糖链测定的方法和步骤

A. 苷中糖的鉴定方法

结构鉴定 1糖的种类和比例 一般是将其苷键全部水解，然后再用纸色谱或薄层色谱的方法检出糖的种类，经显色后用薄层扫描的方法测定出各糖之间的分子比。当然也可采用气相色谱或HPLC的方法对各单糖进行定性定量分析。 2糖与苷元的连接位置 糖连接位置的测定多是将被测物全甲基化，然后水解所有的苷键，用气相色谱的方法对水解产物进行定性定量分析。通常具有游离羟基的部位即是糖的连接位点。目前多用苷化位移来确定。糖的端基羟基成苷后，端基碳（C1）和苷元的α-C的化学位移均向低场移动，而相邻的碳（β-C）稍向高场移动，偶尔也有稍向低场移动的，这种苷化前后的化学位移变化，称做苷化位移。 3糖的连接顺序及位置 早期解决糖链连接顺序的方法主要是部分水解法，即稀酸水解、甲醇解、乙酰解、碱水解等方法，将糖链水解成较小的片段（各种低聚糖），然后根据水解所得的低聚糖推断整个糖链的结构；质谱分析是解决低聚糖及其苷中糖连接顺序的一个有力工具，在了解了糖的组成后，可根据质谱中的裂解规律和该化合物的裂解碎片推测低聚糖及其苷中糖链的连接顺序；现在测定糖链结构最常用的方法是NMR和2D-NMR法。

B. 糖链抗原72-4小于1.500常吗

您好，糖类抗原是肿瘤标志物的一种，是肿瘤的一种筛选指标，从化验结果看，明显高于正常，需要做个腹部彩超，大便常规看一下，如果大便有潜血，还需要做肠镜检查。
胰腺癌、肝胆系癌、胃癌、结直肠癌的CA19-9水平分别是正常均值的683、535、279、115倍。而阳性率以胰腺癌为最高，故CA19-9是胰腺癌较好的标志。
胰腺癌诊断中的应用
大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明显增高。如果以正常参考范围上限（37U/mL）为诊断标准，敏感性和特异性均可达90%以上；
CA19-9水平与肿瘤的阶段有关，血清中含量的高低提示手术的难易程度；
术前CA19-9水平对预后有一定提示作用，低者预后好；
术后CA19-9水平降至正常者生存期长于未下降者；
肿瘤复发时，CA19-9可再度升高，并且发生于影像学诊断之前。因此可用作监测肿瘤的复发。
其他恶性肿瘤
卵巢癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、食管癌、乳腺癌的阳性率较低。应用如下：
胃癌的阳性率约为25%-60%，且与肿瘤分期有关。对于胃癌患者，同时检测CEA可提高阳性率；
直肠、结肠癌患者，阳性率为18%-58%，与肿瘤分期有关。同时测定CEA可提高敏感度，如果治疗有效，CA19-9下降速度较CEA快；
胆囊癌、胆管癌、胆道癌的CA19-9阳性率较高，可用于区别胰腺癌、胆管癌合并的黄疸与阻塞性黄疸。后者的CA19-9水平较低。
使用原则：CA19-9与AFP、CEA联合检查，有助于提高胃肠道肿瘤的诊断效率。

C. 多糖及单糖的测定方法

苯酚-硫酸法需要多糖的纯品和特定的酶。

蒽酮-硫酸法 多糖在浓硫酸水合产生的高温下迅速水解，产生单糖，单糖在强酸条件下与苯酚反应生成橙色衍生物。

在波长490nm左右处和一定浓度范围内，该衍生物的吸收值与单糖浓度呈线性关系，从而可用比色法测定其含量，所用的单糖对照品尽量采用与其多糖组成一致或为含量较高的单糖，这样测得的值较准确。

(3)糖链测定的方法和步骤扩展阅读：

由一种类型的单糖组成的有葡萄糖、甘露聚糖、半乳聚糖等，由二种以上的单糖组成的杂多糖（hetero polysaccharide）有氨基糖的葡糖胺葡聚糖等，在化学结构上实属多种多样。就分子量而论，有从0.5万个分子组成的到超过106个的多糖。

比10个少的短链的称为寡糖。不过，就糖链而论即使是寡糖，在寡糖上结合了蛋白质和脂类的，就整个分子而论，如果是属于高分子。

则从广义上来看也属于多糖，因此特称为复合多糖 （conjugated polysaccharide，complex poly－saccharide）或复合糖质（glycoconjugate）（糖蛋白、糖脂类、蛋白多糖）。

D. 糖链抗原15-3的注意事项

(1) 癌抗原15-3常被用于评价乳腺癌治疗的效果、预测复发与转移的参考指标。术后复发者癌抗原升高较临床症状为早，因此测定癌抗原15-3可预测乳腺癌的复发。(2) 本方法灵敏度为0.2u/ml，测定范围0-240u/ml与其他肿瘤标志物(CEA、CA-19-9及CA-125)无交叉反应。(3) 试剂必须在2-8℃冰箱内保存，取出使用后保存期不宜超过8天(2-8℃)。ELSA管必须在2-8℃密封保存。(4) 样品稀释时宜采用聚乙烯管。(5) 温育过程中，两次洗涤过程要求操作一致，否则影响实验结果。

E. 请教关于糖基化程度的分析方法

糖基化程度的分析过程大致如下：首先是鉴定糖蛋白，即确定糖蛋白的存在；其次是富集糖蛋白，即糖蛋白的分离存化。

糖蛋白的检测大致有以下几种：放射性标记法、分子荧光标记法、电泳法、凝集素标记法、抗体标记法和化学酵素法。

获得糖基化蛋白的方法主要是电泳法和层析法。电泳法即通过电泳的方法先得到糖蛋白条带或蛋白点，再通过电洗脱或透析的方法得到糖蛋白。此方法较为费时，且在操作中易使蛋白变性。而层析法则具有快速、准确、分辨率高、稳定性好等特点，是分析糖蛋白的理想手段。目前，利用抗体、凝集素进行亲和层析已成为分离存化糖蛋白的主要方法。

糖基化氨基酸位点的鉴定中，Edman降解法冗长，需要高超的实验技巧和较多的蛋白质，且无法处理N－端封闭的蛋白质。因此，随着质谱技术的发展，此法已不在被广泛使用。核磁共振技术也可用于糖基化氨基酸位点的鉴定。这种方法可在液态溶液中直接进行蛋白质结构测定。糖链结构的鉴定也采用质谱技术、毛细管电泳技术、气相色谱技术及凝集素亲和技术。