转染试剂计算方法

‘壹’ 细胞转染的常用步骤

1. 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
2. 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体 体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3. 将混合液在室温放置10―15分钟。
4. 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5. 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6. 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。

‘贰’ 脂质体转染原理

1定义编辑
最初，人们只是运用脂质体模拟生物膜，研究膜的构造及功能，从而发现了膜的融合及内吞作用，因而可用作外源物质进入细胞的载体。

2特征编辑
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将DNA分子包裹入内，形成DNA一脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用，偶尔也通过直接渗透作用，DNA传递进入细胞，形成包涵体或进入溶酶体其中一小部分DNA能从包涵体内释放，并进入细胞质中，再进一步进入核内转录、表达。

已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15)；转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小，脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰，甚至影响研究的结论。这已引起了许多研究者的注意。

虽然人们早已发现脂质体对细胞的毒性，对研究的影响，但由于一直没有更好的方法尤其是更高效的转染方法代替脂质体，所以脂质体转染试剂一度应用非常广泛。同时，人们也一直在寻找更有效、毒性小同时对研究影响也小的转染试剂。由于脂质类转染试剂对细胞的毒性是由其脂质特性决定的，众多的研究者和生物公司将新一代转染试剂的开发聚焦在非脂质体的聚合物上，一种纳米材料的聚合物已经研发出来，其原理是：分子内含有许多氨基，在生理PH下会发生质子化，这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面的负电荷，使DNA分子由伸展结构压缩为体积相对较小的DNA粒子，并包裹在其中，使DNA免受核酸酶的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA转移进入细胞，形成内含体(endosome)，DNA从内含体释放，进入细胞质中，再进一步进入核内转录、表达。通过纳米技术生产出的转染试剂在纳米尺度表现出结合保护DNA能力强、毒性低的独特性能。

‘叁’ 转染试剂的介绍

转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。基因转染技术不仅是研究转基因和基因表达的重要工具，而且是目前基因治疗的关键步骤。理想的基因转染试剂应该具有如下特点：高效转染；安全；低细胞毒性；方法简单；省时、经济。

‘肆’ siRNA转染实验

通常是建议用来稀释siRNA和稀释转染试剂的培养基是无血清培养基。但我们课题组用的BIODAI转染前后不需要换成无血清培养基。遇到特别的，可以在转染开始之前更换新鲜的含血清培养基，以防转染后孵育阶段细胞密度太大、营养不足导致的细胞死亡。

‘伍’ 转染试剂的简介

哺乳动物的转染技术在60年代末70年代初即已引入。
目前, 将外源DNA 导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类，即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染，以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染的方式将外源DNA 导入到细胞中, 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统最为常用。
其中病毒载体的特点是整和效率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达，缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注射法的特点是转染率较高，缺点是需要昂贵的仪器，前者对细胞的损伤较大，后者在导入DNA 时需要一个细胞一个细胞地注射，不适合大量细胞研究的需要。
磷酸钙在良好的转染条件下，可以在293T等细胞的转染达到较高的转染效率。但磷酸钙转染有一个突出的问题，非常不稳定，尤其受PH值的影响非常大，在实验中使用的每种试剂都必须小心校准，保证质量，因为甚至偏离最优条件十分之一个PH都可能导致磷酸钙转染的失败，经常即使最熟练的转染实验者也不能保证每次磷酸钙转染的成功，他们可能经常为莫名其妙的转染失败而沮丧。同时，他们还经常发现，往往小体积的转染比如6孔板以下的转染效果比较理想，可一换到大皿，经常转染效率下降很快。磷酸钙的先天缺陷往往是实验梗阻的主要原因。

‘陆’ rnaimax 转染试剂 加多少

浇筑前应将模板内的垃圾、泥土，钢筋上的油污等杂物清除干净，并检查钢筋的水泥砂浆垫块、塑料垫块是否垫好。如使用木模板时应浇水使模板湿润。柱子模板的扫除口应在清除杂物及积水后再封闭。