1. 液相色谱柱应该怎样清洗
1.高效液相色谱柱柱子的清洗
即使样品和流动相已做过前处理,也仍难以完成避免柱子受到污染,因此必须对柱子行清洗。清洗应定期进行,如果在短期内分析许多样品,则以每日清洗一次为宜,至少也应一周一次,防止有太多的杂质在柱上堆积。
反相柱的常规洗涤办法是:分别取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱体积(既对于一根4.6mmX25cm的柱来说,通常是50-60ml,而对于9.4mm内经X50cm的柱来说,通常是500-600ml) ,使之通过柱子。然后用流动相平衡(通常仍用20倍柱体积),柱一般将恢复正常。如果选择性仍和以前不一样,则表明还有其他杂质留在柱子里,这时应考虑更加严格的清洗:先用20倍柱体积的水,再用相同体积0.05mol/L硫酸,最后用流动相溶剂。酸洗常能洗下有机溶剂所不能洗下的剩余杂质。在低pH值下做长期(一天或更长)清洗是不适宜的,但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,一般对健合相没有损害。注意,强碱不能用来清洗任何微粒硅胶柱(不论是健合相还是非健合相),因为硅胶骨架会溶解。对于严重污染的反相柱,只能采用再生的方法。
2.高效液相色谱柱柱头空隙的处理
拆下不锈钢烧结过滤器后,检查柱床,常可见柱头塌陷,此时先剔掉无规则床层和带色填料,使柱床呈白色并完全水平,再使甲醇作糊状填料匀浆液,将填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复数次,直到水平,完成了柱的再生。此时,如果柱头孔隙深度小于1cm,可以采用下述局部重装的办法,否则,柱应当完全重装或更换。