A. 辣椒红的分析检测
(1)将辣椒红色素溶于0.1%丙酮溶液中,其颜色应呈橙黄至红橙色。
(2)取辣椒红色素0.5 g,向其中加入硫酸2mL,应变成蓝色。
(3)辣椒红色素的丙酮液在波长460 nm和470 nm附近有最大吸收峰。 在辣椒红色素组分的分离过程中如何测定其准确含量是研究者普遍面临的难题,
测定辣椒红色素的方法主要有以下几种 。
( 1) 分光光度法。辣椒红色素的组分分子结构中含有的发色团使其在紫外—可见光区有着独特的吸光区,其溶液或结晶在可见光下具有十分绚丽的红、橙或黄色。根据辣椒红色素的这一特性可测定色价( Color value units) 。色价是辣椒红色素颜色深浅的衡量标准,也是辣椒红色素的一个重要指标。实际测定方法:称取一定质量的试样( 精确至0.000 2 g) 用丙酮稀释一定倍数,用分光光度计于460nm波长处以丙酮作参比液,于25px 比色皿中测定其吸光度。在一定的稀释倍数下,吸光度与辣椒红色素的含量成正比。按下式计算:
E1%1 cm460 nm=Af/m×1/100
其中:E1%1 cm460 nm被测试样为1%,1 cm 比色皿,在最大吸收峰460nm处的吸光度即为色价;A- 实测试样的吸光度;f- 稀释倍数;m- 试样质量(g)。
( 2) 半定量测定样品中色素含量 。取色素液,用丙酮适当稀释后在459 nm 处测光吸收值,按下式计算出样液中含原添加色素的克数。样液中原添加色素的克数=A×K×V(/ 原色素色价×100),式中A为光吸收值,K 为稀释倍数,V 为样品色素提取液的总体积( mL) 。
( 3) 薄层层析法分析辣椒红色素的成分 。溶剂萃取法提取的油状辣椒红色素由多种组分组成,极性大小不同,用展开剂系统可将其分离,即将高效硅胶G 板在110 ℃活化0.5 h,将色素用丙酮稀释,用微量毛细管点样,点样后薄板放在层析缸中按上述方法展开,至斑点分开时终止层析,取出薄板晾干。计算展开系统薄层层析的Rf值。
( 4) 色谱法。应用最广泛也最适用于天然色素分析的是高效液相色谱( HPLC) ,它具有分离效能高、分析速度快、样品用量少等优点,同时又不受样品的沸点与热稳定性限制,因此可用于辣椒红色素的分析测定。