菌落总数测定方法视频

1. 菌落总数的检测

平皿计数法

菌落总数(standardplate-countbacteria):水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。

仪器和装置

高压蒸汽灭菌器。

干热灭菌箱。

培养箱(36±1)℃。

电炉。

冰箱。

放大镜或菌落计数器。

pH计或精密pH试剂。

灭菌试管。

平皿直径9cm。

培养基与试剂

营养琼脂成分蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、琼脂10～20g、蒸馏水1000mL。

制法将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中(如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤)，经103.43kPa(121℃)灭菌20min，贮存于冷暗处备用。

检验步骤

1)水样处理。

a.饮用水。以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入来菌平皿中，倾注约15mL已熔化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于(36±1)℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为1mL水样中的菌落总数。

b.水源水。以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶10稀释液。

吸取1mL1∶10的稀释液注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1∶100稀释液。按同法依次稀释成1∶1000、1∶10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。

用灭菌吸管取未稀释的水样和2～3个适宜稀释度的水样各1mL，分别注入灭菌平皿内。以下操作同生活饮用水的检验步骤。

2)菌落计数及报告方法。作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。

不同稀释度的选择及报告方法:

首先选择平均菌落数在30～300者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例1)。

若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视二者之比值来决定。若其比值小于2应报告两者的平均数(如表82.2中实例2)。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数(如表82.2中实例3)。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数(见表82.2中实例4)。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例5)。

若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例6)。

若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表82.2中实例7)。

若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。

如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个平板1cm²中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿度面积63.6cm²，再乘其稀释倍数作报告。

菌落计数的报告:菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字;在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示(见表82.2“报告方式”栏)。

表82.2 稀释度选择及菌落总数(CFU)报告方式

2. 什么是CFU

指单位体积中的细菌、霉菌、酵母等微生物的群落总数。也指1 mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，于37 ℃培养24 h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

在活菌培养计数中，由一个或多个生物体在固体培养基上生长繁殖形成的菌落称为菌落形成单位，表示活菌的数量。菌落形成单位的计数方法不同于一般的计数方法。一般直接在显微镜下计算菌体数量会将活与死的菌体全部算入，但是CFU只计算活的菌体数量。

(2)菌落总数测定方法视频扩展阅读：

中国现行《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2006）规定，细菌菌落总数在1 mL自来水中不得超过100个。细菌种类繁多，有其自身的生理特性。它们必须在适合它们生长的培养基中培养。

然而，在实践中并不容易做到，因此腐生菌通常在适合大多数细菌的培养基中培养，其菌落总数表明了有机污染的程度。水中细菌总数与有机污染程度呈正相关。因此，细菌总数是评价水体污染程度的重要指标。细菌总数越大，水污染越严重。

3. 国家水质标准

Ⅰ类：主要反映地下水化学组分的天然低背景含量。适用于各种用途。

Ⅱ类：主要反映地下水化学组分的天然背景含量。适用于各种用途。

Ⅲ类：以人体健康基准值为依据。主要适用于集中式生活饮用水水源及工、农业用水。

Ⅳ类：以农业和工业用水要求为依据。除适用于农业和部分工业用水外，适当处理后可作生活饮用水。

Ⅴ类：不宜饮用，其他用水可根据使用目的选用。

先进的水平水质标准

比较先进的水平有美国的饮水标准，欧共体的水质标准、日本的水质标准，还有根据世界平均水平世界卫生组织推荐的饮用水标准。相对而言，美国标准要求是最高的，世界卫生组织推荐的饮用水标准更具有代表性。

中国的标准制定，是借鉴了世界卫生组织、美国和日本等国家的先进经验，并根据中国的实际来制定的。所以，106项标准里面，包含了感官性指标、毒理学指标、微生物学指标、消毒剂指标和放射性指标，指标数量和限值都跟国际先进水平相当。因此，总体上饮用水水质标准已经达到国际先进水平。

以上内容参考网络-国家水质标准

以上内容参考人民网-生活饮用水卫生新国标及饮水安全

4. 如何检测游泳池水质

游泳池水质标准
在游泳池设计中首先要确定的是执行的水质标准。我国《游泳场所卫生标准》（GB9667—1996）中“人工游泳池池水水质卫生标准”在执行过程中普遍反映指标过低，与国外游泳池水质标准规定项目相差较大。若完全执行国际游泳联合会（FINA）水质卫生标准的要求，有些指标过高，不符合我国国情。FINA在2005~2009年版的“国际竞赛规则”中取消了2002~2005年版本中（14章）水质卫生的具体要求，在总则中提出，游泳池的卫生、健康和安全，应符合举办国的当地法律和卫生各项规定。2008年奥运会将在我国举行，水质标准执行GB9667—1996显然是不行的。编制新的“游泳池水质标准”是必要的。
根据建设部建标函【2005】81号《2005年建设部归口工业产品行业标准制订、修订计划》的要求，由中国建筑设计研究院作为主编单位，中国游泳协会，中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所等12家单位参编，负责编制城镇建设行业产品标准《游泳池水质标准》（以下简称“标准”）
1 “标准”制定的原则
（1）水质指标项目的确定应有足够的基础资料，具有可行的检测方法。
（2）水质限值应确保水质感官良好，防止水性传染病暴发及其他健康的危害，还应考虑其处理技术和化验检测费用。
（3）应与国际接轨，以世界卫生组织（WHO）制定的《游泳池、按摩池水环境指导准则》（2006年版）为主要依据，并参考先进国家和地区的游泳池水质标准，结合我国的情况综合分析论证，制定出有关项目和限值。
（4）“标准”必须符合我国国情和具有可操作性。
（5）“标准”适用于人工游泳池（包括室内外竞赛游泳池，公共游泳池、商业游泳池、专用游泳池和休闲游泳池）。
（6）国际比赛的游泳池水质标准同时应符合FINA的要求。
（7）“标准”不适用于原水使用海水和温泉水的游泳池以及天然水域游泳池。

2 “标准”的主要内容
游泳池水质应符合下列要求：水的感官性状良好；水中不含有病原微生物；水中所含化学物质不得危害人体健康。
（1）游泳池池水水质常规检验项目及限值见表1
表1 游泳池池水水质常规检验项目及限值
序号 项目 限值
1 浑浊度/NTU ≤1
2 PH 7.0~7.8
3 尿素/mg/L ≤3.5
4 菌落总数【（36±1）℃，48h】/CFU/mL ≤200
5 总大肠菌群【（36±1）℃，24h】 每100mL不得检出
6 游离性余氯/mg/L 0.2~1.0
7 化合性余氯/mg/L ≤0.4
8 臭氧（采用臭氧消毒时）/mg/m ≤0.2以下（水面上空气中）
9 水温℃ 23~30

（2）游泳池池水水非质常规检验项目及限值见表2
表2 游泳池池水水质非常规检验项目及限值
序号 项目 限值
1 溶解性总固体（TDS）/mg/L ≤原水TDS+1500
2 氧化还原电位（ORP）mV ≥650
3 氰尿酸/mg/L ≤150
4 三卤甲烷（THM）ug/L ≤200

（3）竞赛池举办世界级比赛时的水质标准，应符合FINA的相关要求，可参照FINA建议的世界级竞赛游泳池池水水质标准（在标准中为资料性附录）。标准中将“游泳池水中氰尿酸的验检方法”作为规范性附录。

3 “标准”主要指标的对比和分析

3.1 浑浊度
浑浊度是反映游泳池物理性状的一项指标，从消毒和安全考虑，池水的浑浊度应高于等于生活饮用水卫生标准的要求，通过对国内游泳场的初步调查，常规的水处理（沉淀—砂滤—氯化）在正常合理的运行条件下，可以将浑浊度净化到≤2NTU。世界卫生组织“游泳池水环境指导准则”指出宜在0.5NTU，德国游泳池水质标准为0.2（过滤后下限值）～0.5NTU（池水上限值），西班牙游泳池水质标准为0.5～1NTU。综观国外游泳池水质标准的发展，浑浊度限值趋向降低，考虑我国国情，“标准”中限值为1NTU。

3.2 pH
生活饮用水的pH允许范围在6.5～8.5，对人们的饮用和健康均不受影响，但在游泳池水处理中，调节池水的pH很重要，大多数消毒剂的杀菌作用取决于PH，因此必须是pH保持在一种消毒剂的最佳有效范围内。以氯消毒剂为例，从表3可以看出次氯酸盐与pH的变化关系。
表3 pH对氯的影响
pH HOCI/% OCI-/%
6 97.5 2.5
6.5 92.4 7.6
7 79.3 20.7
7.2 70.7 29.3
7.4 60.4 39.6
7.5 54.8 45.2
7.6 49 51.0
7.8 37.8 62.2
8 27.7 72.3
8.2 19.5 80.5
8.5 10.8 89.2

HOCI是比OCI-更强的氧化剂，随着pH升高，HOCI百分比降低，OCI-的百分比增加，使用氯消毒应使pH保持在7.2～7.8，此时消毒作用最有效和经济，GB9667—1996将池水的pH范围定位于6.5～8.5，其他西方国家均规定池水pH在7.2～7.8，我们认为就pH的范围，游泳池水质应向国际先进水平靠拢。

3.3 总溶解性固体（TDS）
总溶解性固体是指溶解在水中的所有无机物、金属、盐、有机物的总和，但不包括悬浮在水中的物质，其监测意义在于控制池水的更新。国外游泳池水质TDS的规定见表4.
表4 国外游泳池水质标准对TDS的规定
国家或地区 总溶解性固体（TDS）/mg/L
美国（ANSI/NSPI-1） 游泳池水比水源水高出1500
美国（内布拉斯加州） 游泳池水1000-2000，按摩池高出水源水1500
英国 游泳池水不应高出水源水1000，最大到3000
澳大利亚 游泳池水≤1000，理想值400～500

3.4 消毒剂余量
世界卫生组织的“游泳池水环境指导准则”中对消毒剂余量的规定为：
（1）池中的残余氯应为≤5mg/L（符合WHO饮用水标准），建议在整个池中保持余氯为1mg/L。
（2）化合性余氯的浓度≤游离性余氯的一半，理想值应为0.2mg/L。
（3）臭氧消毒系统应采用低浓度的游离残余浓度（≤0.5mg/L）,高浓度2mg/L宜用于SPA和水疗池。
（4）氯异氰尿酸盐消毒系统中应维持和控制氰尿酸（Cyanuric acid）在100mg/L。
（5）溴基消毒系统在游泳池中消毒残余量为1～6mg/L，当溴基消毒剂与臭氧结合时，在整个时间内溴离子浓度应维持和控制在15～20mg/L。
（6）如果采用溴源BCDMH，其中DMH（二甲基乙内酰脲）宜维持不超过200 mg/L。
（7）用冲击投量（Shock dosing）补偿不适当的水质处理，并非好方法，因为它能掩盖运行和设计中的缺点，同时也可能产生消毒副产物（即THMS和氯胺）。
为了达到满意的微生物指标条件，游离性余氯应尽量保持最低。根据国外经验，设计运行良好的公共和半公共游泳池余氯不少于1 mg/L，可满足常规消毒要求和达到消毒效果。条件不理想时，游泳池需要的余氯可能超过了1 mg/L，但不得超过1.5～2 mg/L。我们参考了WHO的《游泳池水环境指导准则》中的规定，且根据美国奥麒公司“余氯控制范围”的报告和“休闲水冲击处理科学研究总结报告”的内容，提出游泳池余氯限值1～3mg/L，按摩池2～3 mg/L的规定。
化合性余氯会引起结喉炎和鼻粘膜炎，这种有强烈刺激性的化合物也是引起“室内游泳池异味”的物质，所以世界各国对游泳池水中的化合性余氯均做出了不同规定。德国0.2 mg/L；丹麦0.2 mg/L；意大利0.3 mg/L；瑞士0.4 mg/L；挪威0.5 mg/L；英国≤2/1游离性余氯，最大0.2 mg/L；美国游泳池0.2 mg/L，按摩池0.5 mg/L；我国≤0.4 mg/L。

3.5 臭氧（O3）
臭氧在常温下是一种气体，它在水中溶解度低，在20℃水中很不稳定，通常其半衰期约为25min。臭氧在阳光下极易分解，同时也易在水中挥发，并有一定的毒性，其暴露浓度仅为0.1 mg/L（0.2mg/m3）。美国ANSI/NSPI-2003版本中，对池水中O3浓度未作规定，游泳池和SPA池上方空气中的O3浓度应执行OSHA标准（0.2mg/m3）。同时参考我国相关标准，制定“标准“中的O3限值为0.2mg/m3。

3.6 尿素
在我国，长期以来，游泳池水中的尿素是用来评价池水水质卫生的一个重要指标，GB9667-1996规定尿素≤3.5 mg/L，其含量超标时对人体会产生危害，并为此制定了游泳池水尿素的分析检测国家标准。根据我国文献报道，池水开放使用初期，尿素与耗氧量呈正比关系，随着时间的延长，尿素的指示性较耗氧量更为明显，这是由于耗氧量虽是反应有机物污染的间接指标，但它表示的是容易氧化的有机物质，因此随着时间的变化，其含量改变不显着，故耗氧量作为污染指标不够敏感，而尿素可反映池水的新旧程度，专家反馈意见多数建议应采用GB9667-1996标准中的尿素限值。更符合我国国情。

3.7 氰尿酸（Cyanuric Acid）
二氯异氰尿酸钠（Dichlor、NaC3O3CI2）和三氯异氰尿酸盐（Trichlor、C3N3O3CI2）消毒剂是一种有机化合物，它在水中分解成氰尿酸和氯，其中的氰尿酸是稳定剂。它能够稳定的原因是先控制次氯酸一次只生成一定的数量，是药剂中的氯逐渐释放出来，即使在阳光照射下，也只有很少一部分次氯酸流失。
二氯异氰尿酸钠和三氯异氰尿酸盐投入池中，氰尿酸会不断积累，氰尿酸量太少，剩余量很快会被阳光分解；量太少也可能会减少氯的效果，使菌群增加，产生藻类。所以对氰尿酸必须予以监测和控制。
国外发达国家游泳池中对氰尿酸如下的规定：
（1）美国：氰尿酸最小为10 mg/L，最大为150 mg/L，理想为30～50 mg/L。
（2）澳大利亚：氯稳定及的氰尿酸的浓度为100 mg/L，在室内游泳池和公共SPAs中不宜使用异氰尿酸。
（3）英国：有机消毒剂应用在人数负荷大，要求较低的游泳池的水处理，氰尿酸的浓度，最大为200 mg/L，理想范围是50～100 mg/L。
氰尿酸过多可能会导致水质过稳，使消毒剂不能充分发挥作用。目前我国使用二氯异氰尿酸钠和三氯异氰尿酸盐消毒剂比较普遍，我们认为增加氰尿酸的控制指标是十分必要的。

3.8 三卤甲烷（THMs）
THMs（又称卤仿），是潜在的致癌物质，国外的游泳水质标准除了FINA和德国有明确规定外（20ug/L限值）；日本（2001年）游泳池水质卫生标准中将THMs值希望暂定目标约为200ug/L；英国的规定与其次饮用水水质相同，限值为100ug/L。
虽然我国对游泳池水中THMs的检测并不完善，但显然池水加氯消毒后的THMs可能远远大于饮用水的规定。
有关专家认为将饮用水标准照搬到游泳池水质标准中并不合适。从整体而言，几乎不可能确知游泳时有多少池水被咽下，又有多少不同的副产物会进入人体组织，并且进入的量也会受游泳强度和时间长短的影响，所以这一限值很难确定。由于THMs在池边检测困难，费用高，美国，英国等国家没有将THMs的监测列入日常监测项目。
目前国际有将THMs限值放宽的趋势，我们也认为FINA和德国THMs的要求有些偏高，但控制THMs对滥用氯制剂消毒有一定的作用，而且这些物质确实有一定的致癌性，对运动员和经常游泳的人可能会产生影响，应加以控制。
3.9 菌落总数
发达国家的游泳池细菌总数的限值；德国规定过滤后>20CFU/mL,池内水<100 CFU/mL；英国规定池内水<100 CFU/mL;美国加利福尼亚规定<200 CFU/mL;法国规定<200 CFU/mL。
只要循环周期合适，有足够的消毒剂余量，pH维持在一定水平，水质平衡，同时经常反冲洗过滤器，并且游泳池管理完善，控制池水中的微生物并不困难。因为微生物等指标和人体健康直接相关，有必要采用比较高的标准。

3.10 总大肠菌群
水中总大肠菌群国际上均以100mL水样中污染的总大肠菌群最大可能数（MPN）表示。各国的限值要求（OMPN/100mL）均为不可检出。
本水质标准中提出菌落总数≤200 CFU/mL，总大肠菌群100mL不可检出的规定。当消毒失效，影响过滤器，特别是活性炭过滤器中细菌繁殖，管道系统和平衡池水质变差，水质受污染时，就必须进行葡萄球菌和金黄色葡萄菌的非常规检测。

3.11 氧化还原电位（ORP）
消毒剂投加量的控制指标是氧化还原电位（ORP），用ORP的主要优点是测量消毒剂量的活性，而不是普通测试方法测定消毒的量。各国游泳池经常保持ORP在650mV以上，可防止病菌和微生物生长。
ORP能够体现消毒剂的作用，活性炭的性能等指标，而且可以在线监测，是比较好的游泳池日常维护参数。

3.12 其他运行参数，未在标准列入，这些参数为保持池水的化学平衡也是很重要的。
碱度：碱度是对溶解度在水中碱性盐的测定。碱度越高，水体对由于消毒剂和pH调节剂而引起的PH值变化就具有更强的阻抗。如果碱度过高，能使PH值调整困难，使PH锁定（PH lock）。碱度太低，可能发生PH跳动。理想的总碱度值应为80～120 mg/L；可接受的碱度值为60～200 mg/L；较高较低均存在问题，池水会出现PH值过高或过低，水混浊或腐蚀。
钙硬度：钙硬度是指在池水中，所有不同的钙化合物所含钙离子的总和。通常在水中是一个相对稳定的因素，但在游泳池水处理方面，常常被忽视，实际上的游泳池水的钙硬度过高或过低都会引起腐蚀和结垢现象。如果池水钙硬度较低，只要碱度适当，就不会对水质产生很大影响。但池水钙硬度较高，一旦游泳池的PH或总碱度偏高就会产生腐蚀或结垢。理想的钙硬度为200～400 mg/L。
总溶解性固体：在标准中列出限值，作为超负荷或缺少稀释的预警，如果TDS过高，稀释可能是正确的处理措施。

游泳池水质检测简单的有二合一测水合，可以检测水的余氯和PH值。其他检测需要水质检测仪。

5. 菌落总数的计算

菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。

在进行菌落计数时，有一些样品的残渣会在视觉上与菌落混淆，因此，在进行计数时应该仔细分辨。菌落的形状相对规则，比较有光泽度，更饱满，而样品的残渣比较不规则，没有菌落的饱满度和光泽度。

另外，还可向培养基中添加一定浓度的TTC，可以使菌落成红色，便于观测和计数，但TTC的浓度不宜过高，否则会抑制菌落的生长。

从温箱内取出平皿进行菌落计数时，应先分别观察同一稀释度的两个平皿和不同稀释度的几个平皿内平板上菌落生长情况。平行试验的2个平板与菌落数应该接近，不同稀释度的几个平板上菌落数则应与检样稀释倍数成反比，即检样稀释倍数越大，菌落数越低，稀释倍数越小，菌落数越高。

菌落计数所得结果，可分别按以下几种不同情况作报告。 若1个稀释度的平均菌落数在30—300之间，则将该菌落数乘其稀释倍数报告之。 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30—300之间，则视二者之比如何来决定。若其比值小于2，应报告其平均数。

若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

(5)菌落总数测定方法视频扩展阅读：

计数和报告

1．操作方法：培养到时间后，计数每个平板上的菌落数。可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数，计算处原始样品中每克（或每ml）中的菌落数，进行报告。

2．到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0－4℃，但不得超过24h。

3．计数时应选取菌落数在30~300之间的平板（SN标准要求为25~250个菌落），若有二个稀释度均在30~300之间时，按国家标准方法要求应以二者比值决定，比值小于或等于2取平均数，比值大于2则其较小数字（有的规定不考虑其比值大小，均以平均数报告）。

4．若所有稀释度均不在计数区间。如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。

如菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘以最低稀释倍数报告之。有的规定对上述几种情况计算出的菌落数按估算值报告。

5．不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。

如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。

6．当平板上有链状菌落生长时，如呈链状生长的菌落之间无任何明显界限，则应作为一个菌落计，如存在有几条不同来源的链，则每条链均应按一个菌落计算。

不要把链上生长的每一个菌落分开计数。如有片状菌落生长，该平板一般不宜采用，如片状菌落不到平板一半，而另一半又分布均匀，则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数。

7．当计数平板内的菌落数过多（即所有稀释度均大于300时），但分布很均匀，可取平板的一半或1/4计数。再乘以相应稀释倍数作为该平板的菌落数。

8．菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。

固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（ml）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm）报告。

6. 大肠杆菌的检测方法

多管发酵法。

多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法，这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h，而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶，从而释放出荧光产物，进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。

在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵，分离培养试验，利用伊红美蓝培养皿分离，接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵，最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。

(6)菌落总数测定方法视频扩展阅读：

注意事项：

1、检样时注意无菌操作。

2、稀释时采用的稀释液可以用磷酸盐缓冲液或生理盐水，接种时可采用九管法，设置三个梯度，分别为0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一个稀释度的试管应充分混匀。

3、每次实验需要有阴性对照。

4、使用小倒管培养基配制时，为排净气泡，灭菌时不要把试管的盖子盖的太紧，灭菌后注意观察一下倒管中的气体是否排完全、

5、高压灭菌后等高压灭菌锅的压力表达到0，取出培养基放到冰箱冷却，效果会比较好。

7. 通过菌落数计算样品中的微生物数量的方法

菌落总数的计算方法

若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。

若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按如下公式计算：

N=∑C/（n1+0.1n2）d

式中：

N —样品中菌落数

ΣC —平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和

n1 —第一稀释度（低稀释倍数）平板个数

n2 —第二稀释度（高稀释倍数）平板个数

d —稀释因子（第一稀释度）

示例：

稀释度 1:100（第一稀释度） 1:1000（第二稀释度）

菌落数（CFU） 232，244 33，35

上述数据按8.2.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。

若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。

若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300 CFU 时，则以最接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

ps 8.2.2大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。

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