杂质计算方法内标外标

‘壹’ 如何选择设计药物中特殊杂质检查方法

特殊杂质是指在该药物的生产和贮存过程中，根据药物的性质、生产方式和工艺条件，有可能引入的杂质。这类杂质随药物的不同而异。由于特殊杂质多种多样，检查方法各异，故一般将其分成四大类：

一、物理法：利用药物与杂质在嗅、味、挥发性、颜色、溶解及旋光性等上的差异，检查所含杂质是否符合限量规定。

二、化学反应法：

（一）容量分析方法：利用药物与杂质在酸碱性及氧化还原性等方面的差异，用标准溶液滴定来测定杂质含量。

（二）重量分析方法：在一定实验条件下测定遗留物重量。

（三）比色法和比浊法：利用杂质特有的呈色反应（比色法）和沉淀反应（比浊法）与标准对照。

三、色谱法：

（一）纸色谱法（Paper
Chromatography，P.C）：取一定量供试品溶液杂质限量对照品溶液，于同一色谱滤纸上点样，展开，检出后，比较杂质斑点的个数、颜色深浅或荧光强度等。通常用于极性较大的药物或放射性药物的检查。医学教育|网搜集整理该法展开时间长、斑点较为扩散、不能用强酸等腐蚀性显色剂。

（二）薄层色谱法（Thin Layer
Chromatography，TLC）：类似纸色谱法，但较简便、快速、灵敏、不需特殊设备，适用于有机杂质的检查。另外，一般将与主药有密切相关的原料、中间体、副产物或分解产物等特殊杂质称为有关物质，将甾体类药物中的特殊杂质称为其它甾体。TLC法按操作方法又可归纳为如下几种情况：1、在一定供试品及检查条件下，不允许有杂质斑点存在。

2、选用实际存在的待检杂质作为杂质对照品。

3、选用可能存在的某种杂质作为杂质对照品。

4、将供试品稀释到适当浓度作为杂质对照溶液。

5、选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为杂质对照品。

（三）高效液相色谱法（High Performance Liquid
Chromatography，HPLC）：本法分离效能高、专属性强和检测灵敏，适用于有机杂质，但更多地用于含量测定。

（四）气相色谱法（Gas
Chromatography，GC）：主要用于挥发性有机杂质和有机溶剂残留量的检查。

1、挥发性有机杂质测定方法：（1）面积归一化法：计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率，但溶剂峰不计算在内。

（2）主成分自身对照法：先按供试品规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液，作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，一般应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并与对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。

（3）内标法测定杂质总量限度：供试品按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图I；再配制含有内标物质的供试品溶液，同法记录色谱图II.如果图I中没有与图II上内标峰保留时间相同的杂质峰，则图II中各杂质面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）。

（4）内标法加校正因子测定供试品中某个杂质（或主成分）含量。

（5）外标法测定供试品中某个杂质（或主成分）含量。

‘贰’ 杂质外标法计算公式要乘以100吗

这个要看你的计算方法，究竟是面积归一化法？还是外标法计算了。

简单说，面积归一化法的0.1%是峰面积计算。
面积归一化法就是：杂质的峰面积/总峰面积 不大于0.1%
比如你进了一针样品，总峰面积，也就是所有色谱峰的面积之和是10000，那么单一杂质的面积不能够大于10000*0.1%，也就是不能大于10。

而外标法中，这个0.1%通常是以浓度计算。
比如，你的样品，也就是主成分浓度是1.0mg/ml，然后你就按照实验配制杂质的对照品，然后根据对照品峰面积、对照品浓度和样品中杂质的峰面积，计算出样品之中的杂质浓度。
这个杂质的浓度不能够大于主成分的0.1%，也就是1.0mg/ml*0.1%的浓度。

‘叁’ 高效液相色谱法的计算方法是怎样的

[编辑本段]测定方法定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。


面积归一化法


测定供试品（或经衍生化处理的供试品）中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外,可为该品种项下主成分保留时间的倍数。


主成分自身对照法

当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。


内标法
测定供试品中杂质的总量限度
采用不加校正因子的峰面积法。取供试品，按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图i；再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图ⅱ。记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的倍数，色谱图上内标峰高应为记录仪满标度的30％以上，否则应调整注样量或检测器灵敏度。
如果色谱图ⅰ中没有与色谱图ⅱ上内标峰保留时间相同的杂质峰，则色谱图ⅱ中各杂质峰面积之和应小于内标物质峰面积（溶剂峰不计在内）。如果色谱图ⅰ中有与色谱图ⅱ上内标物质峰保留时间相同的杂质峰，应将色谱图ⅱ上的内标物质峰面积减去色谱图ⅰ中此杂质峰面积，即为内标物质峰的校正面积；色谱图ⅱ中各杂质峰总面积加色谱图ⅰ中此杂峰面积，即为各杂质峰的校正总面积，各杂质峰的校正总面积应小于内标物质峰的校正面积。

加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量

按各品种项下的规定,精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子：
as／ms]校正因子f＝-
ar／mr
式中
as为内标物质的峰面积或峰高，ar为对照品的峰面积或峰高；
ms为加入内标物质的量,mr为加入对照品的量。
再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品（或其杂质）峰和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量：ax
含量（mx）＝f×-as／ms
式中
ax为供试品（或其杂质）峰面积或峰高；
mx为供试品（或其杂质）的量。
f、as和ms的意义同上。
当配制校正因子测定用的对照溶液和含有内标物质的供试品溶液使用同一份内标物质溶液时，则配制内标物质溶液不必精密称（量）取。


外标法

测定供试品中某个杂质或主成分含量
按各品种项下的规定,精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品和供试品待测成分的峰面积（或峰高），按下式计算含量：
a<[x]>
含量（mx）＝mr×-ar式中各符号意义同上
由于微量注射器不易精确控制进样量，当采用外标法测定供试品中某杂质或主成分含量时，以定量环进样为好。

‘肆’ 液相色谱仪检测样品中杂质含量如何计算

计算含量有内标法和外标法，最小二乘法等好多的，常用的就是外标一点法。
质量百分含量=样品面积*对照品浓度*体积*稀释倍数/对照品面积/称样量*100%

‘伍’ 内标法和外标法的区别

区别：内标法是把标准物质加入到被测样品中，外标法不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定。

1、外标要求仪器重复性很严格，适于大量的分析样品，因为仪器随着使用会有所变化，因此需要定期进行曲线校正。 此法的特点是操作简单，计算方便，不需测量校正因子，适于自动分析。但仪器的重现性和操作条件的稳定性必须保证，否则，会影响实验结果。

2、内标法要求挺严格的，对于内标物的选择要有一定的原则，适于分析样品量较少的情况；不要求样品里的所有组分都出峰，只要内标物和所关注的组分出峰并分离好就可以了； 定量准确，对进样量和操作条件的控制不很严格，但必须准确称量试样和内标物，否则会影响实验结果。

3、内标法：通过内标物与对照品的浓度、峰高/面积计算校正因子，然后通过校正因子、待测物峰高/面积、内标物浓度、峰高/面积，计算待测物浓度；需要与待测物性质非常相似（如吸收系数、出峰位置，但是不能干扰待测物）的内标物。外标法：通过对照品浓度、峰高/面积和待测物的峰高/面积，计算待测物浓度。

其中 Ai和As分别为待测物和内标物的峰面积或峰高，ms为加入内标物的量。必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成为标示量的百分含量，或根据稀释倍数和取样量折算成百分含量

‘陆’ 内标法和外标一点法的计算原理是什么

一、内标法的计算原理：

将一定重量的纯物质作为内标物加到一定量的被分析样品混合物中，然后对含有内标物的样品进行色谱分析，分别测定内标物和待测组分的峰面积（或峰高）及相对校正因子，按公式即可求出被测组分在样品中的百分含量。内标法是色谱分析中一种比较准确的定量方法，尤其在没有标准物对照时，此方法更显其优越性。

二、外标一点法（即外标法）的计算原理：

按梯度添加一定量的标准品（对照品）于空白溶剂中制成对照样品，与未知试样平行地进行样品处理并检测。不同浓度的标准品进样，以峰面积为值绘制成标准曲线，从而推算出未知试样中被测组分浓度的定量方法。

例如，在色谱法中，想知道被测样品浓度。可以用外标法首先用待测组份的标准样品绘制工作曲线，测出各峰的峰高或峰面积对应的样品浓度，绘制出标准曲线。实际应用时，测出峰高或峰面积对应标准曲线，就可以得到样品浓度。

(6)杂质计算方法内标外标扩展阅读：

外标法的应用范围：

外标法适用于工厂中的常规分析，它用于衡量组分的分析也能得到满意的结果。这个方法的精确度，在很大程度上取决于操作条件的控制。样品分析的操作条件，必须严格控制于绘制校正曲线时的条件。

当峰高对操作条件的敏感性以及对拖尾峰、柱子超负荷和检测器有大的响应时，给出非线性的校正曲线，此时峰面积计算常常可以得到更好的结果。不过，对重叠峰，难以准确的测量峰面积，必须提高分离度才能达到预期的效果。

对于工厂的常规分析，使用外标法必须经常对校正曲线进行验证。如果曲线外推通过坐标原点，验证时可以只取一个点（进一次标准样品）外标法误差的来源，除了分离条件的变化之外，就是进样的重复性。

使用注射器进样，外标法的误差大约在0.5% 以内。但是，使用定量进样阀可获得1%的精密度；若同时小心控制分离参数，分析精密度可达±0.25%。

‘柒’ 仪器分析中加标法、外标法、内标法分别是什么

内标法：内标法是一种间接或相对的校准方法。在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校准和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
外标法：就是应用欲测组分的纯物质来制作标准曲线，来求取未知组分的方法。
加标:将一系列已知量待测物分别加入到几等份的样品中，配制成浓度为(cx+0)，(cx+c1),
(cx+c2),
(cx+c3)……..，得到和样品有相同基体的标准系列
你说的加标法我觉得就是标准加入法，即在加标后，通过仪器分别测量以上系列的响应值S0，S1，S2，S3，S4……；以浓度c
对响应信号与S作图，再将直线外推与浓度轴相交于一点，求得样品中待测物浓度cx。

‘捌’ 纯物质中微量杂质分析通常采用哪些定量方法

归一化法、外标法、内标法、内标校正曲线、内标对比法和内加法等。
（1）归一法：优点是简便，定量结果与进样量无关、操作条作变化时对结果影响较小，缺点时必须所有组分在一个分析周期内都能流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。该法不能用于微量杂质的合量测定。
（2）外标法：分为校正曲线法和外标一点法。外标法不必加内标物，常用于控制分析，分析结果的准确度主要取决于进样的准确性和操作条件的稳定程度。
（3）内标法：由于操作条件变化面引起的误差都将同时反映在内标物及欲测组分上而得到抵清，所以该法分析结果准确度高，对进样量准确度的要求相对较低，可测定微量组分。但实际工作中，内标物的选择需花费大量时间，样品的配制也比较繁琐。
（4）内标校正曲线法：该法消除了某些操作条件的影响，也不需严格要求进样体积准确。
（5）标准加入法：在难以找到合适内标物或色谱图上难以插入内标时可采用该法。

‘玖’ 化学分子计算：杂质含量怎么算

当是100%的纯尿素【co（nh2）2】时，含n量为：2*14/60=46.7%

然后，可以根据比例关系：100%~~~~~对应~~~~46.7%

x
对应
42.4%

即是100%/46.7%=x/42.4%

这样解得的x就是
不纯尿素中含有的
co（nh2）2的百分量。。。然后，
1-x
就好了

‘拾’ 有关物质如何计算

根据自身对照外标法计算：杂质含量=F*C1/C2，F是1/400=0.25%，C1是供试品中杂质峰的峰面积，C2是自身对照主峰峰面积。