，由于CSFC克服了GC和LC的不足且具有二者的优点，所以CSFC-MS联用较GC-MS和LC-MS联用有更多的优越性。CSFC-MS主要用于大分子量、热不稳定的复杂混合物分析，尤其对热不稳定的物质，不能用GC直接分析，而LC的选择性和灵敏度又不够，如采用CSFC-MS，可较方便地分离检测。农药中含有S、P等杂原子时，极性较强，用GC和LC难于分析，痕量分析尤为困难。采用CS-FC结合选择性强的检测器，如FPD、NPD、ECD等，是农药痕量分析的理想方法。在CO2中添加1%甲醇作为改性剂，使极性农药得到很好地分离，消除了色谱峰的拖尾。但是农药残留分析中，SFC主要用于非极性或弱极性的物质，如何分析极性物质，将是今后的研究方向。2.4 TLC方法TLC无需特殊设备，简便易行，可同时分析多个样品，多用于复杂混合物的分离和筛选。TLC除用特殊的显色剂观察斑点颜色和用Rf值定性外，与其它技术的联用不仅可以定性，而且可对样品中被分离的一种或多种成分进行定量分析。80年代发展起来的高效薄层色谱法(HPTLC)与扫描技术结合，是一种易于建立和掌握的半定量技术。欧盟国家采用自动化多通道展开技术，用HPTLC定量筛选了饮水中256种农药残留。2.5 CE方法由于CE具有分离效率高、快速、样品用量少等特点，近年来得到了迅速发展，各种分离模式相继建立，高性能的商品仪器不断推向市场。对于无电荷的分子，开发了胶束电动色谱法(MEKC)，拓宽了CE的应用范围。毛细管电泳与质谱联用(CE-MS)可用于谷物和其它基质中带电荷基团的农药及其代谢物残留检测。CE可与原子分光光度法联用，如与原子吸收分光光度计(AAS)、电感耦合等离子体-原子发射光谱仪(ICP-AES)和ICP-MS联用。Cancalon[40]综述了CE和CE-MS在农药残留分析中的应用。2.6 生物技术生物技术在农药残留分析中的应用不断增加，尤其是乳制品工业。生物技术包括免疫测定法、生物测定法和生物传感器技术及免疫亲和色谱法。免疫测定法取决于抗体与底物的相互作用，目标物与抗体结合后，酶促反应产生颜色变化，用比色法测定目标物浓度。Kramer总结了生物传感器和免疫传感器的构件、技术特点及其应用。抗体与抗原的特异结合为农药残留分析提供了技术保证，许多市售试剂盒的应用，使免疫测定成为各类农药残留检测的有效手段，使农药残留分析时间缩短，操作人员劳动负荷量减少。免疫方法常与其它技术联用，如ELISA与传统的提取和净化方法、SFE、HPLC及GC-MS联用；免疫亲和色谱法与MS联用以及在机器人辅助下自动的免疫化学方法都有应用报道。有报道[41]用SFE-ELISA分析了大麦中杀螟硫磷、甲基毒死蜱及甲基嘧啶磷；用HPLC-ELISA测定水果、蔬菜中噻菌灵。由于免疫分析成本低、快速、可靠，且传感器灵敏度高，并有自动化装置，因而广泛用于农药残留的监测及人与环境接触等研究。3、结语随着各种新技术的应用，农药残留分析方法日趋系统化、规范化，并向小型化、自动化方向发展。同时，由于在线联用技术可避免样品转移的损失，减少各种人为的偶然误差，因此将是农药残留分析方法研究的重点。