‘壹’ 全血分离获得血清的方法及步骤 谢谢
材料与方法
1.1 血清采集 MG患者全血来自2004～2005年就诊于辽宁中医学院附属医院的门诊患者。根据典型临床表现、新斯的明试验、低频重复电刺激及单纤维肌电图等确诊，无其他自身免疫性疾病，未经其他免疫抑制治疗，并参照1994年版《中医病证诊断疗效标准》辨证为脾肾虚型。正常人血清取自同时期健康志愿者。-70 ℃冰箱冷冻保存备用。
1.2 主要试剂 固相pH梯度干胶条IPG strip（Amersham公司产品， 非线性pH 3～10， 7 cm）。3-〔3-（胆酰胺基丙基）二甲氨基〕丙磺酸盐｛3-〔（3-cholamidopropyl） dimethylamino〕-1-propanesul-fonate， CHAPS｝，二硫苏糖醇（DL-dithiothreitol， DTT），三丁基膦（tributyl phosphine， TBP），尿素，硫脲，碘乙酰胺（iodoacetamide， IAA），丙烯酰胺（acrylamide）、甲双丙烯酰胺（N， N'-methylenebi-sacrylamide），四甲基乙二胺（N， N， N， N-tetram-ethyl-ethylenediamine， TEMED），过硫酰胺（am-monium persulfate， APS），三羟甲基氨基甲烷〔tris （hydroxymethyl） aminomethane〕、甘氨酸（glycine， Gly）和十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate， SDS）均为Bio-Rad公司产品。琼脂糖为华美生物公司产品。其他试剂均使用国产分析纯试剂。所有溶液均用MilliQ水配制。
1.3 主要仪器 高速冷冻离心机，德国Eppendorf公司产品;EttanTMIPGphorⅡ，Amersham Biosci-ences公司产品;P-2000分光光度仪，Hitachi公司产品;SE-600电泳仪，Amersham公司产品;纯水装置，Millipore公司产品;GS-710光密度扫描仪，Bio-Rad公司产品;冷却水循环系统，Cole-Parmer公司产品;Bruker-Daltonics AutoFlex TOF-TOF LIFTMass Spectrometer，美国Bruker-Daltonics公司产品;LCQ Deca XP Plus，美国Thermo Finnigan公司产品。
1.4 双向电泳
1.4.1 血清总蛋白质的提取及定量 血清-70 ℃反复冻融4次后，用Agilent Multiple Affinity Re-moval Column处理去除高丰度蛋白。使用Agilent 5K超滤管进行浓缩除盐，冻干回收的样品，-70 ℃保存。用裂解液（9 mol/L 尿素、4% CHAPS、 65 mmol/L DTT和cocktail酶抑制剂）进行复溶，并采用考马斯亮蓝法进行蛋白质定量。
1.4.2 等电聚焦 自-20 ℃取出的胶条，室温下平衡10 min，以500 μg上样量在每份样本中加入上样缓冲液（8 mol/L尿素、2% CHAPS、1% Bio-lyte和1% TBP）以及标准蛋白质分子，上样于泡胀槽中，加入矿物油覆盖。程序设置如下:30 V 12 h，500 V 1 h，1 000 V 1 h，8 000 V 6 h。恒温20 ℃。等电聚焦电泳后IPG胶条在平衡液1（Tris-base 50 mol/L 、尿素 6 mol/L、甘油 30%、SDS 2%、溴酚蓝0.002%和DTT 100 mg）中于振荡器上振荡 15 min; 然后置入平衡液2（成分同平衡液1，用 400 mg 碘乙酰胺代替100 mg DTT）同样于振荡器上振荡15 min。
1.4.3 SDS-PAGE垂直电泳 采用12.5%的均匀SDS2聚丙烯酰胺凝胶（水23.2 ml，30%丙烯酰胺溶液32.46 ml，1.5 mol/L Tris-HCl缓冲液pH 8.8 20 ml，10% SDS 0.8 ml，10% APS 0.4 ml，TEMED 3.76 μl，胶总体积80 ml）。将平衡后的IPG胶条移至凝胶的上方，胶条一端放入低分子量蛋白质标准，0.5%的琼脂糖封胶。上下槽加入电极缓冲液（Tris 5 mmol/L，Gly 192 mmol/L和SDS 0.1%）。初始电流为每块胶40 mA，电泳20 min，然后以每块胶60 mA电流，直至溴酚蓝前沿。
1.4.4 银染色 电泳结束后，采用硝酸银染色法，通过固定，硝酸银染色，显影，停显及脱色，至背景清晰。
1.5 图像分析 每个样品常规进行3次二维电泳，用GS-710光密度扫描仪对电泳后的胶图分别进行扫描，所得扫描图像输入计算机，采用Image-master软件对图像进行背景消减、蛋白质点检测和校正，获取蛋白质点的位置坐标和表达量等分析。选取 Ratio ≥1.5的蛋白质点认为有差异。所有数据的统计分析均采用SPSS 12.0软件，统计学分析采用 t 检验。
1.6 基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱分析 用手术刀片切下胶上目标条带，进行切胶、胶上胰蛋白酶酶解 20 h ，抽提酶解肽段，Zip Tip脱盐后点样，行基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry， MALDI-TOF-MS）分析（飞行管长2.7 m，加速电压 20 kV ，反射电压23 kV）。将第1级质谱得到的肽片段质量指纹图谱、肽质量指纹图谱与第2级质谱得到的肽序列信息一起用来检索蛋白质数据库，找出匹配的蛋白质。
1.7 数据库检索 将质谱鉴定所得的肽质量指纹谱（peptide mass fingerprinting， PMF）数据于Bio-Works（Thermo Finnigan， San Jose， CA）软件搜索相应的库。搜索使用的数据库为IPI human蛋白库（SEQUEST结果过滤参数为:当Charge+1，Xcorr≥1.9;当Charge+2，Xcorr≥2.2;当Charge+3，Xcorr≥3.75;其中DelCN≥0.1）以及NCBI上 Homo sapiens的非冗余蛋白库（rendant data-base）。检索参数为胰蛋白酶解;氨基酸固定修饰方式为脲甲基半胱氨酸;模式为单同位素峰;肽片断最大误差控制在100 ppm;肽片断最大分子量误差为±0.5 Da;每个肽允许有1个不完全裂解位点。
2 结果
2.1 脾肾虚型重症肌无力患者血清双向电泳图谱 的建立及分析 经2-DE技术及银染色后，得到了两组血清的双向凝胶电泳图，并于相同的条件下重复实验3次。在正常对照组细胞蛋白质组双向电泳图谱上可观察到1 463±179个蛋白点，而脾肾虚型重症肌无力组可见到1 508±89个蛋白点
‘贰’ 请教最简单的动物血血清提取方法，听老师说，将动物血放进冰箱冷冻，再让其自然融化，表面一层就是血清
不对，最简单最快的方法：取一洁净的试管或一支一次性注射器，将从动物静脉上采血3到5毫升置于试管或直接将一次性注射器抽出去一些留点空间，静置于室温或稍热一些的环境下让其自然凝固很快就会有清亮透明漂亮的血清析出。用吸管轻轻地分离于洁净的小瓶置于冰箱冷藏就行了…要是冷冻再融化就会有部分溶血的呈现出红色。 （要斜一点放置，尽量让其与空气接触面大一点，析出来的就多一点；还有一点就是要静置，不能摇晃。否则就会有溶血出现。） 鸡的血清很好分离，又快又多，牛的很慢。
‘叁’ 血清是怎样制作的
1、采血：达到放血完全，应选择前腔动脉或静脉放血，注意放血部位的消毒和器具的消毒。
2、析出血清：采用静置自然析出方法，将析出的血清收集到经消毒的生理盐水瓶内，一般装到生理盐水瓶容量的三分之二，为了更完全的分离血清，过夜后还会有血清析出，继续收集。
3、杀灭病毒的处理：将收集好的血清，瓶口向上放入水浴锅56℃水浴2小时，病毒经高温后失活，而在该温度时，抗体效价不下降。
4、杀灭细菌，每毫升加2000单位的链霉素和2000单位的青霉素，充分摇均，封口即可使用。
5、存放，不立即使用时，应冷冻保存。
‘肆’ 谁知道血清的分离制备方法和步骤，谢谢！
相信楼主分离血清是用于检测，而不是用于治疗。我告诉你一个简单实用的方法。我这个方法使用的器械主要就是一次性注射器。采血量看你需要的血清量来定，一般据我观察，释出的血清约为全血量的三分之一到二分之一这样。也就是你采5ml血可能得2.5ml左右的血清。当然了，必须说清楚的是能不能释出血清，因方法和猪个体的不同，成功率也就不同，我这个方法的成功率在95%左右。小猪采血在猪的前腔静脉采，直接使用注射器的原装针头，大猪则一般换12×25的针头采用耳背静脉方法采血。血采出来之后保留一段空气在注射器内，盖上针头盖，将注射器针头朝上倒立放置或呈45°角倒立放置，防止受到猛烈振动。将采好的血放置在25℃～50℃的环境中约2小时，血清就释出在上层，这时你就可以小心地将血清推出。主要注意避免采血时受到污染，避免将采得的血放置在过低的温度，温度过低很难释出血清，注意留一段空气在注射器内（留多少空气你自己看情况定，多少都要留一段），注意针口朝上。
‘伍’ 如何从全血中提取血清
最方便的方法
抽出血，一只放着，自然分离！！！
有条件的话用离心机，更加快！！！
‘陆’ 怎样从动物身上提取血清（常规方法）
采血（不加抗凝剂），静置直到血液凝固，然后放到37度半小时，4度过夜，效果还行
‘柒’ 如何在血清中提取DNA
.dna提取的几种方法
(1).浓盐法
利用rnp和dnp在电解溶液中溶解度不同，将二者分离，常用的方法是用1m
氯
纳提取化钠抽提,得到的dnp粘液与含有少量辛醇的
氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间，而dna位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将dna
钠盐沉淀出来.
也可用0.15
mnacl液反复洗涤细胞破碎液除去rnp,再以1mnacl提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
以稀盐酸溶液提取dna
时,加入适量去污剂,如sds可有助于蛋白质与dna
的分离。在提取过程中为抑制组织中的dnase对dna
的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15mnacl,0.015m柠檬钠,并称ssc溶液,提取dna.
（2）.阴离子去污剂法:
用sds或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取dna
.由于细胞中dna与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取dna.
（3）.苯酚抽提法:
苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了dnase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与dna
联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而dna溶于水相。离心分层后取出水层，多次重复操作，再合并含dna
的水相，利用核酸不溶于醇的性质，用乙醇沉淀dna
。此时dna是十分粘稠的物质，可用玻璃漫漫绕成一团，取出。此法的特点是使提取的dna保持天然状态
.
（
4）.水抽提法:
利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去rna，然后将沉淀溶于水中，使dna充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6m.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66%
٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得dna样品.此法提取的dna中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入sds.
‘捌’ 血清RNA提取方法
血清RNA提取，biog的具体操作步骤如下： 1. 请自行准备：无水乙醇、无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出洗涤液，按以下操作：a) 洗涤液A：21mL加入9mL无水乙醇；35mL加入15mL无水乙醇；42mL加入18mL无水乙醇。b) 洗涤液B：9mL加入21mL无水乙醇；15mL加入35mL无水乙醇；18mL加入42mL无水乙醇。c) 配制好的洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。3. 取无RNA酶的1.5mL离心管，加入200μL样本，4μLRNA Carrier混合均匀，再加入300μL 裂解液及20μL 消化液，漩涡震荡10秒，充分混匀，56℃水浴10 分钟至完全裂解。4. 加入1000μL无水乙醇，轻轻颠倒混匀，如有半透明悬浮物，不影响RNA的提取与后续实验。5. 将吸附柱放入收集管内，将760μL上述溶液转入吸附柱内，静置2 分钟，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液.6. 将剩余760μL溶液转移至吸附柱内，重复步骤5。7. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液A至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。8. 将吸附柱放回收集管内，加500μL 洗涤液B至吸附柱内，12,000 rpm 4℃离心1 分钟，弃收集管内废液。9. 将吸附柱放回收集管内，12,000 rpm 4℃离心2 分钟，离去残留的洗涤液。10. 取出吸附柱，放入新的无RNA酶的1.5 mL 离心管内，加入30-50μL 洗脱液，静置3 分钟，12,000 rpm 4℃ 离心2 分钟，收集RNA溶液。11. -70℃保存，或直接用于下一步实验。
‘玖’ 动物的血清的提取一共有几种方法 分别是啥最大提取量的方法是啥 真心求教
一种直接离心。8000----16000转每分钟至少10分钟，取上清液，
第二等它自然系出，夏天可放阴凉处30分，冬天凝固后放温箱37度一小时，
第二种量大