氧化应激用什么染色方法

⑴ 几种染色剂的使用原理、使用方法归纳

1。甲基绿和吡罗红：实验原理:甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色.利用甲基绿,吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示DNA和RNA在细胞中的分布. 试剂及配制方法 （1）试剂 质量分数为0.9%的NaCl溶液，质量分数为8%的盐酸，乙酸钠，乙酸，蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉，可以分别购买甲基绿和吡罗红G，然后按A液的第二种方法配制（见下文）。 （2）染色剂的配制 ①染色剂A液的两种配制方法 第一种方法：取吡罗红甲基绿粉1 g，加入到100 mL蒸馏水中溶解，然后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。 第二种方法：取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中，取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中，即为A液，放入棕色瓶中备用。（注意：用于核酸染色的是吡罗红G，请不要错买吡罗红B。） ②染色剂B液的配制方法 B液是一种缓冲液，由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4 g，用蒸馏水溶解至1 000 mL备用；再取乙酸12 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL，加蒸馏水50 mL，配成pH为4.8的B液（缓冲液）。 ③染色剂的配制染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。 2。龙胆紫和醋酸洋红： 染色质(体)容易被碱性染料染成深色。作为染色剂必须具备两个条件：一是具有颜色；二是要与被染组织间有亲和力。染料的颜色和它与组织间的亲和力是由染料本身的分子结构决定的，产生颜色的发色基团和与组织间产生亲和力的助色基团共同决定了染色剂的染色性质。作为染料物质，除了有发色基团外，还需要有一种使化合物发生电离作用的助色基团。染色剂的酸、碱性界定并非由染料溶液的pH值决定，而是根据染料物质中助色基团电离后所带的电荷来决定。一般来说，助色基团带正电荷的染色剂为碱性染色剂，反之则为酸性染色剂。 醋酸洋红常被用作核、染色体的固定和染色剂。在煮沸的45％醋酸中加洋红使之饱和，再加入微量的铁离子，便使醋酸洋红材料在为醋酸固定的同时， 洋红将核或染色体染成红色。用龙胆紫可将染色体染成蓝紫色。 3。伊红美蓝：伊红和美蓝是两种苯胺类染料，可以抑制革兰氏阳性菌的生长。同时，这些染料可以区分那些发酵乳糖的微生物。大肠菌群因其强烈发酵乳糖而产生大量的混合酸，使菌体表面带上正电荷，可染上伊红染料，伊红与美蓝结合，菌体被着上深紫色，在含有两种染料呈紫色的培养基上，形成带核心、具金属光泽的菌落。因此可以用伊红和美蓝鉴别革兰氏阴性菌（大肠杆菌）的存在。 4。二苯胺： 二苯胺是一种非极性芳香族有机分子，有毒，熔点比水低，微溶解于水，易溶解于酒精、冰乙酸等有机溶剂。化学性质活泼，遇光易变色。因此要放置于暗处保存。 二苯胺试剂鉴定DNA的原理：DNA分子中的脱氧核糖在酸性环境下生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，再与二苯胺试剂结合显蓝色，颜色的深浅与溶液中的DNA含量成正比。 二苯胺试剂的配制：A液：1.5克二苯胺溶解于100ml冰乙酸中,在加入1.5ml浓硫酸(此处浓硫酸的作用可能是作为强氧化剂来维持试剂的稳定)，配制好的A液保存在棕色瓶中。B液：体积分数为0.2%的乙醛。由于乙醛是一种还原性试剂，所以实验前不能将A液和B液混合在一起。同时因为二苯胺试剂性质不稳定，极易变色，因此建议现配现用。 5。双缩脲：鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的铜离子与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（H2NOC－NH－CONH2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生颜色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。 6。斐林试剂：由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖）、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀 。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。 7.班氏试剂： 班氏试剂常用于尿糖的鉴定，其配方与斐林试剂不一样，其配方为： ①400ml水中加85g柠檬钠和50g无水碳酸钠； ②50ml加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成溶液； ③把溶液倒入柠檬酸钠溶液中，边加边搅，如产生沉淀可滤去。 （2）其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时，斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中的产生却是这样的：柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐，在水中它们均可水解产生，与柠檬酸钠溶液和溶液混合时，结合，生成与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。 （3）两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈产生，很容易沉淀析出，因此斐林试剂一般为现用现配；而班氏试剂的配方中，柠檬酸钠为一对缓冲物质，产生的数量有限，与溶液混合后产生的浓度相对较低，不易析出，因此该试剂可长期保存。

⑵ 实验室常用的染色方法有哪几种

印染行业的化验室一般的都是浸染法，就是拿染液通过染色工艺把布浸染到上色，还有扎染，卷染，

⑶ 氧化应激指标的常用检测方法

氧化应激的定量评价方法大致分做三类：

1）测定由活性氧修饰的化合物；

2）测定活性氧消除系统酶和抗氧化物质的量；

3）测定含有转录因子的氧化应激指示物。

进一步尚有：

1）生物体内氧化应激的程度足以产生应答；

2）活体内难以蓄积；

3）在活体内不是被代谢，而是稳定存在，等等。理解这些要点对于临床普及推广都很有用。

但在临床上，氧化应激的定量仍旧存在问题。因氧化应激与各种各样疾病均密切相关，故缺乏特异性，其量化指标难以用于特别指定的疾病。所以目前认为，当用于“全身评价”，或者在已经明确疾病原因为氧化应激后的“严重程度及予后”的评价。

(3)氧化应激用什么染色方法扩展阅读

抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多自由基引起的及老化相关疾病都能够预防。例如常见的糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆等疾病都被认为与自由基相关。

抗氧化剂能在自然饮食中找到，是被称为三大抗氧化物质的维生素E、维生素C、和β-胡萝卜素。他们可以利用自身结构的特性来稳定自由基多余的电子，防止对细胞造成老化。豆类富含大量的膳食纤维和抗氧化剂，其中红豆和黑豆抗氧化剂最多。苹果中含有多种基本维生素和强抗氧化剂。

⑷ 常用的细胞染色方法有哪些

常用的细胞染色方法有：

1、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色；

2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程；

3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成；

4、吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同；

5、细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。

染色是生物显微玻片标本制作中最重要的环节之一。先把破坏细胞膜的选择透过性，再使用染色剂，将生物组织浸入染色剂内，使组织细胞的某一部分染上与其他部分不同的颜色或深度不同的颜色，产生不同的折射率，以便观察。

另外，银染法也较常用。当组织块浸入硝酸银溶液中时，有的组织结构能直接把硝酸银还原，使银粒附于其上，呈棕黑色或棕黄色。有些结构本身对硝酸银无直接还原能力，若加入还原剂，可使硝酸银还原沉淀显色。

(4)氧化应激用什么染色方法扩展阅读：

染色细胞固定有物理法与化学法，物理法为干燥和火焰固定，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。

1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。

2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。

3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。

4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。

5、金属沉着法：其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。

⑸ 有什么好的方法染色和步骤

通常染色的方法有七种：
以纺织品为例，纺织品的染色可以在任何阶段进行，可以在纤维、纱线、织物及成衣等不同阶段景进行染色:
1、散状纤维染色 在纺纱之前的纤维或散状纤维的染色，装入大的染缸，在适当的温度进行染色。色纺纱大多采用散纤维染色的方法（也有不同纤维单染的效果），常用于粗纺毛织物。
2、毛条染色 这也属于纤维成纱前的纤维染色，与散状纤维染色的目的一样，是为了获得柔和的混色效果。毛条染色一般用于精梳毛纱与毛织物。
3、纱线染色 织造前对纱线进行染色，一般用于色织物、毛衫等或直接使用纱线（缝纫线等）。纱线染色是染织的基础。
常规纱线染色的方法有三种：
①绞纱染色——将松散的绞纱浸在特制的染缸中，这是一种成本最高的染色方法；
②筒子染色——筒子染色的纱线卷绕在一个有孔的筒子上，然后将许多的筒子装入染色缸，染液循环流动，蓬松效果与柔软程度不如绞纱染色。
③经轴染色——是一种大规模卷装染色，梭织制造前要先制成经轴（整经），将整个经轴的纱线进行染色，如联合浆染机与经轴纱线束装染色。由于是经轴，所以多适用梭织染色使用。 但随着经轴落筒的出现，我们可以把染色后经轴上的纱线落成筒子纱，这种染色的纱线使用范围就更广了，譬如靛蓝染色大多使用的还原染色方法，只有使用经轴染色才可以很好的解决，如果没有经轴落筒，是很难实现的。
4、匹染对织物进行染色的方法为匹染，常用的方法有绳状染色、喷射染色、卷染、轧染（不是扎染）和经轴染色。这里不一一介绍。
5、成衣染色 把成衣装入尼龙袋子，一系列的袋子一起装入染缸，在染缸内持续搅拌（桨叶式染色机）。成衣染色多适合于针织袜类、T恤等大部分针织服装、毛衫、裤子、衬衫等一些简单的成衣。
6、艺术染色—主要有扎染、蜡染、吊染、段染、泼染以及手绘等。
7、染色过程中固定面料的夹具最好选用全塑料制作的夹子，避免弹簧金属圈耐受不了酸性或者碱性的染色剂而生锈沾染面料，所以选用纯塑胶夹是最妥当最安全的夹具，这在淘宝网上可以很容易购买得到。

⑹ 不稳定细胞的特殊染色方法

、简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色； 2、革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程； 3、瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成； 4、吉姆萨染色

⑺ 求助关于用氧化敏感探针DCFH-DA检测细胞内ROS

DCFH-DA 的使用步骤：
DCFH-DA使用仅提供指导和参考，具体实验方案应针对您的特定应用进行修改：
1. BCECF开封前，适当的做离心，以保证粉末落入样品管低,确保染料足量；
2.加入适量无水DMSO（DMSO检验用有机滤器进行过滤使用） 或者其他有机溶剂配制成 1～10mM储存液进行使用，剩余的制备液分装存储，避免重复冻融影响试剂活性；
3. 正式开始实验前，采用生理盐缓冲液（常用的缓冲液有：PBS缓冲液，HBSSS缓冲液 和HEPESS缓冲液）稀释至工作浓度1～10μM之间，不同实验需根据需求调整至合适的工作浓度；
4. 从培养基中取出细胞，向细胞中加入染料工作溶液，然后在室温或 37℃条件孵育细胞 5-60 分钟时长；
5. 吸走染色用的工作液，然后用预热的缓冲液 或 细胞培养液进行清洗一遍。之后再加入预热的缓冲液或者细胞培养液，在适宜恒温条件下孵育。对于二乙酸酯的衍生物，需要短暂复原时间让细胞内酯酶将其水解，从而让染料对氧化应激产生反应。最佳的复原时间范围很广，由于某些细胞类型通常显示极其低水平的酯酶活性；
6.将细胞置于刺激物钱，需要先测定加载细胞的背景荧光强度；
7. 评估阴性对照：

• 绿色发射光谱内检查未染色细胞的自荧光情况；

• 对于流式分析，查明染料加载和处理后细胞的前向角散射和侧向角散射是不变。细胞尺寸的变化可能与起泡或萎缩有关，由于处理或有毒反应引起的。

• 对包含和不包含刺激物的染料和缓冲液/培养基的无细胞混合物进行荧光检测。在不含细胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，随着时间荧光的逐渐增加可能与瞬间水解、空气氧化、和/或光诱导氧化有关。

• 检查培养在生长培养液或简单缓冲液内的未处理加载细胞（对照）的荧光。在健康细胞内，细胞内酶和/或天然抗氧化剂会清除这些氧自由基。经过染料加载复原时间后，健康细胞应该表现出低水平的荧光信号，且在整个实验期间相对稳定。然而，逐渐增加（由于自氧化）或降低（由于细胞内染料丧失或光淬灭）也有可能观察到。在不含任何刺激物或诱导剂的体系内，健康和未处理细胞突然发现强荧光，表明细胞发生死亡或一些其他的氧化事件。

• 8. 建立阳性对照，可采用下面方法刺激氧化活性：

• 肿瘤促进剂（PMA，工作浓度100pM～10μM）

• H2O2 或者 TBHP（终浓度~100μM）（可以调节浓度：根据细胞对其的灵敏度以及反应性提高或降低浓度）。

• 9. 需要确保其他化合物或者刺激试剂不造成起染料荧光淬灭。同时检查化合物的吸收光谱，确认化合物的吸收峰不会与氧化后的染料最大激发或者是发射光谱出现重读。

⑻ 氧化应激指标的常用检测方法

氧化应激检测
用氧化应激指标检测试剂盒（由南京建成生物公司提供），按照说明书操作检测。
T-AOC、ROS、SOD、MDA、NO检测
用Fe3+还原法测定血浆总抗氧化能力（T-AOC），采用Fenton 反应及Gress 显色原理测定活性氧(ROS)，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD），硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(MDA)含量，硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）。

实时定量PCR检测
取肝素抗凝新鲜人外周血5 ml，淋巴细胞分离液［密度1 g/cm3(20℃)］分离外周血单个核细胞，加入TRIZOL(Invitrogen公司产品)，抽提总RNA。紫外吸收测定法检测RNA浓度和纯度，A 260
nm/A 280 nm比值在1.8-2.1之间。采用变性琼脂糖凝胶电泳, 紫外透射光下观察并拍照。5 μg总RNA经oligo(dT) 引物逆转录合成cDNA，逆转录反应为37℃ 1小时、95℃ 5分钟，cDNA溶液储存于-20℃备用。由上海康成生物公司合成引物，hOGG1正义引物： 5'-CCCCAGACCAACAAGGAACT-3'； 反义引物： 5'-TGGAACCCTTTCTGCGCTTT-3'，扩增片段145 bp；管家基因正义引物： 5'- CCTGTACGCCAACACAGTGC-3'；反义引物： 5'-ATACTCCTGCTTGCTGATCC-3'，扩增片断211 bp。定量阳性模板扩增曲线以hOGG1模板起始拷贝数的常用对数为横坐标，循环阈值为纵坐标，得到标准曲线，相关系数r=0.99991。荧光定量PCR反应体系25 μl： SybergreenⅠ(Invitrogen公司产品) 终浓度6.25 μl，25 mmol/L MgCl2 溶液3 μl， 20 μmol/L 的PCR特异引物各0.5 μl，Taq聚合酶3 U， dNTP混合液3 μl，cDNA 1 μl。 反应条件(Rotor-Gene3000 Realtime PCR仪): 94℃5分钟，40个循环(94℃ 10秒，58℃ 15秒，72℃ 20秒)。PCR产物与100 bp DNA Ladder在2％琼脂糖凝胶电泳，GoldViewTM染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。hOGG1与β-actin绝对拷贝数之比，作为hOGG1基因的相对表达量

⑼ 染色的方法有哪些，比较各种染色方法的检测下限

染色的方法有哪些，比较各种染色方法的检测下限
细胞染色常用方法主要包括以下几个即：1.简单染色法，常用碱性染料如美蓝等进行简单染色;2.革兰氏染色法，主要包括结晶紫初染、碘液媒染、乙醇(或丙酮)脱色以及番红复染四个过程;3.瑞氏染色法，瑞氏染料溶剂主要是由伊红美蓝组成;4.吉姆萨染色法，吉姆萨染色原理与结果和瑞特染色法基本相同;6.细胞免疫荧光染色法，免疫荧光染色的主要原理是利用抗原抗体之间的特异性结合。