固体平板分区划线步骤及培养方法

❶ 土壤中自身固氮菌的分离与培养怎样划线

土壤中自身固氮菌的分离与培养划线方法如下：平板划线分离法，是用接种环在平板培养基表面通过分区划线而达到分离微生物的一种方法。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次做“由点到线”的稀释而达到分离的目的。方法如下:步骤一，倒平板，熔化已经配制好并灭过菌的琼脂培养基，冷却至45℃左右倒平板。水平静置待冷却凝固。
步骤二，将待划线分离的平板倒置于煤气灯的左侧，贴上标签（或做记号），若划线时分区没把握，可在皿底上预先分为四个区。
步骤三，接种环烧红灭菌，并伸入菌种试管内冷却，挑取少量斜面菌苔。
步骤四，左手拿培养皿底，此时皿底尽量与桌面垂直，然后将接种环上的菌种先在平板的A区划3～5条平行线，再烧掉环上剩余的菌种。
步骤五，将烧红的接种环在平板培养基的边缘冷却。然后将平板转动一定角度（约60°），用接种环通过A区向B区做来回平行划线；同样，由B区向C区划线。最后由C区向D区划线。区与区的线条间的夹角最好成120°，这样可使D区的线条与A区线条相平行，并可避免此两区线条接触。最后将平板倒放在培养皿盖中。

❷ 培养基倒平板培养后怎样划线分离

平板划线法分离菌种实验步骤

1、融化培养基

将装有伊红美蓝琼脂培养基的三角瓶放入热水浴中加热至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培养基冷却至50℃左右后，按无菌操作法倒平板(每皿约倒15ml)，平置，待凝。

操作方法：右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用右手手掌和小指将瓶塞轻轻地拨出，瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一条稍大于瓶口的缝隙，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。

3、作分区标志（操作熟练后此步骤可省略） 在皿底用记号划分成4个不同面积的区域，使A<B<C<D，且各区的夹角应为120°左右，以便使D区与A区所划出的线条相平行、美观。

4、划线操作

1)挑取菌样：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样。

2)先划A区：将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划3~4条连续的平行线当作初步稀释的菌源。烧去接种环上的残余菌样。

3)划其余区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转至划线位置，把接种环通过A区(菌源区)而移至B区，随即在B区轻巧地划上6~7条致密的平行线，接着再以同样的操作在C区和D区划上更多的平行线，并使D区的线条与A区平行(但不能与A区或B区的线条接触！)，最后，将左手所持皿底放回皿盖中。烧去接种环上的残菌。

5、恒温培养

将划线后的平板至37℃倒置培养2~3天。

6、挑单菌落

良好的结果应在C区出现部分单菌落，而在D区出现较多独立分布的单菌落。然后从典型的单菌落中挑取少量菌体至试管斜面，经培养后即为初步分离的纯种。

7、清洗培养皿

将废弃的带菌平板作煮沸杀菌后进行清洗、晾干。