紫外分光光度计的计算方法

⑴ 紫外分光光度计计算方法同吸光度、浓度有什么关系吸光度是计算出来的吗计算方式是不是A=abc呢

• 朗伯—比耳定律（光吸收定律）A＝lg（I/I')= a b c 或者A＝lg（I/I‘)= εb c（a：吸光系数，L · g－1 · cm－1，ε：摩尔吸光系数，L·mol－1·cm－1；）

⑵ 紫外_可见分光光度法，用吸收系数法定量，公式是什么

一、原理可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法。它是以朗伯──比耳定律为基础。1朗伯—比耳定律A=lg—-=ECLT式中A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。二、使用范围凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。三、仪器可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。本仪器是根据相对测量的原理工作的，即先选定某一溶剂（或空气、试样）作为标准（空白或称参比）溶液，并认为它的透光率为100％（或吸收度为0），而被测的试样透光率（或吸收度）是相对于标准溶液而言，实际上就是由出射狭缝射出的单色光，分别通过被测试样和标准溶液，这两个光能量之比值，就是在一定波长下对于被测试样的透光率（或吸收度）。本仪器可精密测定具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物、有色物质或在适当条件下能与某些试剂作用生成有色物的物质。使用前应校正测定波长并按仪器说明书进行操作。四、仪器的校正1.波长的准确度试验以仪器显示的波长数值与单色光的实际波长值之间误差表示，应在±1.0nm范围内。可用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正。2.吸收度的准确度试验3.杂散光的试验4.波长重现性试验5.分辨率试验五、测定方法1.对照品比较法（1）按各品种项下的方法，分别配制供试品溶液和对照品溶液，对照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100±10%，所用溶剂也应完全一致，在规定的波长测定供试品溶液和对照品溶液的吸收度后，按下式计算含量，即得。（2）计算式A样×G对/稀释倍数×100×1含量（%）=————————————--×100%A对×G样/稀释倍数×100×12.吸收系数法（1）按各品种项下的方法配制供试品溶液，在规定的波长处测定其吸收度，再以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量。用本法测定时，应注意仪器的校正和检定。（2）计算式A样含量（%）=——————————————-×100%G样/稀释倍数×(E1％1cm)对×100×13.计算分光光度法采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按各品种项下规定的方法进行。当吸收度处在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波长的微小变化可能对测定结果造成显着影响，故对照品和供试品测试条件应尽可能一致。若测定时不用对照品，如维生素A测定法，则应在测定时对仪器作仔细的校正和检定。六、注意事项1.空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。2.测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池。3.在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。4.一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。5.吸收池应选择配对，否则要引入测定误差。

⑶ 紫外光度法

方法提要

在紫外光谱区，硝酸根有强烈的吸收，其吸光度与硝酸根的浓度呈正比。在波长210～220nm处，可测量其吸光度。水中溶解的有机物在波长220nm及275nm处均有吸收，而硝酸根在275nm处没有吸收。这样，需在275nm处测定硝酸根的吸光度进行校正。

方法适用于地下水中硝酸根的测定。最佳测定范围为0.2～20mg/L。

仪器和装置

紫外分光光度计。

石英比色皿。

试剂

盐酸。

氨基磺酸铵溶液(50g/L)取5g氨基磺酸铵溶于100mL蒸馏水中。

硝酸根标准储备溶液ρ(NO^-₃)=100mg/L称取0.1631g在105～110℃滚梁烘干1h的硝酸钾(KNO₃)溶于蒸馏水中，定容至1000mL。

硝酸根标准溶液ρ(NO^-₃)=10.0mg/L分取10.0mL硝酸根标准储备溶液，以水稀释至l00mL容量瓶中。

校准曲线

分取含硝酸根0μg、10μg、20μg、50μg、100μg、…1000μg的硝酸根标准溶液(10mg/L)于一系列100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至50mL左右，加入1mLlmol/LHCl，摇匀。加入3～5mL氨基磺酸铵溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在分光光度计上，于波长210nm处，用1cm石英比色杯，以试剂空白作参比，测量吸光度。歼掘以硝酸根含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。

分析步骤

取水样50.0mL于100mL容量瓶中，按校准曲线操作步骤进行测定。于210nm处测定后，调整波长至275nm，仍以试剂空白作参比，再一次测量吸光度。

按下式计算水样中硝酸根的质量浓度:

岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术

以硝酸盐氮表示的质量浓度:

岩石矿物分析第四分册资源与环境调查分析技术

式中:ρ(NO^-₃)为水样中硝酸根的质量浓度，mg/L;A_NO-3为减去有机物的吸收值后，从校准曲线(λ=210nm)上查得的硝酸根量，μg;V为所取水氏备核样体积，mL。0.226为硝酸根换算为氮的系数。

⑷ 紫外-可见分光光度计

紫外——可见分光光度计用于定量分析的基本方法是：用选定波长的单色光照射被测物质的溶液，测量它的吸光度，再根据吸光度计算被测组分的含量。
测量的理论依据是“光吸收定律”，即朗伯——比耳定律，当一适当波长的单色光照射吸光物质的溶液时，其吸光度与吸光物质浓度和透光液层厚度的乘积成正比。称为朗伯—比乐定律。可表示为：
A=Kbc
式中，A为吸光度，无单位。B为液层厚度，即通常所采用的吸收池厚度，单位常取cm。c为溶液浓度，单位也不固定，可为mol/L，也可为g/L、mg/mL等。K为比例常数，也称吸收系数。K与多种因素有关，如入射光波长、温度、溶剂性质及吸光物质的性质等，若这些因素中除吸光物质外，其它都固定不变，则K值就只与吸光物质有关。若溶液浓度以mol/L为单位，透光度层厚度以cm为单位，K就用符号“ξ”表示，称为“摩尔吸收系数”。
以上公式可用于单组份测定。若测定多组分，可利用吸光度的加和性，但前提条件是，各吸光物质的吸光质点之间相互不发生化学反应。即：
A=A1+A2+……An
使用仪器时，根据所测定物质选择适当的入射光波长，参比溶液，显色剂、吸光度值范围，浓度范围等等，依具体情况而定。

⑸ 紫外-可见光分光光度计 原理，基本构造，使用方法，注意事项及应用

一、分光光度计的基本工作原理
随着现代科技的不断发展和进步，现代分光光度法的测试手段和方法都在不断改进，但最根本的依据仍然建立在朗伯-比尔定律的基础之上。

A=KLC

式中：
A-为被测物在给定波长的需光吸光度值
K-为一系数，称为溶液的吸收系数（与入射光波长及被测物质的特性有关）
L-为被测物质的厚度（一般与比色池的厚度有关）
C-为被测物质的浓度
由上式可以看出，被测物质对单色光的吸光度与被测物质的浓度成正比。
实际测试时，单色光通过被测物质达到光电接收器，由光电倍增管或光电池转换成光电流，而光电流的强弱决定了吸光度值A的大小。假定通过参比样品的光电流为I。，而通过待测样品的光电流为I，则两者之比设定为τ，也称透射比（或以T%表示，称为透过率）。

则：τ=I/I。×100%

朗伯-比尔定律的贡献就是发现了透射比的负对数值（也就是吸光度A）的变化与物质的浓度的变化呈正比关系。

即：A=-lgτ或lg（I/I。）=KCL

同时，不同的物质对不同波长的单色光呈现出不同的吸光度值，这一变化特征也就是分光光度法用于物质的定性定量分析的理论基础。
基于上述原理，你可以知道无论以往的仪器还是现代的仪器，其最基本的工作要求就是为了能准确获得物质（或称样品）在某一波长的透射比或在某一个光谱波长范围的吸光度变化特性（具体说光谱特性谱图）。双光束分光光度计，同时测量参比样品和待测样品。由于参比样品和待测样品是同时测量，所以任何由光源带来的影响都被抵消扣除了，从方法上保
二、仪器的基本构造：不同档次进口或国产的仪器由三大部分组成：1、微机系统（提供数据运算放大，信号处理、计算机连接，自动波长设定等等）2、光学分光系统（通过光路分光使氘灯钨灯发出的复合光变为单色光）；3、稳压稳定系统（为氘灯钨灯和微机板提供稳压电源）
三、仪器注意事项：
仪器的使用环境
在你了解仪器的工作原理和性能后，你可以安排开机使用的前期工作。首先，必须为仪器建立一个合适的工作环境。由于任何仪器自身的抗干扰能力是有限的，因此，必须注意仪器工作环境的具体要求，尽量不要让仪器工作在环境条件的极限边缘。

2.2.1 温度与湿度
仪器应在5℃~35℃之间的环境温度条件下工作，但温度过低仪器的稳定时间较长，温度偏高时必须注意仪器的通风条件，同时也考虑至样品的挥发性所引起的测量误差。而仪器的光学件对于环境湿度的敏感性较高，在潮湿地区或相对湿度>85%用户必须考虑去湿措施，以确保仪器光学元器件的寿命。

2.2.2 工作电源
UV1901仪器可在220V±22V、50Hz±1Hz的电源条件下工作，也可在110V±11V、 60Hz±1Hz电源条件下工作。一般出厂设置在220V条件下，若你的地区电源为110V，请找到仪器后部，靠电源插座处有一个电压变换开关，把开关拨向指示110V即可
由于外部电源的质量对仪器的工作稳定性有极大关系，所以如果你所属地区的外部交流电压不很稳定，或者电网上的大功率动力性电气设备很多，建议你使用一个交流稳压设备（功率1000W以上），以防止“电网污染”对仪器的影响。当然，电源插座也必须符合国家最新标准，接触必须良好，否则仪器的工作无法正常。

2.2.3 接地线
由于变压器的交流感应，若无接地良好的地线的话，仪器的金属部位可能带电。而且仪器接地不良就没有良好的屏蔽电位，会造成仪器输出信号不稳，数据显示的跳动率较大。因此，建议你在使用前对电源的接地线很好的检查一下，必须符合有关电工标准。

注意！ 电源中的零线不能与地线接在一起！
三、仪器的使用方法，每个厂家因为原件不同所以方法也不同

2-2
2.2.4 整机的放置
仪器必须放在平稳且周围无明显震动源的工作台上。仪器若靠墙放置注意离墙必须大于15cm，以保证通风散热，同时仪器安放处也应避免强烈的阳光直

⑹ 紫外可见分光光度计怎么由吸光度计算含量

根据朗伯比尔定律得出：当一束平行单色光通过一定液层厚度的有色溶液时，由于溶质吸收了光能，光的强度就会减弱。溶液浓度越大，液层越厚，入射光越强，光被吸收的就越多。

如果用公式表示的话，就可以表示为表示为：A=E*C*L（A为吸光度，C为溶液浓度，L为液层厚度）。E是物质在一定波长下的特征

常数，与对光吸收的灵敏度呈正相关。该公式适用于有色溶液和均匀非散射的吸光物质（如：固、液、气）。在进行含量测定的时候，我们往往选择被测物质的最大吸收波长来作为使用波长，以防止外界干扰。于是，我们可以根据公式可以计算测定管中物质的含量，过程如下：

A1=E1*C1*L1 A2=E2*C2*L2

A1/(E1*C1)=A2/(E2*C2)

由于标准液和待测液中的物质相同，故E1=E2∴C2=(A2/A1)*C1因为标准液和待测液的体积相等，物质含量m=C*V*M（M为相对分子质量，V为体积）故m2=（A2/A1)*m1所以溶液中物质的含量m2。

(6)紫外分光光度计的计算方法扩展阅读：

在分光光度分析中，比尔定律是一个有限的定律，其成立条件是待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射；入射光为单色平行光。

导致偏离朗伯-比尔定律的原因很多，但基本上可分为物理和化学两个方面。物理方面主要是入射光的单色性不纯所造成的；化学方面主要是由于溶液本身化学变化造成的。

比尔定律在有化学因素影响时不成立。解离、缔合、生成络合物或溶剂化等会对比尔定律产生偏离。离解是偏离朗伯-比尔定律的主要化学因素。溶液浓度的改变，离解程度也会发生变化，吸光度与浓度的比例关系便发生变化，导致偏离朗伯-比尔定律。

溶液中有色质点的聚合与缔合，形成新的化合物或互变异构等化学变化以及某些有色物质在光照下的化学分解、自身的氧化还原、干扰离子和显色剂的作用等，都对遵守朗伯-比尔定律产生不良影响。

来自出射狭缝的光，其光谱带宽度大于吸收光谱带时，则投射在试样上的光就有非吸收。这不仅会导致灵敏度的下降，而且使校正曲线弯向横坐标轴，偏离朗伯-比尔定律。非吸收光越强，对测定灵敏度影响就越严重。并且随着被测试样浓度的增加，非吸收光的影响增大。当吸收很小时，非吸收光的影响可忽略不计。

⑺ 紫外可见分光光度计的用法

752紫外可见分光光度计
仪器的工作原理
分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的

吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的

吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减

弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。
τ=I/Io
log I/Io=KCL
A= KCL
从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过
的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根
据上述物理光学现象而设计的。
仪器的安装、使用
安装

1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接

地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。

2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。

使用：仪器使用前需开机预热30min。

本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F

1SD

2 ▽／0％

3∆／100％

4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ 、C、F之间的值。

A——吸光度（Absorbance）

T——透射比（Trans）

C——浓度（conc）

F——斜率（Factor）

(2)F值 通过按键输入（后面介绍如何设置）

5SD键：该键具有2个功能

a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算

机）。

b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，

计算当前的C值（C=F*A）。

6 ▽／0％键：该键具有2个功能

a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。

b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本

键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。

而按键开始自动减1。

7 ∆／100％键；该键具有2个功能

a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。

b）上升键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动加1，如果按住本

键不放，自动加1会加快速度，如果F值为1999后，再按键它会自动

变为0，再往键开始自动加l。

例如：设置斜率为1500。

方法一

T）按 A／τ／C／F键切换到 F状态。

b）如果当前F值为1000，则按∆／100%键，直到F值为1500。

C）再按 SD键，表示当前的 F值为 1500，然后自动回到 C状态，假如所

测的 A值为 0．234，则此时显示 C值为 0351。

方法二

a）按A／τ／C／F键切换到F状态。

b）如果当前的 F值为 1000，则按∆／100%键，直到F值为 1500、再按 A／τ／C／F键切换到C状态，假如所测的A值为0.224，则此时显示C值为0351。