① 大蒜素的标准曲线该如何绘制
1 实验材料、仪器及试剂
1.1 实验材料
脱毒紫皮大蒜(取材于陇南成县)。
1.2 实验仪器
设备电子天平、高速冷冻离心机、紫外可见光分光光度计、荧光灯、水浴锅、刻度试管、离心管、烧杯、容量瓶、刻度吸管、透析袋等。
1.3 实验试剂
硫氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、甲硫氨酸(Met)、NBT、核黄素、蔗糖、蒽酮、乙酸乙酯、浓硫酸等。
2 实验方法
2.1 大蒜中超氧化物歧化酶提取以及超氧化物歧化酶活性测定
2.1.1 粗提取方法取脱毒大蒜 10g 于预冷的研钵中,加适量提取介质在冰浴下研磨成匀浆,加入提取介质冲洗研钵,并使终体积为200ml。取100ml 于4℃下10000rmin-1 离心15min,上清液即为SOD 粗提液。
2.1.2 纯化方法将硫酸铵研磨后加入SOD 提液中,使之达到50%饱和度,放置于4℃冰箱内30min,10000rmin-1 冷冻离心20min,除去杂蛋白,在上清液中再加入硫酸铵至90%饱和度,放置于4℃冰箱内2h,于10000 rmin-1 冷冻离心20min,收集沉淀,溶于最小量的0.5mol/L,pH7.8 磷酸缓冲液,透析。
2.1.3 显色反应取透明度好、质地相同的试管4 支,2 支为测定、2 支为对照(见表1)。混匀后,给1支对照管罩上比试管稍长的双层黑色硬纸套遮光,与其他各管同时置于4000xl 日光下反应20~30min(要求各管照光情况一致,反应温度控制在25~35℃之间视酶活性高低适当调整反应时间)。
2.1.4 SOD 活性测定与计算至反应结束后,用黑布遮盖上试管,终止反应。以遮光的对照管作为空白,分别在560nm波长下测定各管的吸光度,按下公式计算SOD 的活性:SOD 活性=(A0-AS)×VT/A0×0.5×FW×V1 ;SOD 比活力=SOD 总活性/蛋白质浓度。式中 SOD 总活性以每克鲜重酶单位表示;比活力单位以每毫克蛋白质单位、酶单位mg-1 表示;A0照管对照管的光度吸收值;AS样品管的光吸收值;VT样液总体积(ml);V1测定时样品用量(ml);FW样品鲜重(g);蛋白质浓度单位为每克鲜重含蛋白质毫克数(mgg-1)。
2.2 蒽酮比色法测定大蒜可溶性糖
2.2.1 标准曲线的制作
2.2.1.1 1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解,然后加入0.5ml浓硫酸,转入100ml 容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。
2.2.1.2 100μg/L 蔗糖标准液精确吸收 1%蔗糖标准液1ml 加入100ml 容量瓶中,加水至刻度。
2.2.1.3 蔗糖标准曲线制作取 20ml 刻度试管11 支,从0~10 分别编号,按表2 加入溶液和水。然后按顺序向试管中加入0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml 浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm 波长下测其吸光度,以吸光度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。
2.2.2 可溶性糖的提取
取新鲜脱毒大蒜,擦净表面污物,均称取3.0g,共3 份,研磨。分别放入3 支刻度试管中,加入5~10ml 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2 次),提取液过滤入25ml 容量瓶中,反复漂洗试管及残渣,定容至刻度。
2.2.3 显色测定
吸取样品提取液0.5ml 于20ml 刻度试管中(重复三次),加蒸馏水1.5ml,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的吸光度,计算可溶性糖的含量。
2.2.4 结果计算
由标准线性方程求出糖的含量(μg),按下式计算试样品的含量。
可溶性糖含量=(从回归方程求得糖的量/吸取样品液的体积)×提取液量×稀释倍数)/(样品干重×106)×100%。
2.3 大蒜素的提取分离及测定
2.3.1 实验流程脱毒大蒜→去皮→洗净→捣碎→酶解→溶剂萃取→固液分离→上清液→减压浓缩→大蒜浓缩液。
2.3.2 实验原理大蒜素是浅黄色油状液体,微溶于水,易溶于乙醇、苯、乙醚等溶剂,利用这一性质可以用溶剂将大蒜油浸提出来。溶剂的选择非常关键,要求该溶剂的溶解度充足,而且浸提结束后易于分离(沸点差异显着),尽量不含其它的不良气味和溶剂残留。又由于大蒜油多用于食品领域,所以选易挥发且对人负作用小的乙醇作为萃取剂。
2.3.3 萃取条件不同的乙醇体积分数、乙醇加入量、萃取温度、萃取时间对大蒜素产率的影响。
2.3.4 大蒜素的测定采用分光光度法。
3 实验结果与分析
3.1 脱毒大蒜中超氧化物歧化酶的分离及活性测定
通过对脱毒大蒜SOD 的粗提,利用硫酸铵盐析法对SOD 进行初步纯化,并利用透析的方法进行SOD 的纯化,最后利用分光光度法对SOD 活性进行活性测定。结果表明(见表3):通过多次重复实验,对SOD 活性进行测定,在560nm 处吸光值A0(对照管的光度吸收值)的平均值为0.091;AS(样品管的光吸收值)的平均值分别为0.0174、0.014、0.0157;经计算SOD 活性平均值为5.460,其SOD 比活力为546U/mg。
3.2 脱毒大蒜多糖含量的测定
3.2.1 蔗糖标准曲线的制作通过利用梯度浓度稀释法,配制20ug/mL、40ug/mL、60ug/mL、80ug/mL 及100ug/mL的蔗糖溶液,然后在630nm 下分别测量其吸光值,再根据各自的吸光值绘制蔗糖的标准曲线。具体吸光值及标准曲线见表4 和图1,根据标准曲线图可知,标准曲线为Y(蔗糖浓度ug/mL)=0.0059x(吸光值A)-0.0238,相关性为R2=0.9975。说明此标准曲线在蔗糖浓度为0-100ug/mL 范围可行。
3.2.2 脱毒大蒜中可溶性糖的含量通过采用蒽酮比色法测定脱毒大蒜中可溶性多糖的含量,结果表明(见表5):在630nm处进行分光光度检测,经过测量6 个重复的大蒜可溶性糖的吸光值,其吸光值A 在2.67-2.992范围之间,经计算脱毒大蒜中可溶性糖的平均含量为485.75ug/mL。
3.3 大蒜素的提取分离及测定
3.3.1 乙醇体积分数对大蒜素产率的影响取去皮鲜大蒜100g,平均分成5 份,加热40℃下恒温水浴1h,然后分别加入80 mL 体积分数95%、 90%、 85%、80%、75%的乙醇80mL 于30℃下萃取1.5h。减压蒸馏后测产物中大蒜素含量,结果见表6。由表4 可以看出,随着乙醇体积分数的提高,大蒜素的产率也在提高,这也说明了大蒜素易溶于有机溶剂而难溶于水,实验证明:当乙醇体积分数为95%时,大蒜素产率最高,达到0.037g/20g。
3.3.2 乙醇加入量对大蒜素产率的影响将 100 g 脱毒大蒜加适量磷酸缓冲液捣成蒜泥,40℃水浴1 h,平均分成5 份然后按40、60、80、100 和120mL,分别加入体积分数95%乙醇30℃水浴1.5h, 50℃下减压蒸馏,然后检测获得物中大蒜素的含量,结果见表7。从表5 可以看出,乙醇加入量对大蒜素产率有很大的影响,大蒜素的产率随着料液比的增加而逐渐升高,可是从40mL 到100mL 大蒜素的提取率迅速增长,而从100mL 以后则增长比较缓慢了,这是因为随着料液比的增加。大蒜素提取率最终会趋向于一个极限值,这符合大蒜素在水相与有机相的分配系数。考虑到原料与能耗多方面因素,100g 大蒜加入100mL 95%乙醇提取效率最好,大蒜素含量为0.039g/20g。
3.3.3 萃取温度对大蒜素产率的影响取去皮新鲜脱毒大蒜100g,平均分成5 份。分别加入适量磷酸缓冲液研碎,40℃下水浴1h,然后分别加入100 mL 体积分数95%乙醇于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃下萃取1.5h, 50℃下减压蒸馏,测出馏出物中大蒜素的含量,结果见表8。从表6 可以看出,大蒜素的提取率随萃取温度的升高而成递减的趋势。这是因为温度越高,大蒜素越不稳定,转移到有机相的大蒜素也就越少。当萃取温度为30℃时,大蒜素的提取率最高,含量达到0.038g/20g。
3.3.4 萃取时间对大蒜素产率的影响取去皮新鲜脱毒大蒜100g,平均分成5 份,分别加入适量磷酸缓冲液研碎,在40℃条件1h,再分别加入80 mL 95%乙醇于30℃下分别萃取1h, 1.5h, 2h, 2.5h 和3h,减压蒸馏后测定萃取液中的大蒜素含量,结果见表9。从表7 可以看出,大蒜素的提取率随萃取时间表现出先增后减的趋势。这应当是萃取时间过短,生成的大蒜素不能完全转移到有机相当中;而时间太长,大蒜素又易转化为其它副产物。本实验证明当萃取时间为1.5 h 时,大蒜素的提取率最高,达到0.038g/20g。
综上所述:实验证明捣碎的蒜泥在40℃下1 h,以100 mL 95%乙醇作为萃取剂、于30℃下萃取蒜泥1.5h,大蒜素的提取最高含量为0.038g/20g(0.190%)。
② 中国药典中有没有关于大蒜素的检测
大蒜素化学药品地标升国标1册 大蒜素肠溶胶丸化学药品地标升国标1册 大蒜素注射液化学药品地标升国标1册 大蒜素肠溶胶囊化学药品地标升国标12册 大蒜素胶囊化学药品地标升国标10册 大蒜素肠溶胶丸《国家药品标准(1~16)》药品说明书勘误表 大蒜素注射液国家标准化学药品地标升国标第十六册 大蒜素肠溶胶丸国家标准化学药品地标升国标第十六册
故,中国药典并未有关于大蒜素的检测
大蒜素 国家标准化学药品地标升国标第十六册
③ 蒜粒的国标
不知道你要的具体标准,多给你提供几个。
标准编号:SN/T 0230.2-1993
标准名称:出口脱水大蒜制品检验规程
标准状态:现行
实施日期:1900-1-1
标准编号:SB/T 10348-2002
标准名称:大蒜
标准状态:现行
实施日期:2003-1-1
标准编号:NY/T 405-2000
标准名称:脱毒大蒜种蒜(苗)病毒检测技术规程
标准状态:现行
实施日期:2000-12-1
标准编号:NY 5228-2004
标准名称:无公害食品 大蒜生产技术规程
标准状态:现行
实施日期:2004-3-1
标准编号:NY 5227-2004
标准名称:无公害食品大蒜
标准状态:现行
实施日期:2004-3-1
标准编号:GB/T 18527.2-2001
标准名称:大蒜辐照抑制发芽工艺
标准状态:现行
实施日期:2002-3-1
颁布部门:中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
内容简介:本标准规定了大蒜辐照抑制发芽的工艺参数和技术要求。本标准适用于白皮大蒜辐照抑制发芽。其他大蒜品种科参照执行。本标准不适用于杀灭大蒜的害虫及微生物。
④ 大蒜油有没有 国家标准或行业标准啊!大蒜油GB/T14156-93国家标准不对的根本没有参数要求,
大蒜油还没有国家标准和行业标准,但有一个地方标准: DB37/T 1475-2009大蒜油通用技术条件,生产企业可以编制食品安全企业标准,经备案后作为大蒜油的产品的执行标准。
⑤ 一瓣大蒜有多少大蒜素
一瓣大蒜有0.021毫克大蒜素。根据查询相关公开资料显示,一克大蒜里面含有0.003毫克的大蒜素,一瓣蒜大约重7克左右,经过数学计算一瓣大蒜有0.021毫克大蒜素。