1、凯氏定氮法
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。
由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。
优点:可用于所有食品的蛋白质分析中;操作相对比较简单;实验费用较低;结果准确,是一种测定蛋白质的经典方法;用改进方法(微量凯氏定氮法)可测定样品中微量的蛋白质。
缺点:凯氏定氮法只是一个氧化还原反应,把低价氮氧化并转为氨盐来测定,而不能把高价氮还原为氮盐的形式,所以不可以测出物质中所有价态的氮含量。
2、双缩脲法
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。鉴定反应蛋白质单位1-10mg。
优点:测定速度较快,干扰物质少,不同蛋白质产生的颜色深浅相近。
缺点:①灵敏度差; ② 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸和EDTA等会干扰该反应。
3、酚试剂法
取6支试管分别标号,前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,不加标准蛋白溶液,在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照,于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。
优点:灵敏度高,对水溶性蛋白质含量的测定很有效。
缺点:①费时,要精确控制操作时间;②酚法试剂的配制比较繁琐。
4、紫外吸收法
大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收,这是由于蛋白质中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于测定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。
取9支试管分别标号,前8支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,1号试管不加标准蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,而不加标准蛋白溶液,每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致,将液体混合均匀,在280nm波长处进行比色,记录吸光度值。
优点:简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后能回收。
缺点:①测定蛋白质含量的准确度较差,专一性差; ②干扰物质多,若样品中含有嘌呤、嘧啶及核酸等能吸收紫外光的物质,会出现较大的干扰。
5、考马斯亮蓝法
考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。
在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为 465nm 的形式转变成吸收峰为 595nm 的形式,而且这种转变有一定的数量关系。
一般情况,当溶液中的蛋白质浓度增加时,显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增加,因此可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。
优点:灵敏度高,测定快速、简便,干扰物质少,不受酚类、游离氨基酸和缓冲剂、络合剂的影响,适合大量样品的测定。
缺点:由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此用于不同蛋白质测定时有较大的偏差。
⑵ 蛋白质的营养成分能用什么方法判别出来
1:用双缩脲试剂检测,呈现紫色就有蛋白质:
2:双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成.
3:双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液;
4:双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液.:
5:双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在.
具体方法是:
1:先将双缩脲试剂A加入组织样液,摇荡均匀(必须营造碱性环境),在加入双缩脲试剂B,摇荡均匀.:
2:如果组织里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色.具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应.
3:蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物.颜色深浅与蛋白质浓度成正比.:
4:双缩脲(NH2CONHCONH2)是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物.:
5:双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质,与蛋白质接触后的颜色呈紫色
希望我的回答对你有帮助!
⑶ 鉴别蛋白质的最简便方法
在其中滴加硝酸银是否有白色沉淀生成。
⑷ 一般采用什么方法检验蛋白质即鉴定
一般用双缩脲试剂鉴定,双缩脲试剂可以和蛋白质发生紫色反应。
⑸ 我们可以用什么办法检测食物中是否含有蛋白质
日常简单方法可以用烧灼,因为蛋白质烧灼了以后有一股特殊的味道,就比如说头发烧着了以后的味道就是蛋白燃烧的味道。
⑹ 鉴别蛋白质的方法
先用双向电泳,分离目的蛋白,然后打质谱,通过打出来前面几个氨基酸序列,到蛋白质数据库和蛋白组数据库上比对,就能知道是什么目的蛋白了。如果是新发现蛋白,可以比对est数据库,得到该基因序列,然后再克隆出来。
⑺ 如何动手检测食物中的蛋白质、脂肪、淀粉,并写出简单的检测方法(任选两种物质)
蛋白质专业检测法是把它配成溶液,加入双缩脲试剂后有紫色沉淀。不专业的是加硝酸加热,会变黄的。家里检测就可以滴碘酒,变棕黄色。
淀粉,加碘酒或碘水就好啦,会变蓝色的。
脂肪的专业检测是用苏丹3染液染色,然后在显微镜下就可以看到被染成橘红色的脂肪滴。一般检测可以在吸水性较好的纸上轻按一下,会有油印子的。
⑻ 鉴定蛋白质有哪些方法
蛋白质含量的测定:
1 凯氏定氮法
根据氮在蛋白质分子中含量恒定(平均占16%),因此测定出样品中氮的含量后,即可求出样品中蛋白质含量。
2 双缩脲法
3 福林-酚试剂法
福林-酚试剂包括两种试剂:碱性铜试剂,磷钼酸及磷钨酸的混合试剂。碱性铜试剂与蛋白质产生双缩脲反应。这种被作用的蛋白质中的酚基(酪氨酸),在碱性条件下易将磷钼酸和磷钨酸还原成蓝色的钼蓝和钨蓝,所生成蓝色的深浅,与蛋白质的含量成正比。在650nm和660nm波长下测定光吸收值,即可测定蛋白质含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸,色氨酸在280nm处左右具有最大吸收。由于在各种蛋白质中这几种氨基酸含量差别不大,所以280nm的吸收值与浓度呈正相关。可用于蛋白质浓度的测定。
⑼ 蛋白质用什么试剂检测 谢谢!
蛋白质用双缩脲试剂检测。
双缩脲试剂是一个用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制。会遇到蛋白质显紫色。
双缩脲试剂本是用来检测双缩脲,由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键,因此也能与铜离子在碱性溶液中发生双缩脲反应。当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,络合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。
双缩脲试剂中真正起作用的是硫酸铜,而氢氧化钾仅仅是为了提供碱性环境,因此它可被其他碱,如氢氧化钠所代替。向试剂中加入碘化钾,会延长试剂的使用寿命。酒石酸钾钠的作用是保护反应生成的络离子不被析出变为沉淀,从而使试剂失效。
(9)用什么方法能看到蛋白质扩展阅读
注意事项
在使用双缩脲试剂时候,必须注意,必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液,再加入氢氧化钠溶液,则无法充分制造碱性环境,此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜沉淀,导致现象不清,无法较好地达到实验目的。
配置方法
双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液;
双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液。
先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL,振荡均匀(营造碱性环境),再加入1~2滴双缩脲试剂B,振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质,那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
参考资料来源:网络-双缩脲试剂
⑽ 如何鉴定蛋白质
鉴定蛋白质可以用双缩脲试剂。
双缩脲(NH2CONHCONH2)由两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物,在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,双缩脲反应产生的紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。
优点:双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质,操作简单、快捷。既适合手工操作,又适合自动化分析,重复性好、线性关系好, 双缩脲试剂可以长期保存( 若贮存瓶中有黑色沉淀出现,则需要重新配制)。
缺点:灵敏度差,测定范围窄,样品需要量大,不同的蛋白质产生颜色的深浅相近,因此它常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。 干扰测定的物质包括有:在性质上是氨基酸或肽的缓冲液,如TrIs缓冲液,因为它们产生阳性呈色反应,铜离子也容易被还原,有时出现红色沉淀。
蛋白质的作用:
人体内的一些生理活性物质如胺类、神经递质、多肽类激素、抗体、酶、核蛋白以及细胞膜上、血液中起“载体”作用的蛋白都离不开蛋白质,它对调节生理功能,维持新陈代谢起着极其重要的作用。人体运动系统中肌肉的成分以及肌肉在收缩、作功、完成动作过程中的代谢无不与蛋白质有关,离开了蛋白质,体育锻炼就无从谈起。
在生物学中,蛋白质被解释为是由氨基酸借肽键联接起来形成的多肽,然后由多肽连接起来形成的物质。通俗易懂些说,它就是构成人体组织器官的支架和主要物质。蛋白质缺乏:成年人:肌肉消瘦、肌体免疫力下降、贫血,严重者将产生水肿。
未成年人:生长发育停滞、贫血、智力发育差,视觉差。蛋白质过量:蛋白质在体内不能贮存,多了肌体无法吸收,过量摄入蛋白质,将会因代谢障碍产生蛋白质中毒甚至于死亡。
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