革兰氏染色的步骤及方法

⑴ 革兰氏染色步骤是什么

革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：

1、涂片固定。

2、草酸铵结晶紫染1分钟。

3、蒸馏水冲洗。

4、加碘液覆盖涂面染约1分钟。

5、水洗，用吸水纸吸去水分。

6、加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。

7、蕃红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。干燥，镜检。

原理

通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙；

因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

以上内容参考：网络-革兰氏染色