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pod酶测量实验方法

发布时间:2024-07-13 04:13:05

㈠ pod娲绘ф祴涓嶅嚭𨱒

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㈡ pod测定方法

0.5 g叶片加入50 mmol L-1磷酸缓冲液(pH7.8,含2%的聚乙烯吡咯烷酮),研磨,4℃ 8000 r/min离心20 min,上清液定容至5 ml。 POD活性测定按Kraus和Fletcher(1994)方法进行3 ml反应混合液中含0.2%愈创木酚0.95 ml,50 mmol L-1 PBS(pH7.0)1 ml,酶液0.05 ml,0.3%过氧化氢1 ml。记录1 min内470 nm下的光吸收值变化。

㈢ 鍦ㄤ粈涔堟儏鍐典笅镓嶆祴鎶楁哀鍖栭叾娲诲姏

鎶楁哀鍖栭叾锛圫OD銆丳OD銆丆AT锛夋椿镐ф祴瀹氭柟娉 涓銆 瓒呮哀鍖栫墿姝у寲閰讹纸SOD锛夋椿镐ф祴瀹氾纸姘钃濆洓鍞戝厜鍖栬缮铡熸硶锛 1銆佽瘯鍓傜殑閰嶅埗 銆 锛1锛0.05mol/L 纾烽吀缂揿啿娑(PBS锛宲H7.8)锛 A 姣嶆恫锛0.2mol/L 纾烽吀姘浜岄挔婧舵恫: 鍙 Na2HPO4路12H2O锛埚垎瀛愰噺 358.14锛71.7g锛 B 姣嶆恫锛0.2mol/L 纾烽吀浜屾阿阍犳憾娑诧细鍙 NaH2PO4路2H2O锛埚垎瀛愰噺 156.01锛31.2g銆 鍒嗗埆鐢ㄨ捀棣忔按瀹氩瑰埌 1000ml銆 0.05mol/L PBS锛坧H7.8锛夌殑閰嶅埗锛氩垎鍒鍙 A 姣嶆恫(Na2HPO4) 228.75ml锛孊 姣嶆恫(NaH2PO4) 21.25ml锛岀敤钂搁忔按瀹氩硅呖 1000ml銆 鍙傝冩枃鐚锛 鍙傝冩枃鐚锛氭潕钖堢敓涓荤紪锛氭岖墿鐢熺悊鐢熷寲瀹为獙铡熺悊鍜屾妧链.楂樼瓑鏁栾偛鍑虹増绀撅纴2000锛267锝268銆 锛2锛14.5mM 鐢茬~姘ㄩ吀婧舵恫锛氩彇 2.1637g Met 鐢ㄧ7閰哥紦鍐叉恫锛坧H7.8锛夊畾瀹硅呖 1000ml銆 锛3锛30?M EDTA-Na2 婧舵恫锛氩彇 0.001gEDTA-Na2 鐢ㄧ7閰哥紦鍐叉恫瀹氩硅呖 100ml銆 锛4锛60?M 镙搁粍绱犳憾娑诧细鍙 0.0023g 镙搁粍绱犵敤纾烽吀缂揿啿娑插畾瀹硅呖 100ml锛岄伩鍏変缭瀛樸 锛5锛2.25mM 姘钃濆洓鍞(NBT)婧舵恫锛氩彇 0.1840g NBT 鐢 PBS 瀹氩硅呖 100ml锛岄伩鍏変缭瀛樸 閰舵恫鍒跺囷细 锛埚彲瑙嗘儏鍐佃皟鏁达级 镙峰搧 锛堟柊椴滃彾鐗囨垨镙圭郴锛夋礂鍑钖庣疆浜庨勫㖞镄勭爷阍典腑锛 閰舵恫鍒跺囷细鍙 0.2g 锷犲叆 1.6ml 50mmol/L 棰勫㖞镄勭7閰哥紦鍐叉恫 锛坧H7.8锛 鍦ㄥ啺娴翠笂镰旂(鎴愬寑娴嗭纴 杞鍏ョ诲绩绠′腑鍦 4鈩冦 12000g 涓嬬诲绩 20min锛屼笂娓呮恫鍗充负閰舵恫銆 2銆侀叾娲绘ф祴瀹 銆 锛1锛 鍙嶅簲娣峰悎娑查厤鍒(浠 60 涓镙蜂负鍑)锛 鍒嗗埆鍙 Met 婧舵恫 162ml锛 EDTA-Na2 婧舵恫 0.6ml锛 纾烽吀缂揿啿娑 5.4ml锛孨BT 婧舵恫 6ml锛屾牳榛勭礌婧舵恫 6ml,娣峰悎钖庢憞鍖锛 锛2锛夊垎鍒鍙 3ml 鍙嶅簲娣峰悎娑插拰 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